Способ обнаружения микробов в ткани Советский патент 1988 года по МПК G01N1/30 G01N1/06 A61B10/00 G01N33/483 

О5

ISD

Ю

Изобретение относится к медицине, к инфекционной патологии, в частности к гистологии, и 1может быть использовано для выявления микроорганизмов в патолого- анатомическом материале.

Цель изобретения - повышение точности способа за счет установления локализации микробов.

Способ осуществляют следующим образом.

От инфицированного трупа человека через 1-3 ч после смерти или зараженного животного берут кусочки ткани органов величиной не более 1 мм . Этот материал фиксируют в 2,5%-ном растворе глютаральде- гида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,4± ±0,1 с последующей дофиксацией в 2%-ном растворе осмиевой кислоты, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации и заливают в эпонараладит. На ультратоме «LKB готовят полутонкие срезы толщиной 2 3 мкм. Затем известным методом обес- смоливают испытуемые среды и переходят непосредственно к окрашиванию. Срезы покрывают генциан-виолетовой фильтровальной бумагой, на которую капают 3-4 капли дистиллированной воды и окрашивают в течение 5 мин. Фильтровальную бумагу удаляют и промывают срез нроточной водой до прекращения отхождения краски. Срезы погружают в раствор Люголя на 5 мин. Ополаскивают водопроводной водой. Срезы подсушивают фильтровальной бумагой, погружают в ацетон до прекращения отхождения синей краски, зате.м промывают водопроводной водой до полного удаления ацетона. Далее красят срезы растворов карболового фуксина с конечной концентрацией 0,1--0,15% в течение 3,0-3,5 мин, затем промывают препараты в проточной водопроводной воде. Срезы держат в растворе в течение 5 мин, вновь промывают проточной водопроводной водой. Срезы подсушивают фильтровальной бумагой, опускают в ацетон на 2 с, окрашивают 5,0-5,1%-ным раствором пикриновой кислоты в ацетоне в течение 10-15 мин. Вновь опускают в ацетон на 2 с. Срезы обрабатывают ацетоном с ксилолом в соотношении 1:1 в течение 3 с. Препараты опускают в первую порцию ксилола на 5 с, во вторую порцию ксилола - на 1 мин. Срезы заключают.

Препараты исследуют методом световой микроскопии, при этом присутствующие микроорганизмы обнаруживают в виде окрашенных компонентов: грам положительные 0

5

0

5

0

5

синее окращивание, грамотрицательные - красное окрашивание.

Пример 1. Часть толстой кишки умершего от сепсиса больного исследовали предлагаемым способом. При окрашивании полутонких срезов карболовым фуксином в концентрации 0,1% в течение 3,0 мин и диф- ференцировке 5,0%-ной пикриновой кислотой в течение 10 мин в срезах были выявлены грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы, расположенные как вне-, так и внутрилейкоцитарно. Микробы выявились на серозной оболочке кишки, а также в собственной пластинке ворсинок кишки.

Пример 2. Кусочек головного мозга умершего от сепсиса больного исследовали предлагаемым способом. Для окрашивания срезов использовали раствор карболового фуксина в концентрации 0,15%. Окраску проводили в течение 3,5 .мин. Дифференци- ровку производили 5,1%-ным раствором пикриновой кислоты в течение 15 мин Грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы выявляли в гипофизе и в оболочках головного мозга.

Исследован патолого-анатомический .материал от 30 человек, умерших от различных причин инфекционной природы, и материал от экспериментально зараженных мышей. Исследования по известному способу не показали локализации микробов, в то время как по предлагаемому способу выявлена локализация микробов во всех случаях в тканях мозга, кишечника, почках, печени, и других органов.

Применение предлагаемого способа в медицинской и ветеринарной практике поможет установлению верного диагноза, что является важным с точки зрения эпидемиологии, а также для разработки препаратов для лечения и профилактики некоторых заболеваний.

Формула изобретения

0

Способ обнаружения микробов в ткани при посмертном исследовании путем окрашивания по Граму гистологических срезов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет установления локализации микробов, дополнительно проводят окрашивание в 0,1-0,15%-ном растворе карболового фуксина в течение 3,0-3,5 мин и в 5,0-5,1%-но.м растворе пикриновой кислоты в течение 10-15 мин.

Изобретение относится к медицине, касается инфекционной патологии, гистологии, предназначено для выявления микроорганизмов в патолого-анатомическом материале. Цель изобретения - повышение точности способа за счет установления локализации микробов. Для этого исследуют посмертные гистологические срезы. -Кусочки материала фиксируют в 2,5%-ном р-ре глю- таральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,4 с последующей дофиксацией в 2%-ном р-ре осмиевой кислоты, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, заливают в эпонараладит. На ультратоме «LKB готовят полутонкие срезы, обес- смоливают, покрывают генциан-виолетовой фильтровальной бумагой, на нее капают 3-4 капли дистиллированной воды и окра- щивают 5 мин. Удаляют фильтровальную бумагу, промывают срез, погружают его в р-р Люголя на 5 мин. Промытые и высушенные срезы погружают в ацетон, затем промывают. Далее красят срезы р-ром карболового фуксина в конечной концентрации 0,1-0,15% 3,0-3,5 мин. Затем промывают срезы, просушивают, опускают в ацетон на 2 с, окрашивают 5,0-5,1%-ным р-ром пикриновой кислоты в ацетоне 10- 15 мин. Срезы обрабатывают 3 с ацетоном с ксилолом в соотношении 1:1. Препараты исследуют методом световой микроскопии. Микроорганизмы обнаруживают в виде окрашенных компонентов; грамположитель- ные - синее окрашивание, граммотрица- тельное - красное окрашивание. i (Л