Способ определения криорезистентности эритроцитов Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

СО

go

4s

: Изобретение относится к биологии |и медицине и может быть использовано |при низкотемпературном консервировании эритроцитов.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа оценки кри орезистентности эритроцитов.

Способ осуществляется следуго1дим образом.

; Эритроциты крови рвзводят В соот I ношении 1:1000 физиологическим раствором. 2 мл полученной суспензии эритроцитов смешивают с 2 мл 0,004 и НС1 в кювете фотоэлектроколориметра Каждые 30 с производят отсчет показаний по шкале экстинкции. Измерения ведут до получения двух совпадающих показаний. На основании полученных значений экстинкции производят рас- чет количества эритроцитов (%), ге- молизированных между двумя отсчетами времени по формуле

1

, 1П07 dt

(1)

где HO - начальное значение зкстинкцииИди - конечное значение экстинкQ

5 0

5

+ 3,0 мин 1,5%-4-3,5 мин-10,3% +. +4 мин-17,6%+4,5 мин.16,9%+5,0 МИНУ ,4%+5,5 минИЗ,,0 мин.10,3%-1- +6,5 мин 8,8%+7,0 мин 5,1%+7,5 мин ,2%+8 мин-0%1 5,07 мин.

Ошибка измерения , т. е. t - 5,07 мин t 0,25 мин.

Эритроциты замораживают в контейнерах объемом 10 мл под защитой ограждающего раствора ЦОЖПК-Т.

После отделения плазмы к эритроцитам добавляют раствор ЦОЛИГ1К-114. После 15-минутной экспозиции эритроцитов с огре1ждающим раствором контейнер с эритроцитами погружают в ванну с жидким азотом. Оттаивание эритроцитов производят в водяной бане (45 С).

Потери гемоглобина эритроцитами после замораживания-отогрева составляют 5,6+0,6%, чтс1 свидетельствует о высокой .криорезистентности эритроцитов .

Пример 2. Эритроциты донора исследуют аналогично примеру 1. Определяют среднее время кислотного гемолиза эритроцитов t 1

100%

Г1,5 мин-(-1,4%)-(2,0 минх

Изобретение относится к биологии и медицине, может найти применение при низкотемпературном консервировании эритроцитов. Цель изобретения - упрощение и ускорение способа. Для этого эритроциты крови разводят в соотношении 1:1000 физиологическим р-ром. Полученную суспензию смешивают с 0,004 н. НС1 в кювете фотоэлек- троколориметра. Каждые 30 с отсчитывают показатели по шкале экстинкции. Измерения ведут до получения двух совпадающих показаний. На основании показателей экстинкции производят расчет количества эритроцитов (%), гемолизированных между двумя отсчетами времени. Затем рассчитывают среднее время гемолиза эритроцитов в 0,004 н. НС1, при его значении 5,0 - 5,6 мин определяют максимум криоре- зистентности.

dt

цшц30

- изменение экстинкции за 30 с.

Среднее время гемолиза эритроцитов в 0,004 н. НС1 рассчитывали по формуле35

00

N.

.f.a. , ш

где t - время, отсчитанное от начала

гемолиза, мин-,

пслн исходное количество эритроцитов в единице объема пробы (принимается за 100%); dN - количество эритроцитов, гемолизированных за время dt (%) . Пример 1. Из флакона с кровью, взятой на глюгицире, отбирают эритроциты, разводят их в соотношении 1:1000 физиологическим раствором. Затем в кювете фотоэлектроколориметра ФЭК-56М смешивают 2 мл суспензии эритроцитов с 2 мл 0,004 н. НС1. Каждые 30 с производят отсчет показаний прибора по шкале экстинкции. Затем вычисляют среднее время гемолиза в ра- створе соляной кислоты 1

t

100%

(-1,5%)+2 мин-0%+2,5 мин -1,5% «vO,,7%+2,5 мин-0,7%+3,0мин 0% + +3,5 мин 2,85%+4,0 мин 8,6% + +4,5 мшг.15%+5,Омш1-19,5%+5,5 минх , х17,5%+6,0 мин 13,0%+6,5 мин 11,8%+ +7,0 мин-9,0%+7,5 мин-4,,6 мин.

Ошибка измерения t составляет 5%, т.е. t 5,6 t 0,28 мин.

Для данного значения t 5,6 + + 0,28 мин прогнозируется значение гемолиза (согласно установленной нами зависимости) в пределах от 5 до 8%.

Для подтверждения этого вьгеода эритроциты донора замораживают под защитой глицерина согласно методике.

Потери гемолиза после замораяшва- ния-отогрева составляют 5,, что подтверждает предварительный прогноз результата низкотемпературной консервации эритроцитов и свидетельствует о высокой криорезистентности эритроцитов.

Формула изобретения

Способ определения криорезистентности эритроцитов, включающий инкубацию суспензии эритроцитов в физиологическом растворе, регистрацию проницаемости мембран и оценку криоре313941294

зистентности, отличающий-соляной кислоты, регистрируют время

с я тем, что, с целью упрощения игемолиза эритроцитов и при его знаускорения способа, инкубируют суспен-чении 5,0-5,6 мин определяют максиэию эритроцитов в присутствии 0,004 н.мальную их криорезистентность.