Способ определения пролиферативной способности лимфоцитов Советский патент 1988 года по МПК G01N33/49 

со

Х

о ел

05 00

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии,и может быть использовано при оценке иммунологического статуса человека.

Цель изобретения - упрощение способа исследования и возможность широкого его применения в практическом здравоохранетп1и,

Способ осуществляют следующим образом.

На предметном стекле готовят мазки крови, высушивают на воздухе, фиксируют в смеси сгпфта с эфиром и

у лиц, прибывших с юга, 12,58±1,17 и 13,84±1 ,49.

Сравнительное изучение уровня спонтанной бласттрансформации лимфоцитов в различные сезоны года позволило установить значительное повышение данной способности лимфоцитов в период полярной ночи. В зимние месяцы степень бласттрансформации лимфоцитов у ненцев возросла до 19,37t ±,1,37%, у местных и прибывших жителей соответственно до 19,35iO,92 и 19,8310,95%. Подсчет содержания

Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, и предназначено для оценки иммунологического статуса человека. Цель изобретения - упрощение способа исследования и возможность его широкого применения в практическом здравоохранении. Для этого на предметном стекле готовят мазки крови, высушивают на воздухе. фиксируют в смеси спирта с эфиром, окрашивают по Романовскому-Гимзе и микроскопируют при общем увеличении 90. Подсчитывают в мазке 200 лимфоцитов, дифференцируя большие лимфоциты, как клетки диаметром 10- 12 мкм с круглым ядром и развитой цитоплазмой, средние лимфоциты диаметром менее 10 мкм с высоким ядерно- цитоплазматическим отношением и малые лимфоциты - диаметром менее 8 мкм с узким ободком цитоплазмы. При содержании в периферической крови больших лимфоцитов в пределах 8-22% делают вывод о нормальном уровне иммунологической реактивности, более 23% свидетельствует о развитии реактивных сдвигов на антиген, ниже 8% - снижение иммунологической реактивности организма. Способ дает точность до 89%. S (Л

окрашивают по Романовскому-Гимзе. Для | больших лимфоцитов в мазках крови.

фиксации и окрашивания мазков могут быть использованы различные фиксаторы, в том числе этиловый и метиловый спирты, и красители. Окрашенные мазки микроскопируют при общем увеличении 90, подсчитывают в мазке 200 лимфоцитов, дифференцируя большие лимфоциты как клетки диаметром 10-12 мкм с круглым ядром и развитой цитоплазмой, средние лимфоциты диаметром менее 10 мкм с высоким ядерно-цитоплаз- матическим отношением и малые лимфоциты диаметром менее 8 мкм с узким ободком цитоплг1змы.

Содержание в периферической крови больших лимфоцитов в пределах 8-22% характер)1о для человека с нормальным уровнем иммунологической реактивности; увеличение больших лимфоцитов более 23% свидетельствует о развитии реактивных сдпигов на антиген; содержание больших лимфоцитов ниже 8% (от О до 5,11±1,02%) регистрируется при снижении иммунолог ической реактивности орг анизма (совпадение в 39,71% случаев).

Пример. При сравнительной характеристике уровней содержания больших лимфоцитов и бласттрансформи- рованных клеток в культуре в процессе обследования населения Европейского севера (ненцы, местные жители русской национальности, родившиеся на севере, и прибывшее население) установлена идентичность количественного выражения названных показателей. Так, у ненцев среднегодовое содержание больших лимфоцитов в составе периферической крови находилось в пределах I4,7bil,08% при уровне

30

40

45

50

взятой одновременно с пробами для постановки реакции бласттрансформа- щш, подтвердил аналогичность изучаемых показателей - уровень больших

20 лимфоцитов повысился соответственно до 18,6110,98, 17,71±1,12 и 19,57t t1,42%. Коррелятивный анализ показал достоверную прямую зависимость изучаемых показателей (,81; 0,73;

25 0,85).

Изучение предложенного показателя в процессе иммунизации людей живой интраназальной противогриппозной вакциной позволило подтвердить мнение об активизации процесса пролиферации лимфоцитов под воздействием ан тигена. Было показано, что уже на 7-е сутки после иммунизации резко увеличилось в крови содержание больших лимфоцитов (,01) и уровня спонтанной бласттрансформации лимфоцитов в культуре (,001). Так, у ненцев увеличение процента больших лимфоцитов отмечено в этот период с 18,6110,98 до 22,,23, при повы шении процента трансформированных клеток в культуре с 19,,71 до 23,31±1,85. Подобные соотношения от- меча:п1сь у местных жителей (соответственно с 17,7111,12 до 22,0110,79% и с 19,3510,92 до 23,8211,35%) и при бывших на север с юга (соответственно с 19,5711,42 до 23,51i1,52% и с 19,8310,95 до 25,1 It 1,62%) .

Установлено, что предложенньш показатель, также как и уровень бласттрансформации, коррелирует с титрами антител в отношении противогриппозны антигемагглютининов (,72), протибласттран рормации лимфоцитов в куль-55 вобрюшнотифозных 0-агглютининов (ч

туре 15,б2±1,68%; у местных жителей изучаемые показатели равны соответственно 14,1110,99 и 15,38t1,42%;

взятой одновременно с пробами для постановки реакции бласттрансформа- щш, подтвердил аналогичность изучаемых показателей - уровень больших

лимфоцитов повысился соответственно до 18,6110,98, 17,71±1,12 и 19,57t t1,42%. Коррелятивный анализ показал достоверную прямую зависимость изучаемых показателей (,81; 0,73;

0,85).

0

0

5

0

Изучение предложенного показателя в процессе иммунизации людей живой интраназальной противогриппозной вакциной позволило подтвердить мнение об активизации процесса пролиферации лимфоцитов под воздействием антигена. Было показано, что уже на 7-е сутки после иммунизации резко увеличилось в крови содержание больших лимфоцитов (,01) и уровня спонтанной бласттрансформации лимфоцитов в культуре (,001). Так, у ненцев увеличение процента больших лимфоцитов отмечено в этот период с 18,6110,98 до 22,,23, при повышении процента трансформированных клеток в культуре с 19,,71 до 23,31±1,85. Подобные соотношения от- меча:п1сь у местных жителей (соответственно с 17,7111,12 до 22,0110,79% и с 19,3510,92 до 23,8211,35%) и прибывших на север с юга (соответственно с 19,5711,42 до 23,51i1,52% и с 19,8310,95 до 25,1 It 1,62%) .

Установлено, что предложенньш показатель, также как и уровень бласттрансформации, коррелирует с титрами антител в отношении противогриппозных антигемагглютининов (,72), проти 0,82) и цротивопаратифозньк 0-агглютининов (,68) при вакцинации соответствующими вакцинами.

При обследовании 93 детей со сниженной иммунологической реактивностью (часто болеющих респираторными заболеваниями - бронхитами, бронхопневмониями) был установлен факт дефицита сывороточного иммуноглобулина А. Изучение уровня Ьролиферативной способности лимфоцитов показало, что у 77,4% обследованных наблюдается содержание больших лимфоцитов ниже 8% (7,84±0,12%), а у 81,9% количество бласттрансформированных клеток составило 8,04+0,56%.

Достоинством способа является сокращение времени получения результатов с 3-4 дней до 30 мин, максимальная простота, полностью исключающая многочисленные этапы получения клеток и их культивирование, необходимость дорогостоящей аппаратуры, реактивов и специального помещения для соблюдения стерильности. Способ проверен на большом клиническом материале и пред- лагается как экспресс-метод для оценки иммунологического статуса, для оценки уровня иммуногенности антигена, уровня иммунного ответа на антиген и наблюдения за динамикой реактивных сдвигов. Способ может быть также рекомендован при оценке действия новых иммуномодуляторов, иммуно- депрессоров и препаратов, стимулирующих иммунологическую реактивность. В условиях диспансерных осмотров и диспансерного наблюдения способ удобен как скрининг-тест для выявления лиц с возможным наличием иммунодефицита.

Формула изобретения

Способ определения пролифератив- ной способности ЛИМФО1ДИТОВ путем исследования лимфоцитограммы, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, при исследовании лимфоцитограммы выявляют количество больших лимфоцитов и при содержании их менее 8% определяют снижение про- лиферативной способности лимфоцитов, а при содержании вьш1е 23% - повьш)е- ние пролиферативной способности лимфоцитов.