Способ определения гликогена в тканях животных Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

ю Изобретение относится к мясной промьштенности и может быть использо вано при определении гликогена в тка нях животных на мясокомбинате, мясоконтрольных станциях, ветеринарных лабораториях. Цель изобретения - повышение точности и ускорение процесса исследования путем предварительной фиксации ткани этанолом и проведения гидролиза раствором гидроксида калия и этанолом . Способ осуществляется следующим образом. Отобранные пробы фиксируют, для чего их измельчают и смешивают с 96% этанолом в соотношении 1:2-1:5.Смесь подогревают 2-3 раза до кипения. В таком виде материал может храниться несколько суток, при этом количество гликогена не снижается. У указанной смеси добавляют 30%-ный КОН при соотношении ткани, спирта и щелочи 1:(2-5):(6-12). Гидролиз проводят на кипящей водяной ба не в течение tO-20 мин. После раство рения ткани пробы охлаждают до комнатной температуры и добавляют этиловый спирт, затем центрифугируют в течение 30 мин при 2000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают. Осадок гликогена при необходимости переосаждают спиртом. Затем осадок .растворяют в горячей дистиллированно воде, нейтрализуют в серной кислоте и добавляют на холоду антроновый ре актив. Смесь помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, после чего ох. лаждают до комнатной температуры и колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (620 нм). Расчеты проводят на основании калибровочной кривой, построенной по I стандартным растворам глюкозы,умножая полученное количество на коэффициент 0,9. Пример 1. Навески мьшщ и пе чени по 1 г вносят в центрифуж:ные пр бирки и приливают 3 мл 96% этанола. Смесь подогревают до кипения. Зафиксированные таким образом пробы доставляют в лабораторию для дальнейших исследований. После чего к указанной смеси добавляют 7 мл 30%-ного водного раствора гидроксида калия и проводят- гид ролиз на кипящей водяной бане в тече ние 15 мин (до полного растворения 12 41 тканей). Затем добаз:1ляют 3 мл дистиллированной воды, несколько капель концентрированной серной кислоты и 10 мл этанола 96%, Затем центрифугируют в течение 30 мин при 2500 об/мин, Надосадочную жидкость сливают. Полученный осадок после высушивания растворяют в 5 мл горячей дистиллированной воды, нейтрализуют серной кислотой и добавляют 20 мл антронового реактива (0,2%-ный раствор антрона в серной концентрированной кислоте) , После чего пробирки помещают в водяную баню и кипятят в течение 10 мин, затем охлаждают до комнатной температуры. Содержимое колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром (б20нм). Расчет проводят на основании калибровочной кривой, построенной по стандартным растворам глюкозы, умножая полученное количество на коэффициент 0,9. Полученные результаты свидетельствуют, что транспортировка туш свиней на расстояние 100 км снижает количество гликогена. Предлагаемый ускоренный метод определения, количества гликогена позволяет производить систематический контроль за содержанием гликогена и регулировать качество получаемой продукции,Для исследований отбирали пробы на мясокомбинате. Сразу же часть проб фиксировали согласно предлагаемого способа, а другую часть сохраняли при 3-4°С. Количество гликогена ог-ределяли сразу же после отбора проб и через 6 и 24 ч предлагаемым способом и известным. Результаты приведены в табл. 2,

Таблица 2

Изобретение относится к области мясной промьшшенности и может быть использовано при определении гликогена в тканях животных. Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа. Пробы измельчают, смешивают с этанолом и подогревают. К указанной смеси добавляют щелочь. Гидролиз проводят на кипящей бане. Затем ткани охлаждают, добавляют этиловый спирт и смесь центрифугируют. Осадок растворяют, нейтрализуют в серной кислоте и добавляют на холоду антроновый реактив. Смесь помещают в кипящую водяную баню. После охлаждения смесь колориметрируют. Расчеты проводят на основании калибровочной кривой. 2 табл.

отбора проб 6 ч 24 ч Полученные результаты исследовани показали, что предлагаемый способ повышает достоверность количественно го определения гликогена в тканях, так как устраняет потери гликогена в период доставки материала для исследования и сокращает время исследования за счет ускорения гидролиза с 2-х и более часов до 10-20 мин. Метод доступен для выполнения в производственной лаборатории и может быть рекомендован для широкого приме нения. Формула изобретения Способ определения гликогена в тканях животных путем щелочного гид212,6±20,6

188,3+40,1 210,3±19,5

126,5±22,7 208,0+14,6

48,7±18,4 ролиза ткани, осаждения гликогена спиртом, растворения осадка, нейтрализации и обработки его раствором антрона с последующей колориметрией, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности и ускорения процесса исследования, ткань предварительно фиксируют этанолом в соотношении ткани и этанола (1:2)-(1:5), подогревают до кипения, а гидролиз проводят 25-35%-ным раствором гидроксида калия и этанолом в соотношении ткани , этанола и гидрооксида калия 1: (2-5):(6-12) в течение 6-20 мин.