Способ количественного определения белка Советский патент 1988 года по МПК G01N33/02 

00

оо

со

ю

о

10

15

Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии, биохимии и касается определения белка в растворах и экстрактах из различных биологических объектов.

Цель изобретения - сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода.

Оптическая плотность не изменяется в течение 1 ч и более длительного времени и воспроизводится при повторных анализах в следствие того, что достигается плато оптической.плотности.

В табл. 1 - 3 приведены средние данные из трех определений содержания белка, полученные согласно предлагаемому способу, и контрольные данные согласно известному способу. 2о

Пример 1. В пробирку помещают 1 мл щелочного экстракта (0,5 н. NaOH) белка концентрацией 5-80 мкг/мл из растертых листьев и клубеньков сои и добавляют 5,0 мл медно-карбонатного реактива, содержащего, %: 2; , трехзамещенный лимонно-кислый Na 0,02; CuS04-5H50 0,01. Пробирки ставят в водяную баню температурой 98°С на 15 с, затем быстро добавляют 0,5 мл 1 н. фенольного реагента Фоли- на-Чиокалтеу, энергично встряхивают и снова помещают в водяную баню температурой 98°С на 30 с. Пробы охлаждают в воде и измеряют опт ическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометре при длине волны

750 нм. I

Контроль. Аликвоты щелочного экс25

30

теиновым комплексом (2-я реакция) создаются условия, когда достигается максимальная величина оптической плотности, что обеспечивает достаточную чувствительность метода (5 мкг/ /мл), 0,5 мл 1 н. раствора Фолина- Чиокалтеу выдерживают в термостате при 37°С 30 мин.

П р и м е р 2. Осуществляют так же, как в примере 1, за исключением того, что в качестве проб берут ще- -лочные экстракты из дрожжей Candida valida и Candida didensii, время проведения 1-й реакции 10 с 2-й реакции 35 с. Температура водяной бани .

П р и м е р 3. Осуществляют так., же, как в примере 1, за исключением того, что в качестве проб берут щелочной экстракт из биомассы Penicil- lium sizovae, время проведения 1-й реакции 10 с, 2-й реакции 40 с. Температура .водяной бани 99°С.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет проводить количественное определение содержания белка в пробах в течение не более двух минут, что в 7,5 раза быстрее известного ускоренного метода определения белка, причем полученные данные практически не отличаются от результатов, полученных известными методами.

35 Формула изобретения

Способ количественного определения белка, предусматривающий отбор , пробы, смешивание с медно-карбонат- тракта белка согласно известному спо-до ным реагентом, выдерживание, после- собу после добавления 5 мл медно-карбонатного реактива выдерживают при комнатной температуре 15 мин, а затем после добавления (используют исключительно короткие интервалы време- лью сокращения времени анализа при ни и высо1кие температуры для проведения реакций образования медно-протеи- нового комплекса при взаимодействии ансшизируемого белка с медно-щелочным реактивом - 1-я реакция) и последующего восстановления реактива Фолина- Чиокаптеу образовавшимся медно-продующее нагревание с реактиво1% Фолина- Чиокалтеу и измерение оптической плотности окрашенного раствора, о т- личающийся тем, что, с це50

сохранении воспроизводимости и чувствительности ме/года, выдерживание пробы, смешанной с медно-карбонатным реагентом, и последующее нагревание с реактивом Фолина-Чиокалтеу проводят в кипящей водяной бане в течение 10-15 и 30-40 с соответственно.

0

о

5

0

теиновым комплексом (2-я реакция) создаются условия, когда достигается максимальная величина оптической плотности, что обеспечивает достаточную чувствительность метода (5 мкг/ /мл), 0,5 мл 1 н. раствора Фолина- Чиокалтеу выдерживают в термостате при 37°С 30 мин.

П р и м е р 2. Осуществляют так же, как в примере 1, за исключением того, что в качестве проб берут ще- -лочные экстракты из дрожжей Candida valida и Candida didensii, время проведения 1-й реакции 10 с 2-й реакции 35 с. Температура водяной бани .

П р и м е р 3. Осуществляют так., же, как в примере 1, за исключением того, что в качестве проб берут щелочной экстракт из биомассы Penicil- lium sizovae, время проведения 1-й реакции 10 с, 2-й реакции 40 с. Температура .водяной бани 99°С.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет проводить количественное определение содержания белка в пробах в течение не более двух минут, что в 7,5 раза быстрее известного ускоренного метода определения белка, причем полученные данные практически не отличаются от результатов, полученных известными методами.

Способ количественного определения белка, предусматривающий отбор пробы, смешивание с медно-карбонат- ным реагентом, выдерживание, после- лью сокращения времени анализа при

дующее нагревание с реактиво1% Фолина- Чиокалтеу и измерение оптической плотности окрашенного раствора, о т- личающийся тем, что, с цеСпособ количественного определения белка, предусматривающий отбор пробы, смешивание с медно-карбонат- ным реагентом, выдерживание, после- лью сокращения времени анализа при

сохранении воспроизводимости и чувствительности ме/года, выдерживание пробы, смешанной с медно-карбонатным реагентом, и последующее нагревание с реактивом Фолина-Чиокалтеу проводят в кипящей водяной бане в течение 10-15 и 30-40 с соответственно.

13832014

Таблица 1

Образец Содержание белка, мкг/мл, по способу

известному предлагаемому - Ь770 57 0

254,0 55,0

368,5 68,5

459,2 60,0

535,336,4

Таблица2

Образец Содержание белка, мкг/мл, по способу

известному предлагаемому

1 , , О

,746,2

335,536;5

449,650,1

550,151,3

650,249,7

745,046,0

852,453,6

945,7 45,9

ТаблицаЗ

Изобретение относится к микробиологии и может найти применение при количественном определении белка в растворах и экстрактах из различных биологических объектов. Целью изобретения является сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода. Щелочной экстракт белка из растертых листьев и клубеньков сои помещают в пробирку и добавляют медно-карбонат- ный реактив, содержащий 2% , 0,02% трехзамещенного лимонно-кисло- го Na и 0,01% . ЗН,0. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 98°С на 10-15 с с последующим введением 0,5 мл 1 н. фенольного реагента Фолина-Чиокалтеу и вьщержкой в водян сй бане при 98 с в течение 30-40 с. Пробу охлаждают в воде и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометре при длине волны 750 нм. Количественное определение белка осуществляют в зависимости от измеренных значений оптической плотности. 3 табл. S (Л

азец

Ч« « I

Содержание белка, мкг/мл, по способу

:1

известному предлагаемому

48,5 41,1 31,9 50,3 43,2

50,0 42,0 33,6 49,9 43,1

п

50,0 42,0 33,6 49,9 43,1