Способ количественного определения гликогена в животных тканях Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

со

СП

Од

ас

Изобретение относится к биологии и ветеринарии и может быть использовано для экспрессной оценки качества продуктов убоя животных.

Целью изобретечия является экспрессное получение количественных результатов анализа.

Пример 1. Определение гликогена калориметрическим путем.

Для анализа используют образцы говяжьего мяса. Опытные и сравнительные навески мьшечной ткани по 1,0 г гомогенизируют в течение 15 мин в фарфоровых ступках с добавлением 10 мл раствора трийодида калия, приготовленного на 0,2 М KJ с растворенным в нем до насыщения кристаллическим йодом (сравнительный раствор) и 10 мл раствора трийодида калия, приготовленного так же, как и вьше- указанный, но с содержанием 0,5 мМ HJO (опытный раствор). После гомогенизации каждую из проб переносят в наполовину заполненную песком стек лянную колонку 1000x20 мм и отфильт- ровьшают в режиме отсоса. I Промывание отфильтрованных гомоге натов осуществляют 20 мл петролей- ного эфира, остаток которого удаля- ют из колонок воздушным потоком. Экстракцию адсорбированного на полисахаридах йода осуществляют четырех- хлористым углеродом путем последовательного введения его в колонку малыми объемами по 0,5 мл до полного извлечения йода. Объем собранного экстракта йода доводят до 10 мл и калориметрируют против четыреххлорис того углерода.

Концентрацию йода как в опытном, так и в сравнительном растворе определяют при сопоставлении их экстинк- ций с экстинкциями растворов контрольного концентрационного ряда с заранее заданными количествами йода.

Концентрация йода (Ci), адсорбированного на гликогене, пропорциональна его содержанию в ткани (С) и равна разнице концентраций йода в опытном и сравнительном растворах

(CJ

и (С,р):

Сг со

S

ср

- С,

Полное время анализа гликогена в одном образце ткани соответствует не более 30 мин. Результаты этих оп- редб лений отражены в табл. 1 и сравнены с результатами способа количественного определения гликогена с антроновым реактивом.

Из табл. 1 видно, что данные предлагаемого способа анализа гликогена, выполненные калориметрическим путем, выражаются в мг% адсорбированного гликогеном йода, они пропорциональны таковым способа-прототипа, которые выражены в мг% гликогена. Эта зависимость нелинейная и по математическим расчетам определяется формулой

2

а

У

ах

где у - количество, мг%, гликогена

в исследуемой пробеJ X - количество, мг%, адсорбированного гликогеном йода/ а - коэффициент перевода, равный 0,22.

Таким образом, формула имеет следующий вид ;

0,22 х У

Пересчет по данной формуле представлен в табл. 2.

Пример 2. Определение гликогена в говяжьем мясе электрохимическим путем осуществляют с помощью описанной выше схемы с измерительным прибором :; 195/3 чувствительностью 1,5 X А/дел.

Для анализа применяют окислительный и нейтральный растворы, которые создают на электродах электрохимической системы концентрационный элемент с положительным полюсом на окислительном электроде. При добавлении в

окружающий его раствор йодистого калия потенциал в таком элементе стре- мится к нулю, при достижении которого система готова к анализу. При добавлении гомогенизатов в периэлектродные объемы начинается процесс частичного окисления органического вещества. Содержание периодной кислоты в растворе падает и окислительный электрод приобретает отрицательный заряд, который затем начинает частично компенсироваться в связи с тем, что йод из этого раствора адсорбируется на образовавшемся из гликогена полиальдегиде. В результате

3

описанных процессов показание измерительного прибора устанавливается на некоторой величине, отличной от нуля, обратно пропорциональной количеству гликогена в пробе.

Замер электропотенциала осуществ ляют после 15 мин гомогенизации опыной и контрольной навесок мышечной ткани по 1,0 г с указанными выше растворами объемом по 10 мл. Время определения анализа гликогена электрохимическим путем составляет 15 ми Результаты определений представлены в табл. 2.

Из таблицы 2 видно, что данные определения гликогена электрохимическим путем имеют обратно пропорциональную зависимость по сравнению с базовым способом и выражены в амперах. Эти данные соответствуют уравнению связи

у а + Ьх или X

У - b

где X - количество гликогена в пробе, мг%; у - ток (I), пропорциональный ЭДС

электрохимической системы 1,5 X 10 А/дел X дел;

b - расчетный коэффициент, равный 1779,12;

а - расчетный коэффициент, равный 4,448. Таким образом, формула перевода

электрохимического варианта:

ля

I - 1779,12 -4,448

Пересчет по формуле табл. 2 в строке 13.

для

Формула изобретения

для

Способ количественного определения гликогена в животных тканях, включающий отбор проб, приготовление исследуемого образца, введение в него реагента, проведение химической реакции в оптимальных условиях с последующей оценкой полученных результатов, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса определения, при приготовлении образца его делят на две пробы, при этом в качестве реагента используют три- йодид калия, который вводят в одну пробу в окисленной форме, а в другую - в неокисленной, а оценку результатов осуществляют по разнице количества связавшегося йода.

Таблица 1

Изобретение относится к биологии и ветеринарии и может быть использовано для экспрессной оценки качества продуктов для животных. Целью изобретения является сокращение длительности процесса. Проводят анализ двух одинаковых образцов ткани, обработанных трийодидом калия, один из которых находится в окисленной форме, а другой - в неокисленной. Разница между содержанием адсорбированного образцами йода пропорциональна количеству гликогена и измеряется калориметрическим или электрохимическим способом. 2 табл. с (С (Л

Сравнительная характеристика способов анализа гликогена в мясе

Измеряемые характеристики

Способ с антроновым реактивом

Среднее содержание гликогена в пробе (М), С, мг%

Количество измерений, п Ошибка среднего значения, m Среднеквадратическое отклонение,о Коэффициент варьирования, v Точность среднего, р

Предлагаемый способ (калориметрический)

126,6

5

8,29 18,65 14,73

6,55

Таблица 2 Сравнительная характеристика способов анализа гликогена в мясе

Базовый способ (с антроновым реактивом)

Предлагаемый способ (электрохимический)

Продолжение табл.I

1216 5 17.10

814 5 13,11

934 5 23,0

8

Продолжение табл.2