Способ диагностики инфаркта миокарда в поздней стадии заболевания Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

DO

со

Изобретение относится к кардиологии. Цель изобретения - повышение точности способа при определении срока от начала заболевания. В сыворотке крови определяют хлорнорастворимый мукопротеин, уровень общих гексоз и их трех фракций, полученных методом осаждения. В моче определяют содержание общего оксипролина. Производят гидролиз мочи с серной кислотой. В серию пробирок с анализируемым раствором добавляют изопропиловый спирт и окислитель. После добавления реактива Эрлиха пробирки погружают в водяную баню. Через час пробирки охлавда- ют, добавляют в них изопропиловый спирт и спектрофотометрируют. Инфаркт .миокарда с 8 по 15 день диагностируют при повышении всех определяемых показателей. (Л

00

4

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии,и может быть i использовано для диагностики инфаркт а миокарда (ИМ) при поздней госпитализации больных и неясном анамнезе.

Целью изобретения является повьше- ние точности способа при определении срока от начала заболевания.

Способ осуществляют следующим об- разом,

Хлорнорастворимый мукопротеин (ХМП) определяли по следующей методике: В центрифужной пробирке сме шивали 1 мл сыворотки и 1 мл , ; По стенке приливали 2 мл 6%-ной хлор- j ной кислоты, перемешивали палочкой. I Центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин i Надосадочную жидкость переливали в

центрифужную пробирку, туда же добав 2Q плотности пересчитьшали на содержание

гексоз в мг на 100 мл по калибровочной кривой, построенной по различ- ным концентрациям стандартного раствора галактоза - манноза, а затем 25 переводили в ммоль/л. Фракция Г-ГП рассчитывалась по разнице Г,. « Г-ГАГ. У больных стенокардией (контроль)

ляли 2 мл 5%-ной фосфорно-вольфрамо- вой кислоты, встряхивали. Центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливали, к осадку прапивалн 2 мл 96 -ного спир30

35

40

та, взбалтывали, центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость сливали, осадок растворяли в, 2 мл н. NaOHj добавляли 0,8 м.п биуретового.реактива. Пробирки ста вили в термостат при 37°С на 30 мин, Колориметрировали на ФЭК с зеленьм светофильтром в кюветах 0,5 см. Калибровочная кривая строилась по мукопро теину в 0,4 н, NaOH.

Уровень сывороточного ХМП у здоро- вых составил 1,0 ±0,1 г/л, у больных стенокардией 1,1610,05 г/л.

Определение сывороточных гексоз, (Г.) связаншге с белком, и их фракций; гексоз гликозоаминогликанов (Г-ГАГ) и гексоз гликопротеинов (Г-ГП) проводилось по следующей методике.

Реактивы 1) 96 -ный этиловый спирт; 2) орциновый реактив А (40 мп дистиллированной воды и 60 мл концентрированной серной кислоты) и Б (1,6 г перекристаллизованного орцина в 100 мл воды), 3) 0,1 н. NaOH; 4) стандартные растворы галактозы и маннозы (50 г галактозы и 50 г ман- 50 нозы в 100 мл воды), 5) раствор цетилпиридинхлорида (Щ1Х). Перед опытом смешивали 7,5 мл реактива А с 1 мл реактива А с 1 мл реактива Б. .55

Ход реакции В 2 центрнфухсные пробирки наливали по 0,1 мл сыворотки, в первой определяли общие гексозы.

уровень Гд составил 6, 71 ±0,33 ммоль/лj Г-ГАГ - 2,30±0,31 ммоль/л; Г-ГП - 4,41 ±0,32, .

Определение общего оксипролина мочи (Опро) проводилось по следующей методике.

Из суточного количества мочи брали 2 мл и гидролизовали в запаянных ампулах с равным количеством 50%-ной серной кислоты в течение 5 ч при 120 С, Из ампул отбирали по 1 мл жидкости переносили .в центрифужные пробирки с делениями до 5 мл. Добавляли по 2 мл дистиллированной воды и 1,6 мл 6 н, гидрата окиси натрия. Общий объем доводили до 5 мл. Б серию пробирок разливали по 1 мл нейтрального или слабокислого анализируемого раствора. При тщательном перемешивании добавляли по 1 мл изопропилового спирта и окислителя. Через 5 мин в каждую пробирку добавляли по 2,6 мл реактива Эрлиха и погружали их в водяную баню при . Через 1 ч пробирки охлаждали, объем доводили изопропи- ловым спиртом до 10 мл. После перемешивали, спектрофотометрировали в кюветах 1 см при. длине волны 558 ммк против контроля, в котором анализи- руемьй раствор заменен дистиллированной водой. Содержание О про находили по калибровочной кривой.

0

5

во второй Г-ГАГ. В первую пробирку добавляли 5 мл реактива 1, во вторую 0,1 мл реактива 5 и 0,8 мл воды. Перемешивали, центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин. Сливали надосадочную жидкость, пробирки опрокидывали на 30-60 мин.на фильтровальную бумагу. Осадок растворяли в 1 мл реактива 3, добавляли по 8,5 мл реактива 2 перемешивали и ставили в водяную баню на 15 мин в темноте при 8Q°C, Охлаждали пробирки во льду в течение 5 мин. Фотометрировали при длине волны 500- 560 нм в кюветах толщиной 1 см против контроля (смесь 1 мл реактива 3 и 8,5 мл реактива 2, обработанных как опыт).

Полученные показатели оптической

0

5

0

0

уровень Гд составил 6, 71 ±0,33 ммоль/лj Г-ГАГ - 2,30±0,31 ммоль/л; Г-ГП - 4,41 ±0,32, .

Определение общего оксипролина мочи (Опро) проводилось по следующей методике.

Из суточного количества мочи брали 2 мл и гидролизовали в запаянных ампулах с равным количеством 50%-ной серной кислоты в течение 5 ч при 120 С, Из ампул отбирали по 1 мл жидкости переносили .в центрифужные пробирки с делениями до 5 мл. Добавляли по 2 мл дистиллированной воды и 1,6 мл 6 н, гидрата окиси натрия. Общий объем доводили до 5 мл. Б серию пробирок разливали по 1 мл нейтрального или слабокислого анализируемого раствора. При тщательном перемешивании добавляли по 1 мл изопропилового спирта и окислителя. Через 5 мин в каждую пробирку добавляли по 2,6 мл реактива Эрлиха и погружали их в водяную баню при . Через 1 ч пробирки охлаждали, объем доводили изопропи- ловым спиртом до 10 мл. После перемешивали, спектрофотометрировали в кюветах 1 см при. длине волны 558 ммк против контроля, в котором анализи- руемьй раствор заменен дистиллированной водой. Содержание О про находили по калибровочной кривой.

Суточная экскреция . у здоровых составляет 256,О t6,9 мкмоль/сут у больных стенокардией (контроль) - 294 iА,58 ммоль/сут.

Пример 1. Больной Н., 55 ле госпитализирован 15.1.1986 г. с жалобами на неинтенсивные flarjHi e боли в предсердечной области. Стенокардия в течение 12 лет, дестабилизация стенокардии (снижение толерантности физическим нагрузкам, мальй эффект нитратов) в течение месяца. Состояние удовлетворительное. Тоны сердца глухваты. Пульс ритмичен, 88 в 1 мин„, АД 130/80 мм рт.ст. Температура нормальная. На ЭКГ от 15.1.1986 г. комплекс QSy,4 3 интервал STy,, выше изолинии, зубец .отрпцагепъкьт,

16 по 18.1.1986 динамики ЭКГ нет.

Лабораторные показатели от 16.1.1986 г.: лейкоциты 6,5 х IO /л, СОЭ 28 мм/ч, ГБД 54 мМЕ/мл (норма).

Согласно прототипу нельзя диагностировать ИМ: нормальная активность органоспецифического фермента ГБД, нет динамики формирования комплекса QS на ЭКГ.

Проведено исследование по предлагаемому способу. Уровень ХМП составил 2,04 г/л (выше М + 2G контроля)-, Г. 12,3 ммоль/л (выше контроля); Г-ГАГ 6,9 ммоль/л (вьше M+2G контроля) j Г-ГП 5,40 ммоль/л (не выше М+26 контроля); ,2 мкмоль/сут (выше M+2G контроля).

По.предлагаемому способу, учитывая высокие цифры ХМП, Г, Г-ГАГ, О„ро.следует диагностировать ИМ с 16 до 25 дня, это предполагает адекватные указанным срокам лечебные мерприятия.

Пример 2, Больной 3,, 38 ле госпитализорован 22.12,1985 г, с жалобами на давяпще загрудинные боли с иррадацией в спину, возникающие 2- 3 раза в день при ходьбе, продолжающиеся 20-30 мин. Заболел 20.11.1985 когда впервые возникли давящие загрудинные боли продолжительностью до 40 мин. С тех пор боли возникли ежедневно.- Нитроглицерином не пользовался. Обратился к кардиологу поликлиники, срочно госпитализирован после записи ЭКГ.

Тоны сердца глуховаты. Пульс ритмичен .; 82 в мин, АД 160/90 мм рт.ст. Температ ура нормальная, ЭКГ от . . 22.12.1985 г: комплекс QS,. , зубец

,

т, -jgv

интервал

4

STv,-4

выше изолинии.

10

г.

20

25

30

35

40

45

50

55

зубец Т,,,. отрицательный, 23,25,12. 1985 г, без динамики. В крови активность ГБД 58 мх-Ш/мл (норма) .

Согласно прототипу у пациента нет свежего iM: нормальная активность органоспецифического фермента ГБД, отсутствует динамика формирования комплекса QS.

Бьшо проведено определение биохимических показателей согласно предлагаемому способу. ХМП 1,04 г/л (норма) Г 4,62 ммоль/л (норма), Г-ГАГ 1,74 ммоль/л (норма), Г-ГП 2,88 ммоль/л (норма), экскреция 0„ро 968,0 мкмоль/ /сут (выше M+2G).

По предлагаемому способу, учитьгоая нормальную активность ГБД, низкие цифры ХМП, Г. , Г-ГАГ в сочетании с высокими Опрод, диагностирован ИМ в сроки от 26 до 40. дня. Это не противоречит клинической логике, поскольку ИМ мог возникнуть, по данным анамнеза, не ранее 20.11.85.

Пример 3. Больной А., 51 года, поступил в клиницу 27.12.84 г. с жа- лобами на тяжесть за грудиной, чувство нехватки воздуха. Около года периодически отмечает боли в области сердца. Ухудшение состояния последние 2 недели, когда появились приступы загрудинных, сжимающих болей при ходьбе. На снятой амбулаторно ЭКГ очаговые изменения миокарда.

При поступлении состояние средней тяжести. Тоны сердца приглушены. АД 160/90 мм рт.ст., пульс рит- fflчный 72 в мин. На ЭКГ: ритм сину- совый, нормальное положение ЭОС, отрицательный зубец Tgv,. . В последующие трое суток электрокардиограмма без динамики.

Лабораторные показатели от 28.12.84: лейкоциты 5,9 10 ; СОЭ 34 мм/ч; активность ACT 10 ед,(норма).

Согласно прототипу нельзя было диагностировать острый инфаркт миокарда: нормальная активность фермента, отсутствие динамики на ЭКГ.

Проведено исследование по предлагаемому способу. Уровень хлорнораство- римого мукопротеина составил 1,5 г/л, что в 1,5 раза превьшало норму. Уровень гексоз сыворотки был равен 7,1 ммоль/л (норма 4,74 ммоль/л), а уровень Г-ГАГ составил 2,34 ммоль/л (норма 1,55 ммоль/л), суточная экс5. 1

креция оксипроли11а с мочой (Одро ) была равна 237 М14оль/сут (норма).

Высокие цифры ХМП, Г и Г-ГАГ, в сочетании с низким уровнем 0„ром ° зволили благодаря предлагаемому способу диагностировать инфаркт миокарда с давностью заболевания 8-15 дней На вторые сутки стационарного лечения бдльной уже был активизирован в пределах палаты.

Форм.ула изобретения

Способ диагностики инфаркта миокарда в поздней стадии заболевания путем биохимического исследования

996846

биологической жидкости, о т и ч а- ю щ и й-с я тем, что, с целью повышения точности способа при определеНИИ срока от начала заболевания, в сыворотке крови определяют хлорно- растворимый мукопротеин, уровень общих гексоз и их трех фракций, полученных методом осаждения, в моче 0 определяют уровень общего оксипро- лина и при повышении данных показателей относительно нормы диагностируют инфаркт миокарда с 8 по 15 день, при тех же показателях и повы- 15 шенном четвертом - с 16 по 25 день, а при повышении уровня четвертого показателя и нормальных остальных - с 26 по 40 день.