Способ определения содержания плазминогена в плазме крови Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

оо

00

сг: со

11386902

Изобретение относится к способам определения биологически активных соединений и может быть использовано

в гематологии, физиологии, биохимии, кардиологии.

Целью изoбpeteния является повьппе- ние универсальности и точности способа при определении у животных.

плазминогена соответствует среднему значения диапазона. К О,1 мл разве- д енной плазмы добавляют 0,05 мл (200 ME) стрептокиназы и 0,05 мл 50%-ной эуглобулиновой фракции, инку бируют 7 мин при комнатной температу ре, добавляют 4%-ный раствор казеина смесь инкубируют 2 ч при 37°С, реакц

К плазме крысы, разведенной физио-jo останавливают хлорной кислотой,цент20

25

30

логическим раствором в соотношении 1:7-1:24, добавляют одинаковое количество взятых в равных соотношениях растворов эуглобулиновой фракции, которую вьделяют из плазмы крови человека известным способом и разводят боратным буфером до 25-75%-ной концентрации, и стрептокиназы в концентрации 150-400 ME,

Пример 1, Плазму крысы разводят физиологическим раствором в соотношении 1:7, т,е, концентрация плазминогена соответствует верхней границе допустимого диапазона. К 0,1 мл разведенной плазмы добавляют 0,05 мл (400 НЕ) стрептокиназы и 0,05 мл 75%-ной эуглобулиновой фракции из плазмы человека, инкубируют 10 мин при комнатной температуре, добавляют 5%-ный раствор казеина, смесь инкубируют 3 ч , реакцию останавливают хлорной кислотой, центрифугируют при 12 тыс, об/мин и спектрофо- тометрически определяют продукты расщепления казеина плазмином,Уровень .плаэминогена в плазме крыс получают равным 26 КЕ,

Пример 2, Плазмы крысы разводят физиологическим раствором в со- . отношении 1:24, т,е, концентрация : плазминогена соответствует нижней границе допустимого диапазона. К 0,1 мл разведенной плазмы добавляют 0,05 мл (150 ME) стрептокиназы и 0,05 мл 25%-ной эуглобулиновой фракции из плазмы человека, инкубируют 6 мин при комнатном температуре, добавляют 3%-ный раствор казеина, смесь инкубируют 1 ч при 36°С, реакцию останавливают хлорной кислотой, центрифугируют 50 при 8 тыс,об/мин и определяют продукты расщепления казеина на спектрофотометре. Уровень плазминогена получают равным 22 КЕ.

55

Пример 3, Плазму крысы разводят физиологическим раствором в сем- отношении 1:19, т.е. концентрация плачрифугируют при 10 тыс,об/мин и спект рофотометрически определяют продукты расщепления казеина плазмином. Уровень плазминогена получают равным 5 27 КЕ, что соответствует, максимальному значению концентрации плазминогена в плазме крыс.

35

45

Повьшение точности способа дости гается тем, что добавление в пробу, содержащую стандартные количества стрептокиназы, такой же конструкции эуглобулиновой фракции человека приводит к образованию постоянных количеств активатора, а также подбором соответствующего разведения исследуе мой плазмы. Это дает возможность пол чать точные и хорошо воспроизводимые результаты с высокой статистической достоверностью, которые отражают истинное содержание плазминогенав крови

Повьш1ение универсальности достига ется тем, что использование эуглобулиновой фракции человека устраняет видовую специфичность стрептокиназы и позволяет определять содержание плаз миногена не только в крови человека, но и в крови целого ряда животных. Это особенно важно для тех видов,.у которых резко выражена видовая специ фичность и определение содержания плазминогена со стрептокиназой практ чески невозможно.

Результаты определения содержания плазминогена в крови человека и живо ных предложенным способом: человек - 17 КЕ ± 0,5; кролик - 19 КЕ+0,3; со бака - 20 КЕ t 0,3; крыса- 24,5 КЕ t .}-0,3; бык - 11 КЕ ± 0,К Формула изобретения

Способ определения содержания плаз миногена в плазме крови, заключающийся в обработке разведенной физиологическим раствором плазмы крови растворами стрептокиназы и добавлении казеи ка, инкубации, добавлении хлорной кис лоты с последующим спектрофотометплазминогена соответствует среднему значения диапазона. К О,1 мл разве- д енной плазмы добавляют 0,05 мл (200 ME) стрептокиназы и 0,05 мл 50%-ной эуглобулиновой фракции, инкубируют 7 мин при комнатной температуре, добавляют 4%-ный раствор казеина, смесь инкубируют 2 ч при 37°С, реакцию

останавливают хлорной кислотой,центрифугируют при 10 тыс,об/мин и спект- рофотометрически определяют продукты расщепления казеина плазмином. Уровень плазминогена получают равным 27 КЕ, что соответствует, максимальному значению концентрации плазминогена в плазме крыс.

Повьшение точности способа достигается тем, что добавление в пробу, содержащую стандартные количества стрептокиназы, такой же конструкции эуглобулиновой фракции человека приводит к образованию постоянных количеств активатора, а также подбором соответствующего разведения исследуемой плазмы. Это дает возможность получать точные и хорошо воспроизводимые результаты с высокой статистической достоверностью, которые отражают истинное содержание плазминогенав крови.

Повьш1ение универсальности достигается тем, что использование эуглобулиновой фракции человека устраняет видовую специфичность стрептокиназы и позволяет определять содержание плазминогена не только в крови человека, но и в крови целого ряда животных. Это особенно важно для тех видов,.у которых резко выражена видовая специфичность и определение содержания плазминогена со стрептокиназой практи- чески невозможно.

Результаты определения содержания плазминогена в крови человека и животных предложенным способом: человек - 17 КЕ ± 0,5; кролик - 19 КЕ+0,3; собака - 20 КЕ t 0,3; крыса- 24,5 КЕ t .}-0,3; бык - 11 КЕ ± 0,К Формула изобретения

Способ определения содержания плазминогена в плазме крови, заключающийся в обработке разведенной физиологическим раствором плазмы крови растворами стрептокиназы и добавлении казеи- ка, инкубации, добавлении хлорной кислоты с последующим спектрофотомет31386902

рированием надосадочной жидкости,о т-раствором в соотношении 1:7-1:24, доличающийся тем, что, сбавляют смесь равных количеств 25 целью повышения универсальности и точ-75%-ной эуглобулиновой фракции крови

ности способа при определении у животЧчелове1 а и 1 50-400 ME стрептокиных, плазму разводят физиологическимнаяы.

Изобретение относится к способам определения биологически активных соединений (БАС), предназначено для гематологии, физиологии, биохимии кардиологии. Цель изобретения - повышение точности способа при определении БАС у животных. Для зтого к плаз- -ме крови крысы,.разведенной физиоло- ги ческим раствором в соотношении 1:7- 1:24, добавляют одинаковое количество взятых в равных соотношениях растворов эуглобулиновой фракции, которую выделяют из плазмы крови человека и разводят боратным буфером до 25-75%- ной концентрации, и стрептокиназы в концентрации 150-400 ME. Способ позволяет определить соединение плазминогена у человека и животны {. с S