СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ СТЕНОКАРДИИ И ИНФАРКТА МИОКАРДА Российский патент 1996 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к области медицины, а именно кардиологии и может быть использовано, в частности, для дифференциальной диагностики стенокардии и инфаркта миокарда.

Из практики медицины известен способ дифференциальной диагностики стенокардии и инфаркта миокарда Д. Я. Шурыгин, Д. Е. Шмимарев, А.М.Грачев "Динамика изменений содержания миоглобина и активность креактининфосфокиназы в сыворотки крови больных острым инфарктом миокарда и стенокардией". Тер. Архив, 1983, N 5, с. 7-10, состоящий в определении уровня миоглобина в сыворотке крови, известен также способ "Лабораторная диагностики ишемической болезни сердца", Киев, "Здоровье", 1989, с. 38, 60, состоящий в определении уровня АСТ в сыворотке крови. Однако недостаток первого способа в том, что уровень миоглобина может повышаться не только у больных миокарда, а второго в том, что уровень АСТ не изменяется у больных стенокардией.

Наиболее близким к предлагаемому является Л.В.Сафонникова, Т.С.Фрейдлин "Значение креатининфосфокиназы и ее МВ-изофермента в диагностике стенокардии и инфаркта миокарда" Клин. мед. 1981, N 6, c. 44-48, состоящий в определении ферментативной активности сыворотки крови больного, однако, известный способ имеет следующие недостатки:
способ не обладает достаточной точностью, т.к. изменение активности фермента в сыворотке крови может происходить не только при инфаркте миокарда, но и при повреждении других органов;
известным способом невозможно диагностировать стенокардию, т.к. при этом заболевании не отмечается изменения активности фермента в сыворотке крови;
известным способом невозможно диагностировать инфаркт миокарда в ранние сроки заболевания, т. к. повышение активности ферментов в сыворотке крови отмечается только ко вторым суткам от начала заболевания.

Целью предлагаемого изобретения является повышение точности способа.

Поставленная цель достигается в изобретении тем, что определяется активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы в нейтрофилах и моноцитах крови больных и при одновременном снижении активности фермента в нейтрофилах ниже 87 усл. ед. и в моноцитах ниже 80 усл.ед. диагностируют стенокардию, а при одновременном повышении активности в нейтрофилах выше 103 усл. ед. и в моноцитах выше 101 усл. ед. диагностируют инфаркт миокарда.

В настоящее время установлено, что основным фактором развития ишемической болезни сердца является прогрессирующий атеросклероз артерий, факторами, способствующими процессам развития атеросклероза являются: гиперлипидемия, артериальная гипертензия, повышенная свертываемость крови, сахарный диабет и др. Фагоциты (нейтрофилы микрофаги и моноциты макрофаги) участвуют практически во всех этих процессах, осуществляя в том числе элиминацию липидов и иммунных комплексов из организма. Утилизация липидов в нейтрофилах и моноцитах осуществляется с помощью липолитических ферментов, большую часть которых составляют гидролазы эфиров карбоновых кислот или эстеразы. В организме человека содержится 12 таких ферментов. Связь между нарушениями липидного обмена и активностью эстераз установлена достаточно давно, однако исследования активности эстераз у больных ИБС, особенно в комплексе в нейтрофилах и моноцитах не проводились. Исследования последнего времени указывают на наличие взаимодействия нейтрофилов и макрофагов у больных ИБС, нарушение которого может приводить к развитию инфаркта миокарда.

С целью повышения точности способа определяют активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы в нейтрофилах и моноцитах крови и при одновременном снижении активности фермента в нейтрофилах ниже 87 усл. ед. и в моноцитах ниже 80 усл. ед. диагностируется стенокардия, а при одновременном повышении активности фермента в нейтрофилах выше 103 усл. ед. и в моноцитах выше 101 усл. ед. диагностируют инфаркт миокарда. У больных из локтевой вены забирали 10 мл крови в пробирку с 1 мл гепарина (20 ЕД/мл). Из цельной крови готовили мазки, на которых изучали активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы в нейтрофилах. Часть крови разделяли в градиенте фиколл-пак ("Фармация", Швеция) и на разделе сред получали кольцо мононуклеаров, которое трехкратно отмывали в среде 199 и из полученной взвеси готовили мононуклеарные мазки, на которых изучали активность ферментов в моноцитах. Мазки сушили в течение 3-6 ч, фиксировали в парах формалина, после чего помещали в инкубационную среду. Инкубационную среду готовили следующим образом: в 10 мл 0,1М фосфатного буфера рН 7,2-7,4 по каплям добавляли 0,4 мл 1%-ного раствора нафтол-AS-хлорацетата и 20 мг прочного синего РР соль. Инкубацию проводили в течение 30-60 мин при комнатной температуре (20^oC). После промывки дистиллированной водой и сушки ядра докрашивали 1%-ным раствором сафранина. Подсчет продукции реакции, выпадавшего в цитоплазме в виде темно-синих гранул, проводился полуколичественным методом Каплоу (1955) в световом микроскопе при иммерсионном увеличении х 1350. В основе этого метода лежит распределение клеточных элементов по группам в зависимости от количества выявленного в клетке активного вещества. К нулевой степени относили клетки без гранул. В первую включали клетки, в которых гранулы занимали до 25% площади цитоплазмы (степень "а"). Ко второй группе клетки, цитоплазма которых была заполнена гранулами до 75% (степень "б"), к третьей группе клетки, до 100% заполненные гранулами, независимо от того, контролировалось ядро или нет (степень "в").

Для определения среднего цитохимического показателя в мазке подсчитывали 100 клеток (нейтрофилов или моноцитов, в зависимости от мазка). СЦП определяли по формуле: СЦП=а+2б+3в.

Нами выявлено, что у больных стенокардией активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы ниже, чем у здоровых лиц и больных инфарктом миокарда, в свою очередь у больных инфарктом миокарда активность фермента существенно выше, чем у здоровых и больных стенокардией.

У больных стенокардией в нейтрофилах активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы снижена по сравнению со здоровыми на 6 усл.ед. а по сравнению с больными инфарктом миокарда на 16 усл. ед. В моноцитах эти отличия составляют соответственно 12 и 15 усл. ед.

Пример 1. Больной Ч. история болезни N 12705, поступил в кардиологическое отделение МСЧ ПО АГП 03.10.88. Больной доставлен в экстренном порядке с жалобами на интенсивные боли за грудиной. Больным себя считает с 1984 г. когда впервые перенес инфаркт миокарда. Постоянно принимает нитропрепараты. Ухудшение состояния в течение недели, когда боли за грудиной участились, стали хуже купироваться нитроглицерином. Утром больной вышел из дома на улицу, после чего развился приступ интенсивных болей, был вынужден вернуться домой. Вызвал "Скорую помощь", однако вводимые аналгетики давали недлительный эффект доставлен в стационар. Больной правильного телосложения, хорошего питания. Кожные покровы нормальной окраски. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Границы сердца в пределах нормы. Пульс 76 уд.в 1 мин, АД 120/80 мм рт.ст. Периферических отеков нет. Лабораторные исследования: Эр.-4,2•10¹² л, Нв 140 г/л. Лейкоциты 5,8•10⁹ л, СОЭ 3 мм/ч. Холестерин 6,8 ммоль/л. Липропротеиды 50 ед. АЛТ 0,11 мкмоль/л. ЭКГ: ритм синусовый, правильный, PQ 0,20, QRS 0,09, aVF q.

У больного из локтевой вены забирали 10 мл крови в пробирку с 1 мл гепарина (20 ЕД/мл). Из цельной крови приготовляли мазки, на которых изучали активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы в нейтрофилах. Часть крови разделяли в градиенте "Фиколл-пак" ("Фармация", Швеция). На разделе сред получали кольцо мононуклеаров, которое трехкратно отмывали в среде 199 и из полученного материала приготовляли мазки мононуклеаров, на которых изучали активность фермента в моноцитах. Мазки сушили в течение 6 ч, фиксировали в парах формалина (40%), после чего помещали в инкубационную среду. Состав инкубационной среды: в 10 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 7,2-7,4 по каплям добавляли 0,4 1% -ного раствора нафтол-AS-хлорацетата и 20 мг прочного синего РР соль. Инкубацию проводили в течение 30-60 мин при комнатной температуре (20^oC). После промывки дистиллированной водой и сушки ядра докрашивали 1%-ным раствором сафранина. Подсчет продукта реакции, выпавшего в цитоплазме в виде темно-синих гранул, проводили полуколичественным методом по Каплоу (1955) в световом микроскопе при иммерсионном увеличении х 1350. В основе этого метода лежит распределение клеточных элементов по группам в зависимости от количества выделенного в клетке цитохимически активного вещества. К нулевой степени относили клетки без гранул. В первую включали клетки, в которых гранулы занимали 25% площади цитоплазмы (степень "а"). Ко второй группе относили клетки, цитоплазма которых была заполнена гранулами до 75% (степень "б"). К третьей степени клетки, до 100% заполненные гранулами, независимо от того, контролировалось ядро или нет (степень "в"). Для определения среднего цитохимического показателя (СЦП) в мазке подсчитывали 100 клеток (нейтрофилов или моноцитов, в зависимости от мазка). СЦП определяли по формуле: CЦП= а+2б+3в.

Результаты: нейтрофилы: 0 46, a 54, б 0, в 0.

моноциты: 0 42, a 58, б 0, в 0.

Таким образом, активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы в нейтрофилах 54 усл. ед. в моноцитах 58 усл. ед.

Клинический диагноз: прогрессирующая стенокардия. Постынфарктный кардиосклероз. НК_o.

Пример 2. Больной М. 70 лет, история болезни N 15647, поступил в 1 кардиологическое отделение МСЧ ПО АГП 19.12.89. Госпитализация плановая для коррекции медикаментозной терапии. Больным себя считает с 1968 г. когда впервые перенес инфаркт миокарда, повторные инфаркты в 1974 и 1984 гг. Постоянно принимает коронаролитики. Боли возникают через 200-300 м ходьбы. Последние 2-3 недели боли стали интенсивнее. Больной правильного телосложения, повышенного питания. Кожные покровы нормальной окраски. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Границы сердца расширены влево на 1,5 см. Тоны сердца приглушены. Пульс 72 уд. в 1 мин. АД 140/80 мм рт.ст. Периферических отеков нет. Лабораторные исследования: Эр. 4,5•10¹² л, Нв 144 г/л, лейкоциты 5,4•10⁹ л, СОЭ 5 мм/ч. Холестерин 8,7 ммоль/л. Липопротеиды 44 ед. АЛТ 0,5 мкмоль/л, АСТ 0,38 мкмоль/л. ЭКГ: ритм синусовый, правильный. PQ 0,18, QRS 0,12, aVL, V_1-5 Tотр. V₆ Tснижен. Цитохимические исследования проводились аналогично примеру 1.

Результаты: нейтрофилы: 0 13, а 87, б 0, в 0.

моноциты: 0 20, а 80, б 0, в 0.

Таким образом, активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы: в нейтрофилах - 87 усл. ед.

Клинический диагноз: ИБС: стабильная стенокардия II ФК. Постынфарктный кардиосклероз. Атеросклероз аорты. Симптоматическая гипертония НК₁.

Пример 3. Больной К, 35 лет, история болезни N 12419, поступил в кардиологическое отделение N 1 МСЧ АГП 27.09.88 в экстренном порядке с жалобами на выраженную одышку, слабость. Больным себя считает с 1973 г. когда впервые был поставлен диагноз ревматизм и произведена комиссуротомия митрального клапана. Ухудшение состояния около недели, когда после физической нагрузки стала появляться выраженная одышка. Утром одышка стала наиболее выраженной вызвал "Скорую помощь", доставлен в стационаp. Правильного телосложения, умеренного питания. Кожные покровы нормальной окраски, небольшой цианоз губ. В легких дыхание везикулярное, в нижних отделах небольшое количество мелкопузырчатых хрипов. Границы сердца несколько расширены вверх. Тоны сердца приглушены, диастолический шум на верхушке, в V точке. Пульс 78 уд. в 1 мин. АД 120/80 мм рт.ст. Периферических отеков нет. Лабораторные исследования: Эр. 3,9•10¹² л, Нв 138 г/л. Лейкоциты 8,4•10⁹ л, CO 2 мм/ч. Холестерин 6,6 ммоль/л, липопропеиды 40 ед. АЛТ 0,5 мкмоль/л, АСТ 0,88 мкмоль/л. ЭКГ: мерцательная аритмия QRS 0,09, aVF сглажен Т.

Цитохимические исследования проводились аналогично примеру 1.

Результаты: нейтрофилы: 0 9, а 91, б 0, в 0.

моноциты: 0 6, a 90, б 4, в 0.

Таким образом, активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы: в нейтрофилах 91 усл. ед. в моноцитах 98 усл. ед.

Клинический диагноз: ревматизм, активная фаза. Стеноз митрального клапана. Мерцательная аритмия. НКII a.

Пример 4. Больной Г. 55 лет, история болезни N 1243, поступил в палату интенсивной терапии МСЧ ПО АГП 27.09.88. При поступлении жалобы на неинтенсивные боли за грудиной. Заболел впервые. Утром по дороге на работу появились интенсивные боли за грудиной. На работе вызвал "Скорую помощь", и больной доставлен в данный стационар. Правильного телосложения, удовлетворительного питания, кожные покровы нормальной окраски. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Границы сердца в пределах нормы. Тоны сердца приглушены. Пульс 86 уд. в 1 мин, ритмичный. АД 140/80 мм рт.ст. Периферических отеков нет. Лабораторные исследования: Эр. 4,2•10¹² л, Нв 142 г/л. Лейкоциты 5,2•10⁹ л. СОЭ 4 мм/ч. Холестерин 7,2 ммоль/л, липопротеиды 22 ед. АЛТ 0,5 мкмоль/л. АСТ 0,22 мкмоль/л. ЭКГ: ритм синусовый; правильный. PQ 0,18, QRS 0,09, aVL Q, "r" низко, Т отр. V_2-3 Q, V₄ Q, R снижен, Т отр. Цитохимические исследования проведены аналогично примеру 1.

Результаты: нейтрофилы: 0 4, а 86, б 10, в 0.

моноциты: 0 0, а 84, б 16, в 0.

Таким образом, активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы в нейтрофилах 106, в моноцитах 116 усл. ед.

Клинический диагноз: ИБС: трансмуральный инфаркт миокарда передней стенки. Класс тяжести III. НК_I.

Пример 5. Больной П. 38 лет, история болезни N 3614, поступил в кардиологическое отделение МСЧ ПО АГП 15.03.89. Заболел внезапно, когда ночью проснулся от интенсивных болей за грудиной. Кардиологической бригадой доставлен в отделение. Правильного телосложения, умеренного питания. Кожные покровы нормальной окраски. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Границы сердца в пределах нормы. Тоны сердца умеренно приглушены. Пульс 74 уд. в 1 мин. АД 110/80 мм рт.ст. Периферических отеков нет. Лабораторные исследования: Эр. 4,1•10¹² л. Нв 144 г/л. Лейкоциты 16,8•10⁹ л. СОЭ 11 мм/ч. Холестерин 4,81 ммоль/л, липопротеиды 64 ед. АЛТ 0,78 мкмоль/л, АСТ - 0,94 мкмоль/л. ЭКГ: ритм синусовый, правильный. PQ 0,12, QRS 0,10, aVF - Q, T низко. II Q, III Q. Цитохимические исследования проводились аналогично примеру 1.

Результаты: нейтрофилы: 0 0, а 97, б 3, в 0.

моноциты: 0 9, а 81, б 10, в 0.

Таким образом, активность нафтол-AS-хлорацетатэстеразы в нейтрофалах 103 усл. ед. в моноцитах 101 усл. ед.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом позволяет повысить точность диагностики инфаркта миокарда, т.к. активность фермента в нейтрофилах и моноцитах изменяется уже в первые часы от начала заболевания, повысить точность диагностики стенокардии, т.к. при известном способе активность не меняется, и улучшить дифференциальную диагностику данных заболеваний, т.к. уровень активности фермента при предлагаемом способе существенно отличается у больных стенокардией и инфарктом миокарда.

Изобретение относится к области медицины, а именно кардиологии, и может быть использовано, в частности, для дифференциальной диагностики стенокардии и инфаркта миокарда. Целью предлагаемого изобретения является повышение точности способа. У больных стенокардией и инфарктом миокарда определяют активность нафтол-АS-хлорацетатэстеразы в нейтрофилах и моноцитах крови. При одновременном снижении активности фермента в нейтрофилах ниже 87 усл. ед. и в моноцитах ниже 80 усл. ед. диагностируется стенокардия, а при одновременном повышении активности в нейтрофилах выше 103 усл. ед. и в моноцитах выше 101 усл.ед. диагностируется инфаркт миокарда.

Способ дифференциальной диагностики стенокардии и инфаркта миокарда, включающий определение активности фермента в крови больного, отличающийся тем, что проводят цитохимическое определение активности нафтол - AS-хлорацетатэстеразы в моноцитах и нейтрофилах и при значении активности фермента в нейтрофилах, равном или ниже 87 усл.ед. и в моноцитах, равном или ниже 80 усл. ед. диагностируют стенокардию, а при значении активности в нейтрофилах, равном или выше 103 усл.ед. и в моноцитах, равном или выше 101 усл.ед. диагностируют инфаркт миокарда.