Способ выявления бактерионосительства брюшно-тифозной инфекции Советский патент 1988 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, ,1 именно к диагностике инфекционных }аболеваний, и может быть использова- ю для выявления скрытого бактерио- чосительства.

Целью изобретения яйляется повыше- ие точности выявления скрытых форм ррюшно-тифозного носительства при ассовых обследованиях определенных групп населения атравматкческим спо- Собом.

Способ осуществляется следующим образом.

Для исследования у больных или возможных бактерионосителей берут на анализ мочу. На предварительно обработанные О,1%-ным раствором бычьего сывороточного альбумина (БСА) высушенные. 1И фиксированные метанолом покровные стекла (10 шт.) наносят по 0,03 мл исследуемой мочи. Капли высушивают в токе теплого воздуха и фиксируют 10 мин метанолом. Зафиксиро-п ванные мазки отмывают от солей в течение 5 мин проточной водопроводной водой. После этого м азки высушивают и наносят на них по 0,015 мл кроличьей сыворотки, специфической к L - формам брюшно-тифозных бактерий (н разведении 1:1280), Стекла помещают во влажную камеру, инкубируют 30 мин при 37°С, промывают 20 мин проточной водой и высушивают. Затем на мазки наносят антикроличьи антитела с введенным в их состав радиоактивным изотопом (и разведении 1:100). Обработанные стекла также инкубируют во влажной камере при 37°С в течение 30 мин, промыва от 20 мин проточной водой и высушивают. Каждое покровное стекло опускают в специальные пробирки и подсчитывают радиоактивность каждого образца в if-спектрометре. Одновременно с определяемыми образцами аналогичным образом- производят анали контрольных образцов мочи заведомо здоровых людей. Результаты подсчета радиоактивности контрольных и опытных образцов обрабатывают статистически по методу Стыодента, используя критерий достоверности t, для оценки результата.

П р и м е р 1. Ч.В.Т.,- 75 лет. История болезни № 48749. В 1967 г. при обследовании по контакту у нее бьша выделена из кала культура S.typhi. Повторные исследования дали также положительные результаты, что было рас0

5

0

5

0

5

0

5

0

5

ценено как хроническое бактерионосительство. С этого времени и по 1981 г. постоянно выделяла возбудитель. После проведенного в 1981 г. лечения антибактериальными средствами обнаружить S.typhi в посевах крови, капа и мочи не удалось. Результаты, серологического обследования (РПГА, иммунофермент- ный метод, реакция коагглютинации) были также отрицат.ельными.

Только предложенным способом с использованием иммунной сыворотки к L-формам S.Typhi в пробах мочи удалось выявить специфический антиген.

П р и м е р 2. Б.Т.П., 32 лет. История болезни № 32546. В 1974 г. перенес брюшной тиф в стертой форме, подтверлоденный выделением копрокуль- туры. Через 2 недели после выздоров- лен1-м вновь начал выделять S.Typhi. С этого времени сформировалось хроническое бактерионосительство с периодическим выделением возбудителя. В момент обследования находился в фазе латешдии: все бактериологические (посев крови, костного мозга, кала, мочи) и серологические (РПГА, с О- и ВИ-антигенами; реакция Видаля, реакция коагглютинации) исследования дали отрицательный результат. Только при исследовании образцов мочи предложенным способом с иммунной сывороткой против L-форм S.typhi бьш выявлен антиген L-форм S.Typhi и установлен факт хронического бактерионосительства.

Указанным способом параллельно было проведено исследование 11 образцов мочи от хронических бактерионосителей в фазе латенции с другими методами диагностики бактерионосительства.

Показано, что посев мочи на среды для бактериальных форм сальмонелл ни в одном случае не дал положительного результата, при посеве на специ- .альные среды для выделения L-форм в одном случае выделена культура сальмонелл, С помощью РИГА сальмонеллез- ный антиген определен в тех же объектах в трех случаях. Применение радиоизотопного метода с сывороткой к бактериальной форме сальмонелл дало два положительных и четыре сомнительных результата, а с сывороткой к L-фор- ме положительные результаты во всех 11 случаях.

31

Таким образом, предложенный способ позволяет быстро и точно в течение 3 ч диагностировать брюшно-тифоз ное бактерионосительство. Использование этого способа позволяет диагностировать хроническое бактерионосительство также и в фазе латенции, т.е. в тех случаях, когда все остальные известные способы выявления бак- терионосительства дают отрицательный ответ. Предложенный способ позволяет выявлять бактерионосительство не только измененных форм (L-форм), но и бактериальных форм возбудителя брюшного тифа.

Предложенный способ использует минимальное количество ингредиентов.

Кроме того, предложенный способ .дает возможность экономить питательные среды при плановых массовых об- следованиях определенных групп населения, подлежащих регулярной проверке на бактерионосительство, что чрезвычайно важно для решения вопросов эпидемиологии данной инфекции.

Поскольку отбор образцов мочи не связан с травмированием пациентов и не представляет технических трудностей, предложенный способ является удобным для проведения массовых обследований на бактерионосительство.

Способ обеспечивает наиболее полное выявление брюшно-тифозного бакте

g 5

5

о

0

434

рионосительства благодаря высокой точности-за счет выявления в латентный период болезни объективности оценки результатов, причем достоверность полученных результатов подтверждается статистической обработкой данных.

Предложенный способ может быть автоматизирован, что позволит снизить затраты труда при проведении массовых обследований, причем при необходимости обработка полученных результатов может производиться с помощью ЭВМ.

Формула изобретения

Способ выявления бактерионосительства брюшно-тифозной инфекции путем проведения иммунной реакции между исследуемым материалом и брюшно-тифозной антисывороткой с последующим определением наличия брюшно-тифозного антигена с помощью метки, отличающийся тем, что, с целью повышения точности за счет выявления антигенов возбудителя в латентный период носительства, в качестве исследуемого образца используют мочу и проводят и 1мунную реакцию с антисывороткой к L-формам S.typhi, а выявление брюшно-тифозного антигена осуществляют иммунорадиометрическим методом .

Изобретение относится к медици не, а именно к диагностике инфекдион- ных заболеваний, предназначено для выявления скрытого бактерионосительства. Цель изобретения - повышение точности выявления скрытых форм брюшно-тифозного носительства при массовых обследованиях населения атравма- тическим способом. Для этого на обработанные 0,1%-ным р-ром бычьего сывороточного альбумина, высушенные и фиксированные метанолом покровные стекла (10 шт.) наносят исследуемую мочу. Капли высушивают в токе теплого воздуха и фиксируют 10 мин метанолом. На вымытые от солей мазки наносят кроличью сыворотку, специфическую к L-формам брюшно-тифозных бактерий (в разведении 1:1280). Стекла помещают во влажную камеру, инкубируют 30 мин при 37°С, промывают и высушивают. Затем на мазки наносят антикроличьи антитела с введенным в их состав радиоактивным изотопом (в разведении 1:100). Подсчитывают радиоактивность каждого образца.в v-спектрометре. Аналогично и одновременно производят анализ контрольных образцов мочи заведомо здоровых людей. Результаты статистически обрабатывают. е (Л со со NU i со