СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПОЧЕК Российский патент 2002 года по МПК G01N33/53 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к нефрологии, и может быть использовано для улучшения диагностики нефропатий, дифференцальной диагностики гломерулопатий, бактериальных и абактериальных тубулоинтерстициальных нефритов.

Известен способ диагностики состояния нефрона при помощи разделения белка мочи на отдельные фракции методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецил сульфатом натрия (1).

Данный метод используется для определения уровня поражения нефрона (клубочек, каналец или их сочетание). При этом выделяют клубочковый, канальцевый или смешанный тип протеинурии.

Поражение клубочков диагностируется в том случае, если в выделенных фракциях белка мочи преобладают альбумины (молекулярная масса 67 кДа) и высокомолекулярные белки (молекулярная масса выше 67 кДа). Канальцевый тип нарушений устанавливается, если в уропротеинограмме присутствуют низкомолекулярные белки - микроглобулины (молекулярная масса ниже 40 кДа). Смешанное поражение (клубочков и канальцев) выявляется в случае присутствия в уропротеинограмме и высокомолекулярных и низкомолекулярных белков (2).

Однако недостатком данного способа является трудность интерпретации степени поражения различных отделов нефрона (клубочка, канальца), особенно при умеренной и минимальной протеинурии (менее 2,5 г/сутки).

Цель настоящего изобретения состоит в повышении точности диагностики степени поражения различных разделов нефрона при нефропатиях (гломерулонефрит, пиелонефрит, тубулоинтерстициальный нефрит).

Указанная цель достигается тем, что при проведении исследования белков мочи методом автоматизированного электрофореза в полиакриламидном геле с додецил сульфатом натрия, нами получено до 30 белковых фракций в диапазоне молекулярных масс от 10 до 330 кДа, включающего в себя клубочковые и канальцевые протеины. По их соотношению можно определить уровень и степень поражения различных отделов нефрона.

При молекулярной массе 25-57 кДа (α₁-микроглобулин и α₁-кислый гликопротеид) и 58-75 кДа (преальбумин, альбумин, постальбумин) поражения почек не отмечалось. При молулярной массе 58-75 кДа (преальбумин, альбумин, постальбумин), 76-160 кДа (трансферрин, мономер Тамм-Хорсфалл белок, мономер ТНР (Tamm-Horsfall-Protein), гаптаглобин, димерный A₁, Jg G), 161-330 кДа (фракция иммуноглобулинов) выявлялись гломерулопатии. При молекулярной массе 10-24 кДа (γ-следовой протеин, β₂-микроглобулин, рибонуклеаза, лизоцим, мономерный гемоглобин, ретинол-связывающий белок), 58-75 кДа (преальбумин, альбумин, постальбумин), 76-160 кДа (трансферрин, мономер ТНР (Tamm-Horsfall-Protein), гаптаглобин, димерный A₁, иммуноглобулин G) и 161-330 кДа (фракция иммуноглобулинов) - определялось сочетанное поражение клубочков и канальцев, т. е. гломерулонефрит с тубулоинтерстициальным компонентом. При выделении уропротеинов молекулярной массы 10-24 кДа (γ-следовой протеин, β₂- микроглобулин, рибонуклеаза, лизоцим, мономерный гемоглобин, ретинол-связывающий белок), 25-57 кДа (α₁-микроглобулин и α₁-кислый гликопротеид), 58-75 кДа (преальбумин, альбумин, постальбумин), 76-160 кДа (трансферрин, мономер ТНР (Tamm-Horsfall-Protein), гаптаглобин, димерный A₁, иммуноглобулин G) - тубулоинтерстициальные нефриты и тубулопатии.

Исследование белка мочи проводилось методом автоматизированного электрофореза в градиентном 8-25% полиакриламидном геле с детергентом додецил сульфатом натрия на аппарате Phast System (фирмы Pharmasia, Sweden). Обработка полученных уропротеинограмм осуществлялась с помощью сканера Sharp JX 330, персонального компьютера IBM PC с использованием коммерческой программы "Image Master". При статистической обработке результатов исследования для определения достоверности различий показателей использовался критерий t Стьюдента. Различия считались статистически значимыми при р<0,05.

Исследования были проведены у 350 детей (25 здоровых и 325 с различными видами нефропатий: гломерулопатиями первичными и вторичными, тубулоинтерстициальными нефропатиями - пиелонефритом, тубулопатиями, тубулоинтерстициальным нефритом).

Критериями оценки состояния нефрона явились различные сочетания выделенных 5 классов уропротеинов.

1. Класс микропротеинов (молекулярная масса 10-24 кДа). Среди них установлены следующие белковые фракции: γ-следовой протеин, β₂-микроглобулин, рибонуклеаза, лизоцим, мономерный гемоглобин, ретинол-связывающий белок.

2. Класс - средние микропротеины (молекулярная масса 25-57 мДа). К ним относятся α₁-микроглобулин и α₁-кислый гликопротеид.

3. Класс - альбумины (молекулярная масса 58-75 кДа). Сюда включается преальбумин, альбумин, постальбумин.

4. Класс - среднемолекулярные глобулины (молекулярная масса 76-160 кДа). Эти белки следующего состава: трансферрин, мономер ТНР (Tamm-Horsfall-Protein), гаптаглобин, димерный A₁, Jg G.

5. Класс включал высокомолекулярные протеины (молекулярная масса 161-330 кДа). Он состоял из фракции иммуноглобулинов. (табл. 1).

При этом установлено 10 видов уропротеинограмм (табл. 2).

1-й и 2-й тип уропротеинограмм присущ здоровым детям. 3-й, 4-й, 6-й, 9-й - для гломерулопатий. 5-й, 8-й и 9-й - для сочетанного поражения клубочков и канальцев, т.е. гломерулонефритов с тубулоинтерстициальным компонентом, 7-й тип уропротеинограмм присущ в основном тубулоинтерстициальным нефритам и тубулопатиям.

Как видно из табл. 3, разные виды уропротеинограмм определяют степень дисфункции клубочков и канальцев.

Выявление только класса альбуминов являлось клубочковым физиологическим, сочетание альбуминов и среднемолекулярных глобулинов указывало на клубочковую протеинурию с умеренной дисфункцией клубочков, сочетание альбуминов, среднемолекулярных глобулинов и высокомолекулярных протеинов свидетельствовало о выраженной дисфункции клубочков.

Наличие в уропротеинограмме из микропротеинов только средних микропротеинов свидетельствовало о минимальной дисфункции канальцев, определение в УПГ только класса малых микропротеинов свидетельствовало об умеренной дисфункции канальцев, выявление сочетанной экскреции двух классов микропротеинов (малых и средних) свидетельствовало о выраженной дисфункции канальцев.

Пример:
Женя С., 14 лет. История болезни: 7014.

С 3-летнего возраста беспокоят боли в боку. В 1990 году был прооперирован по поводу гидронефроза слева. Операция была эффективной. Контрольные анализы мочи с 1990 по 1995 г.г. - без патологии. Поступил в стационар для контрольного обследования. В ан. мочи по Каковскому-Аддису: белок - (-), л - 5,2•10•6 (н>80%), эр (-); в пробе по Зимницкому - при диурезе 1233 мл, удельный вес - 1033; проба КОК - на 1,73 м² - 342 мл/мин. При минутном диурезе - 3,3 мл. На УЗИ - правая почка в норме; левая почка - ч.л.с, раздроблена, расширена в области лоханки. На урограммах - состояние после эффективной операции по поводу гидронефроза слева, стабилизация процесса. Транзиторно выявлялась протеинурия до 0,231 г/л, АД до 130/75 мм рт. ст. На уропротеинограммах: определялись белковые фракции молекулярной массой 58-75 кДа, относящиеся к классу альбуминов (альбумин, постальбумин), и молекулярной массой 76-160 кДа, относящихся к классу среднемолекулярных глобулинов (JgG и др.); что говорит о клубочковой протеинурии с умеренной дисфункцией клубочков, дисфункция канальцев отсутствовала.

Данный пример указывает, что несмотря на клинико-лабораторную ремиссию пиелонефрита, отсутствие признаков сморщивания левой почки, данные уропротеинограммы указывают на поражение клубочков почки.

В связи с этим ребенок подлежит наблюдению, назначению терапии, направленной на уменьшение внутриклубочкового давления (например, ингибиторы ангиотензинконвертирующего фермента).

Таким образом, положительный эффект изобретения заключается в повышении точности диагностики поражения различных отделов нефрона (клубочка, канальца), особенно в тех случаях, когда затруднено проведение биопсии.

Литература
1. Cooper E. W. , Jackson B.J. Rapid analisis of proteinuria usiny SDS gratent PAGE and Applicatia of phast system electrophoresis in the animals of proteinuria // Ann. Clin. Biochem - 1987 - suppl. - v. 24, p. 122-123.

2. Pesce A. J. , Boreisha I., Poolac V. E. Rapid differentiation of glomerular and tubular proteinuria by sodium dodecyl sulfate poliacrylamide gel electrophoresis. // Clin. Chim. Acta. - 1972 - vol. 40 - p. 27-34.

Изобретение относится к медицине, в частности к нефрологии. Способ обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики заболеваний почек. Проводят исследование белков мочи методом автоматизированного электрофореза в градиентном 8-25% полиакриламидном геле с детергентом додецил сульфатом натрия, при этом белковые фракции исследуют в диапазоне мол. м. от 10 до 330 кДа и при сочетании белковых фракций мол. м. 25-27 кДа - α₁-микроглобулин, α₁-кислый гликопротеид и 58-75 кДа - преальбумин, альбумин, постальбумин диагностируют норму, а при выделении белковых фракций мол. м. 58-75 кДА - преальбумин, альбумин, постальбумин, 76-160 кДа - трансферрин, мономер ТНР, гаптоглобин, димерный А1, иммуноглобулин G и 161-330 кДа - фракция иммуноглобулинов диагностируют гломерулопатии, при сочетании белковых фракций мол. м. 10-24 кДа - γ-следовый протеин, β2-микроглобулин, рибонуклеаза, лизоцим, мономерный гемоглобин, ретинол-связывающий белок, 58-75 кДа - преальбумин, альбумин, постальбумин, 76-160 кДа - трансферрин, мономер ТНР, гаптоглобин, димерный А1, иммуноглобулин G и 161-330 кДа - фракция иммуноглобулинов - диагностируют сочетанные поражения клубочков и канальцев, то есть гломерулонефрит с тубулоинтерстициальным компонентом, при выделении уропротеинов мол. м. 10-24 кДа - γ-следовый протеин, β2-микроглобулин, рибонуклеаза, лизоцим, мономерный гемоглобин, ретинол-связывающий белок, 25-27 кДа - α₁-микроглобулин, α₁-кислый гликопротеид, 58-75 кДа - преальбумин, альбумин, постальбумин, 76-160 кДа - трансферрин, мономер ТНР, гаптоглобин, димерный А1, иммуноглобулин G диагностируют тубулоинтерстициальные нефриты и тубулопатии. 3 табл.

Способ дифференциальной диагностики заболеваний почек, включающий исследование белков мочи методом автоматизированного электрофореза в градиентном 8-25% полиакриламидном геле с детергентом додецил сульфатом натрия, отличающийся тем, что белковые фракции исследуют в диапазоне мол. м. от 10 до 330 кДа и при сочетании белковых фракций мол. м. 25-27 кДа - α₁-микроглобулин, α₁-кислый гликопротеид и 58-75 кДа - преальбумин, альбумин, постальбумин диагностируют норму, а при выделении белковых фракций мол. м. 58-75 кДа - преальбумин, альбумин, постальбумин, 76-160 кДа - трансферрин, мономер ТНР, гаптоглобин, димерный Al, иммуноглобулин G и 161-330 кДа - фракция иммуноглобулинов диагностируют гломерулопатии, при сочетании белковых фракций мол. м. 10-24 кДа - γ следовой протеин, β2-микроглобулин, рибонуклеаза, лизоцим, мономерный гемоглобин, ретинол-связывающий белок, 58-75 кДа - преальбумин, альбумин, постальбумин, 76-160 кДа - трансферрин, мономер ТНР, гаптоглобин, димерный Al, иммуноглобулин G и 161-330 кДа - фракция иммуноглобулинов - диагностируют сочетанные поражения клубочков и канальцев, то есть гломерулонефрит с тубулоинтерстициальным компонентом, при выделении уропротеинов мол. м. 10-24 кДа - γ следовой протеин, β2-микроглобулин, рибонуклеаза, лизоцим, мономерный гемоглобин, ретинол-связывающий белок, 25-27 кДа - α₁-микроглобулин и α₁-кислый гликопротеид, 58-75 кДа - преальбумин, альбумин, постальбумин, 76-160 кДа - трансферрин, мономер ТНР, гаптоглобин, димерный Al, иммуноглобулин G диагностируют тубулоинтерстициальные нефриты и тубулопатии.