Способ диагностики хронического пиелонефрита Советский патент 1985 года по МПК A61K39/00 

о

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПИЕЛОНЕФРИТА путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента на предметном стекле, о тличающийся тем, что, с целью повьнпения чувствительности и специфичности диагностики, в качестве реагента используют суспензию инактивированных стафилококков штамма Cowan I, а возбудитель выявляют по наличию их коагглютинации.

fi

:о Изобретение относится к медицине преимущественно к способам лаборатор ной диагностики заболеваний. Известен способ диагностики хрони ческого пиелонефрита путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента напредметном стекле Щ. Однако известньш способ характеризуется недостаточной чувствительностью и специфичностью, а также ело жен при выполнении. Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности диагностики. Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики хро нического пиелонефрита путем выявления возбудителя заболевания с помощью реагента на предметном стекле в качестве реагента используют сус пензию инактивированных стафилококков штамма Cowan I, а возбудителя выяв1{яют ПО наличию их коагглютинации. Способ осуществляется следующим образом. Для получения 3-7%-ной диагностической суспензии инактивированных стафилококков штамма Cowan I делают смыв микробов из 3-4 пробирок со ско шепным агаром, промывают их на центрифуге при 3000 об/мин в течение 30 мин и ресуспендируют по объему осадка с последующим добавлением мер тиолята в концентрации 1:1000 1:10000. 3-8 мл свежей исследуемой мочи центрифугируют в течение 20-40 мин при скорости 1500 - 3000 об/мин. Мик робный осадок отмывают 2-4 раза физраствором и ресуспендируют отмытые микробы мочи в физрастворе до конце рации 3 - 15 ед. мутности. На предметном стекле смешивают по капле обоих препаратов и учитыва ют агглютинацию, по наличию которой в течение 2-3 мин определяют характерные для хронического пиелонефрит фиксированные на бактериях антитела Пример. Йнактивированную культуру стафилококков штамма Cowan I получают путем смыва микробов из 4 пробирок со скошенным агаром, промывая их на центрифуге при 3000 об/мин в течение 30 мин и ресу пендирования по объему осадка, чтобы получить 5%-ную суспензию, к которо добавляют мертиолят до концентрации 1:10000. Свежую мочу больных с бактериурией (100 тыс. и вьппе бактерий в 1 мл) в количестве 6 мл центрифугируют при 3000 об/мин 20 мин. Надосадок сливают , а микробный осадок двукратно промывают физраствором на центрифуге и ресуспендируют в физрастворе, чтобы получить суспензию с мутностью 5-10 ед. Каплю полученной суспензии микробов наносят на предметное стекло и затем добавляют каплю диагностического препарата стафилококков Cowan I. Быстро наступающая агглютинация указывает на наличие антител, фиксированных на поверхности бактерий возбудителей пиелонефрита. Специфичность результатов устанавливается по отсутствию агглютинации кипяченой (в течение 2-3 мин для раз- рушения антител) суспензии микробов мочи. При бактериурии, происходящей из нижнего отдела мочевьзделительной системы (воспаление мочеточников мочевого пузыря, уретры, простаты), выделяемые бактерии не покрыты антителами . I Предлагаемый метод изучен одновременно с методом иммунофлюоресценции при обследовании 68 больных хроническим пиелонефритом и 42 больньк с заболеваниями мочевого пузыря и простаты. Методом коагглютинации выявили бактерии, покрытые антителами, у 64 из 68 больных хроническим пиелонефритом или в 94,1±4,03% случаев, а методом иммунофлюоресценции положительные результаты получены только у 52 (76,5±6,54%) больньгх;. Кроме того, последним методом получены положительные результаты у 14,,40% больных без хронического пиелонефрита. Недостаточная чувствительность иммунофлюоресценции связана с разрушением бактериальных клеток в организме больного на мелкие фрагменты, слабосветящиеся и трудноотличимые от неспецифического фона в флюоресцентном препарате. Вместе с тем указанные микробные осколки, несущие на своей поверхности антитела, вполне могут взаимодействовать с бел.ком А стафилококка и способствовать коагглютинации корпускул диагностикума.

3114

Неспецифические результаты непря мой иммунофлюоресценции у больных с уроинфекциями, локализованными в нижнем отделе мочевьщелительной системы, связаны с тем, что флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка реагирует со всеми.иммуноглобулинами человека, прикрепившимися к поверхности бактерий, не только по типу реакции антиген - антитело, но и в результате неспециф ической физикохимической адсорбции. Кроме того, в оболочке некоторых бактерий имеются белок А-подобные вещества, также .способные к неспецифическому связы- ванию иммуноглобулинов в том числе и флюоресцирующих. Таким образом, при выявлении в люминесцентном микроскопе кокков даже с ободочным свечением нельзя быть уверенным в том, что наблюдаются антитела, покрывающие возбудителей пиелонефрита, а не неспеци14

фическую адсорбциюь флюоресцирующих глобулинов этими бактериями. В то же время наличие белок А-содержащих стафилококков в исследуемой пробе мочи не оказывает влияния на специфичность способа коагглютинации, поскольку такие микробы могут лишь участвовать в реакции вместе с аналогичными клетками Диагностического препарата.

Предлагаемый, способ более экономичен, т.е. 1 МП стафилококкового диагностикума оценивается в 0,03 коп, а 1 мл флюоресцирующей сыворотки к глобулинам человека - 3 руб. Кроме того, не требуется люминесцентного микроскопа (МЛ-2 - 1200 руб. или ЛЮМАМ-Р2 - 5000 руб), а также специалиста по люминесцентной микроскопии. Пгэдлагаемый способ более быстрый, т.е. время анализа 40 мин, а при использовании иммуноЧпюоресценции 1 ч.