Способ определения закиси азота,выделяемой почвенными микроорганизмами Советский патент 1988 года по МПК C12N1/00 C12Q1/00 

00

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к способам определения закиси азота, выделяемой почвенными микроорганизмами. Целью изобретения является повышение точности определения. Способ заключается в следующем: отбирают пробу почвенного образца, инкубируют на питательной среде в анаэробных условиях в присутствии ацетилена, отбирают газовую фазу, из нее удаляют углекислый газ путем пропускания через фильтрующий материал из гранулированного аскарита и в газовой фазе определяют закись азота газохроматографи- чески. Способ позволяет повысить точность анализа и определить закись азота, вьщеляемую дрожжевыми культурами. 2 табл.

00

11

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к оценке биологической активности почвенных микроорганизмов, а именно к способам определения закиси азота.

Цель изобретения - повышение точности определения.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. Чистые культуры почвенных микроорганизмов выращивают в пенициллиновых флаконах объемом 15 мл содержащих 5 мл соответствующей среды (Гильтая, сусло). После посева флаконы закрывают резиновыми пробками, вытесняют воздух над поверхностью среды аргоном и вводят ацетилен (10 об.%). Флаконы инкубируют при 28°С в течение 3 сут. Отбор газовой пробы (1 мл) проводят стандартным медицинским шприцом (прототип) и анализируют на газовом хроматографе.

Для сравнения в тех же культурах отбор газовой пробы на содержание был проведен предлагаемым способом. Для этого чистые культуры почвенных микроорганизмов выращивают в пенициллиновых флаконах объемом 15мл содержащих 5 мл соответствующей ере- ды (Гильтая, сусло). После посева флаконы закрывают резиновыми пробками, вытесняют воздух над поверхность среды аргоном и вводят ацетилен (1C об среды аргоном и вводят ацетил (10 об.%) Флаконы инкубируют при в течение 1 сут. Газовую пробу (1 мл) отбирают шприцом с прокладкой из аскарита толщиной 1 мм, весом О,А г (фракция 0,3-0,5 мм) и проводят газохромато- графическое определение содержания в ней .

Результаты анализов газовых проб, отобранных двумя способами, представлены в табл. 1 и 2.

Как следует из табл. 1 и 2 в пробах, отобранных стандартным способом (I), закись азота не обнаружена, тогда как пред1 агаемый способ отбора газовой пробы (II) позволяет выявить значительное выделение закиси азота бактериальными и дрожжевыми культурами.

Почвенные дрожжи pp. Cryptococcus и Lipomyces закись азота не выделяют максимальное образование N 0 выявлено у дрожжей pp.Hansenula и Pichia, обладающих активными ферментами ката лазой и прроксидазой ; (табл. 1). Из

ЗА2

табл. 2 следует, что активность де- нитрификации у почвенных бактерий Bacillus sp. снижается во время инкубации, поэтому определять ее целесообразно не позднее 2-3 сут выращивания культуры на питательной среде.

Таким образом, предлагаемый спосо определения количества выделяемой i микроорганизмами закиси азота позволяет значительно повысить точность определения NjO, а также изучать это процесс в динамике. Формула изобретения

Способ определения закиси азота, выделяемой почвенными микроорганизмами, предусматривающий инкубирование образца на питательной среде в анаэробных условиях в присутствии ацетилена с последующим отбором газовой фазы и газохроматографическим i анализом закиси азота в ней,о т л и ч а- ю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности определения, инкубированию подвергают чистую культуру почвенных микроорганизмов, непосредственно в процессе отбора газовой фазы удаляют углекислый газ путем пропускания через фильтрующий материал из гранулированного аскарита. ,Т а б л и ц а 1

Hansenula polymorpha 2733

О

24,0

То же 273А О 26,2 Hansenula sp. 847 . О 4,8 Pichia gui lermondii

3 137013А Таблица 2

8,4 12,1 10,9

9,0

Продолжение табл. 2

N,0, мг/мп, среды

А 1(Г

10

О О О

о о

17,0

13,7

.2

6,6

3,8