Способ определения нефропатии при нарушении кровообращения Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

со

д со

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, и может быть использовано для ранней диагностики дегенеративных и дистрофических изменений канальцевого аппарата почек вследствие их ишемического повреждения у больных гипертонической болезнью, хронической недостаточностью кровообращения, диабетическим нефро- ангиосклерозом, вследствие приема нефротоксических препаратов, при хронических гломерулонефритах, пие лонефритах, других возможных приобре- TeijHMx или врожденных канальцевых нарушениях.

Целью изобретения является раннее выявление гипоксической формы н.ефро- патии за счет того, что в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием в качестве субстрата ct-нафтилацетата, определяют их электрофоретическую подвижность относительно бромфеиолового синего и при появлении изоферментов с электрофо- ретической подвижностью 0,25 и менее диагностируют гипоксическую форму нефропатии.

Способ осуществляют следующим образом.

Проводится сбор утренней мочи, ее предварительная микроскопия (наличие форменных элементов или сперматозоидов), центрифугирование 20 мин при 3000 об/мин с целью осаждения клеточных элементов, моглцих служить источником ферментативной активности. Затем проводят диск-электрофорез мочи в полиакриламидном геле по методу Орнстейн-Дениса.с использованием 5% разделяющего геля в аппарате ПЭФА-1, с ТРИСГЛИ1ЩНОВЫМ буфером ,3 для электродных сосудов, в который добавляется краситель бромфениловый синий (5,0 мл 0,001%-ного р-ра на 500,0 мл буфера), по отношению к ЭФ-подвижнос- ти которого идентифицируются фракции эстераз. Моча (0,1 мл) наносится в стеклянные трубки вместе с сефадек- сом Г-50. Электрофорез проводится при силе тока 4 мА на каждую трубку. После электрофореза столбики геля опускают на 15 мин в инкубационную смесь, предварительно профильтрованную, следующего состава: 5 мг ос-нафтилацетата в 0,3 мл 50%-ного ацетона, 10 мг Фаст Влю Б соли,

10 мл 0,2 Мфосфатного буфера ,0 при .

Сгущение мочи в 25 раз с помощью диализа против полиэтиленгликоляМ.В. 20000 существенно не влияло на результаты исследования.

Сьшоротка крови исследуется аналогичным способом. Для получения рактов из органов, кусочек почечной ткани предварительно многократно отмывали от крови дистиллированной водой добела, гомогенизировали с помощью стеклянного пестика, заливали на 24 ч физиологическим раствором и ставили в холодильник, затем центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин и экстракт подвергали электрофорезу.

Пример 1. Больной Т., 63 лет с диагнозом острого трансмурального

переднего инфаркта миокарда. В первый день болезни эстеразы в моче не выявились. Затем у больного развился кардиогенный шок, анурия, фибрилляци.я желудочков. После успешньк реанимационных мероприятий на второй день в моче стали определяться медленные фракции эстераз (V-VJ), исчезнувшие через пять дней.

П р и м е р 2, Больная Ж., 57 лет,

с диагнозом ревматизм, активность J, сочетаниый митральный порок с преобладанием стеноза. После приема фурасе- мида на .фоне лечения сердечными глико- зидами появилась тошнота, частая

экстрасистолия, суточный диурез составил всего 700 мл. В моче до приема диуретиков эстеразы не определялись, после них в-порциях мочи, собранных через 4 и 8 ч, отмечено появление

медленной фракции эстеразы (V).

Таким образом, в первом случае, . где можно было ожидать повреждение почек вследствие циркуляторной ишемии, и во втором случае вследствие побочного действия фурасемида в моче отмечено появление медленных изоферментов эстераз с ЗФ-подвижностью 0-,22 и 0,25; 0,22; 0,14; 0,11; 0.09.

Исследование предлагаемым способом 255 больных с различными заболеваниями (гипертонической болезнью, хронической недостаточностью кровообращения , инфарктом почек, острым

инфарктом миокарда, гломерулонефрита- ми, пиелонефритами, диабетическим нефроангиосклерозом, гипоксии у новорожденных детей) показало, что с его помощью можно выявлять ранние изменения в почках, обусловленные ите- мическими и токсическими повреждениями канальцевого аппарата. .

Предпагаемый способ прост, не требует количественных изменений и соответствующей аппаратуры, поскольку является качественной реакцией (наличие или отсутствие медленных изо- ферментов эстераз в моче), для его выполнения требуются стандартные наборы реактивов и выпускаемый - ленностью аппарат для электрофореза .(ПЭФА-1), он основан на известных теоретических предпосыпках и обоснован экспериментальными исследованиями.

Формула изобретения

Способ определения нефропатии при нарушении кровообращения путем исследования мочи, отличающий- с я тем, что, с целью раннего выявления гштоксической формы нефропатии, в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием в качестве субстрата oi-нафтилацетата, определяют их электрофоретическую подвижность относительно бромфенилового синего и при появлении изофермента с электро- форетической подвижностью 0,25 и менее диагностируют гипоксическую форму нефропатии.

Для раннего выявления гипокси- ческой формы нефропатии в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием в качестве субстрата в6 нафтилацетата. Определяют их элект 5офоретическую подвижность относитель но бромфенолового синего. При появлении изоферментов с электрофорети- ческой подвижностью 0,25 и менее диагностируют заболевание.