Способ получения вакцины против клещевого энцефалита Советский патент 1987 года по МПК A61K39/12 

11349757

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности, в частности к производству вакцинных препаратов.

изобретения является повьше- ние иммуногенности и выхода целевого продукта за счет использования для вырапщвания вируса иной культуры клеток.10

Пример 1. Рекомендованный для производства инактивированной вакцины штамм вируса клещевого энцефаПример 2. Вакцина из КПЗМ серии № 1/6329/1/АООО/ЗУ -С.

Первый сбор вируса из зг.раженной культуры почечной ткани зеленой мартышки № 6329 с титром 10 в 1 мл обрабатывают формалином 1:4000 при 37°С в течение 3 сут с последующим хранением при 4°С 10 сут.

Содержание белка по Несслеру в серии № 1 131 мкг/мл. Для определения МИД берут четыре трехкратных

разведения вакцины (1:3, 1:10, 1:30 лита (,КЭ), штамм Софьин, используют и 1:90). К этим разведениям добавля- для заражения однослойных, стационар- 15 квасцы до 0,2% А1 (ОН) в качестве ных первичных культур клеток трипси- адъюванта. Вакцину вводят четырем визированной ткани почек зеленых мар- группам по 10 мышей на разведение тьшек (культуры КПЗМ) со средой 199 подкожно по 0,5 мл трехкратно. Затем без сыворотки. Культуральную жидкость (КЖ) из зараженных сосудов с клетка- 20 ми КПЗМ многократно -на 3,5,7,9 и 11 дни после заражения сливают и заменяют свежей порцией среды поддержки (без сыворотки), каждый сбор КЖ,

через неделю после третьей инъекции вводят живой вирус КЭ (штамм Абсет- таров) «200 летальных доз, учет результатов опыта через 14 дней после заражения вирусом КЭ. 50%-ная защита вакцинированных мышей соответстсодержащей вирус КЭ, после отбора ко- 25 вует разведению исходной вакцины № 1

1:41,7. Из этих данных следует, что 1 МИД для серии № 1 равна 0,024мп (3,14 мкг белка). Для одной прививочной дозы вакцины в объеме 0,5 мл

нтрольных проб в тот же день подвергают центрифугированию (30 мин при 3000, ), затем частичной очистке с помощью микрофильтрации через фильт- рующие пластины с диаметром пор .450 им (в тангенциальном потешке) и инактивируют формалином 1:2000 при 32°С в течение 72 ч. Отдельные партии вакцины далее сохраняют при 4 С до окончания биоконтроля и объединения в серию вакцины.

После получения удовлетворительных данных биоконтроля - на титры вируса КЭ в исходных сливах КЖ, на микроб30 обычно рекомендуется 30 МИД. антигена, что составляет в данном случае 0,48 мл исходной цельной вакцины. Со- ,держание белка и прививочной дозе вакцины № 1 63 мкг. Следовательно, на 1 мг белка в вакцине № 1 приходится антигена 318 МИД5д. В 1 л вакцины серии № 1 в КПЗМ содержится 2083 прививочные дозы.

35

Пример 3. Вакцина из КПЗМ ную стерильность и отсутствие посто- 4С серии № 2/6329/1/2000/32°С. ронних патогенов (в сливах КЖ, до на- Часть первого сбора вируса из зачала контакта с формалином), а также по окончании опытов на полноту инактивации вируса КЭ в вакцине проводят объединение соответствующих партий вакцины в серию и заключительное стерилизующее фильтрование вакцины через каскад мембранных фильтров с диаметром пор от 1200-800-450 до

раженной культуры почечной ткани зеленой мартышки № 6329 с титром вируса 10 в 1 мл обрабатывают форма- 45 лином 1:2000 при 32°С в течение. 3 сут с последующим хранением при 4°С 10 сут.

Содержание белка по Несслеру в серии № 2 131 мкг/мл. Определение на мышах проводят аналогично примеру № 2. 50%-ная защита мышей, вакцинированных серией № 2, соответству- ет разведению исходной вакцины 1:64,6. Следовательно, одна МИД вакцины

300 нм. .

Готовая серия инактивированной ку- льтуральной вакцины КЭ из вируса, выращенного в культурах КПЗМ, перед выСодержание белка по Несслеру в се рии № 2 131 мкг/мл. Определение MИД на мышах проводят аналогично примеру № 2. 50%-ная защита мышей, вакци нированных серией № 2, соответству- ет разведению исходной вакцины 1:64,6 Следовательно, одна МИД вакцины

50

пуском для применения может быть под- дк серии № 2 равна 0,155 мл. Для одной вергнута, при желании, сорбированию прививочной дозы вакцины в объеме

на гидроокиси алюминия (0,2% А1(ОН) ) или высушена с подходящим наполнителем.

0,5 мл обычно берут 20 МИДд, что со ставляет в данном случае 0,31 мл неразведенной вакцины серии № 2. В таПример 2. Вакцина из КПЗМ серии № 1/6329/1/АООО/ЗУ -С.

Первый сбор вируса из зг.раженной культуры почечной ткани зеленой мартышки № 6329 с титром 10 в 1 мл обрабатывают формалином 1:4000 при 37°С в течение 3 сут с последующим хранением при 4°С 10 сут.

Содержание белка по Несслеру в серии № 1 131 мкг/мл. Для определения МИД берут четыре трехкратных

разведения вакцины (1:3, 1:10, 1:30 и 1:90). К этим разведениям добавля- квасцы до 0,2% А1 (ОН) в качестве адъюванта. Вакцину вводят четырем группам по 10 мышей на разведение подкожно по 0,5 мл трехкратно. Затем

разведения вакцины (1:3, 1:10, 1:30 и 1:90). К этим разведениям добавля- квасцы до 0,2% А1 (ОН) в качестве адъюванта. Вакцину вводят четырем группам по 10 мышей на разведение подкожно по 0,5 мл трехкратно. Затем

через неделю после третьей инъекции вводят живой вирус КЭ (штамм Абсет- таров) «200 летальных доз, учет результатов опыта через 14 дней после заражения вирусом КЭ. 50%-ная защита вакцинированных мышей соответст30 обычно рекомендуется 30 МИД. антигена, что составляет в данном случае 0,48 мл исходной цельной вакцины. Со- ,держание белка и прививочной дозе вакцины № 1 63 мкг. Следовательно, на 1 мг белка в вакцине № 1 приходится антигена 318 МИД5д. В 1 л вакцины серии № 1 в КПЗМ содержится 2083 прививочные дозы.

35

Пример 3. Вакцина из КПЗМ 4С серии № 2/6329/1/2000/32°С. Часть первого сбора вируса из зараженной культуры почечной ткани зеленой мартышки № 6329 с титром вируса 10 в 1 мл обрабатывают форма- 45 лином 1:2000 при 32°С в течение. 3 сут с последующим хранением при 4°С 10 сут.

Содержание белка по Несслеру в серии № 2 131 мкг/мл. Определение на мышах проводят аналогично примеру № 2. 50%-ная защита мышей, вакцинированных серией № 2, соответству- . ет разведению исходной вакцины 1:64,6. Следовательно, одна МИД вакцины

50

дк серии № 2 равна 0,155 мл. Для одной прививочной дозы вакцины в объеме

0,5 мл обычно берут 20 МИДд, что составляет в данном случае 0,31 мл неразведенной вакцины серии № 2. В та

ком количестве вакцины № 2 содержится 40,6 мкг белка. Следовательно, на 1 мг белка в серии № 2 приходится 492 МВДдо . В 1 л вакцины № 2 содержится 3225 прививочных доз.

Пример 4. Вакцина из КПЗМ серии № 3/6329/3/2000/32°С.

Третий сбор вируса из зараженной культуры почечной ткани зеленой мартышки № 6329 с титром вируса 10 в 1 МП обрабатывают формалином 1:2000 при 32°С в течение 3 сут с последующим хранением при 4 С 10 сут. Содержание белка по Несслеру в серии № 3 150 мкг/мл. Определение МИДgQ на мышах проводят аналогично примеру № 2. 50%-ная защита мышей, вакцинированны серией № 3, соответствует разведению исходной вакцины 1:81,3. Следователь но, 1 МВД в объеме 0,5 мл равна 0,0123 мл цельной вакцины №.3, а в 20 МИД-д одной прививочной дозы 0,246 нл неразведенной вакцины № 3.

Известная

неконцентрированная, неочищенная, из вируса на клетках куриного эмбриона (1960-1986 г.)

очишенная, концентрированная (хроматография) , из вируса на клетках куриного эмбриона (1983-1986 г)

Предлагаемая (неконцентрированная, неочищенная, из вируса на КПЗМ)

а)В прививочной дозе этой неконцентрированной, неочищенной вакцины из вируг са на клетках куриного эмбриона в 1 мл содержится 420-1000 мкг белка.

б)В 1 мл очищенной концентрированной вакцины содержится 22-51 мкг белка, в) Возможные колебания зависят от метода определения белка по Несслеру или

по Лоури в различных сериях препарата.

г)Иммуногенность определялась только по методу вычисления индекса резистив- ности. Вакцина имела удовлетворительную иммуногенность при индексе, равном 6,0-8,0.

д)По содержанию антигена, выращенного в единицах , вакцина из КПЗМ-не менее иммуногенна, чем очищенная концентрированная вакцина.

о

5.

Этому количеству вакцины соответствует 36,9 мкг белка. На 1 мг белка в серии № 3 вакцины приходится 542 В 1 л вакцины серии № 3 содержится 4065 прививочных доз.

Сравнительные данные по чистоте, иммуногенности и продуктивности приведены в таблице.

Формула изобретения

Способ получения вакцины против клещевого энцефалита путем вьфащива- НИН вируса в культуре ткани, сбора вируса, инактивации его формалином с последующим фильтрованием, сорбцией и/или высушиванием, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенности и выхода целевого продукта, выращивание вируса осуществляют в культуре клеток почечной ткани зеленых мартышек, а сбор вируса осуществляют многократно с интервалом в 2-3 дня.

Индакс -ре- зистентнос- ти 5,0-7,0

1000

10 коп.

28-38 ()

40 . (после 25- кратной концентрации) 2руб. 92 коп.

21-62 (41,5)

д)

2000-6000 10 коп. (средн.3500) (возможно)

Изобретение относится к микробиологической промьйпленности, в частности к производству вакцинных препаратов. Цель изобретения - повьшение иммуногенности и выхода целевого продукта за счет использования для выращивания вируса иной культуры клеток. Сущность способа сводится к тому, что вирус .клещевого энцефалита выращивают в культуре клеток почечной ткани зеленых мартышек, сбор вируса осуществляют многократно с интервалом в 2-3 дня, затем вируссодер- жащую жидкость инактивируют, фильтруют и сорбируют на носителе. При необходимости вакцину высушивают. 1 табл. оо 4 СО СП