Способ размножения культурных растений IN VIтRо Советский патент 1988 года по МПК A01H3/00 

ы

Изобретение относится к способу тканевого размножения растений и может найти применсшие в сельском хозяйстве,с

Недостаток известных способов за-, ключается в том, что хотя растения в условиях in vitro размножаются без ограничений, при пересадке в почву в зависимости от вида культуры 20-60% 10 выращиваемых в стерильных условиях растений погибают.

Цель изобретения - повьппение выхода приживающихся при пересадке саженцев.15

Согласно предлагаемому способу тканевого разведения выращиваемые рас- , тения обрабатываются водным раствором соединения общей формулы

x Rl20

.RCONO 2

после вьфащивания в условиях in vitro растений отходы по.сле высаживания в условиях in-vivo существенно 25 уменьшаются и значительно больше

растений переживают пересадку, а развитие самих переживших растений происходит сильнее.

Обработку растений водными растворами соединений общей формулы производят следующим образом: а) соединение в концентрации 1-20 мг/л растворяют в питательной среде, в которой находятся корни растений, б) выращиваемое на питательной среде растение корнями пе ред пересаживанием окунают в- водный раствор концентрацией 1-20 мг/л соединения общей формулы, б) вьфащивае- мое- в условиях in vitro растение пересаживают в пропитанную водным раствором соединения общей формулы землю, г) выращиваемые в условиях in vitro растения после выкапывания в случае необходимости орошают несколько раз водным раствором указанных соединений концентрацией 5-15 мг/л.

При экспериментах бьша использована питательная среда для размножения в условиях in vitro, содержащая мг/л:

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Цель изобретения - повьшение выхода приживающихся при пересадке саженцев. Культивируют эксплантанты на среде Мурасиге-Ску- га.. Доращивают, проростки на той же среде с уменьшенным в пять раз содержанием солей. Среда дпя доращива- ния дополнительно содержит 2-20 мг/л соединения общей формулы R-CONR R,, где при R-CHj, CHjCl, CHClp CHClj, СС1з; R и Rj вместе - группа (CHj) или при R - СНС12 и R -водо- род; Rj- изопропил, С -С -алкил,цик- /логекснл, фенил, бензил, аллил или группа (CH2)jNCOpHC, или при R-CHCl и R,- метил, этил-, RI,-изопропил или бензил, нпи при R - СНСХд; R и R каждьй - изопропил, изобутил, амил. При добавлении дихлорацетилгексаме- тиленимина в питательную среду количество переживших пересадку саженцев гвоздичных растений при концентрации 6 мг/л поднялось до 96%, а в варианте без добавления составило 46%. Показано также применение способа при получении вегетативного материала герберы, виноградного растения для тканевой пересадки, растений: ежевики, для размножения не пораженных вирусом привоев яблок. 9 табл. СУ) 00

CaClr2H,jO 439,300 СоС1,-2%0 0,025 Си804-5Н О 0,025 FeNaEDTA 336,6 НзВОз 6,200

KHjPO.170,000

KJ . 0,830

КНОз1900.000

MgS04- 7HjO 370,000 :MnS04 4HjO 22,300 NaH.-p042HiO 96,000 Na Mo042H40 0,250 1650,000

ZnS04 7H20 , 8,600 Сахар3-45,000

.Инозит100,000

|Никотиновая кислота Солянокислая соль тиамина 30,000 Солянокислая соль пкридоксина -10,000 Адёнинсульфат2НгО 0-80,000 Индолоуксусная кислота 0-10,000 Кинетин0-30,000

Агар-агар7-10,000

Перечисленные вещества растворялись в дистиллированной воде, при рН 5,8, затем добавлялся агар-агар дд и питательная среда кипятилась до ; просветления, потом в стерильных условиях расфасовьюалась в колбы, отверстия которых закрьтались бумажной пробкой. Затем колбы устанавлив.ались - в автоклав и питательная среда стерилизовалась при 121°С.

Пример 1. Получение вегетативного материала гвоздичных растений для тканевого разведения. Мерис- темные -ткани выращиваемых по известному способу в теплице черенков гвоздичных растений готовились в стерильных условиях и размножались на пи- I

55

д -

5

тательных средах Мурашиге-Скууга, Меристемы гвоздик вначале прорастали, затем начинали делиться. Из каждого отростка через 6 недель после введения в питательную среду вырастало 10-15 побегов, которые высаживались по отдельности на свежей питательной среде и бьши пригодны для дальнейшего размножения. Скорость размножения побегов составляла в месяц побегов.

После фазы деления побегов гроз дичных растений обеспечивалось образование корней, для чего применялась основная питательная среда с ослабленной в пять раз концентрацией с той разницей, что в эту питательную

среду бьша добавлена индолуксусная кислота в концентрации 0,1 мг/л. . С помощью питательной среды за счет добавления в нее различных коли честв дихлорацетилгексаметиленимина готовилась серия питательных сред различной концентрации и выращивание производилось на эт1-гх питательных средах. Когда корешки достигли за- данного размера, гвоздичные растения для получения саженцев в условия in vivo высаживались в теплицу.

В табл.1 представлен выход прижившихся саженцев по предлагаемому способу.

У гвоздичньгх растений при добавлении дихлорацетилгексаметиленимина в питательную среду количество пе реживших пересадку саженцев гвоздич- ных растений при концентрации 6 мг/л поднялось до 96%. Таким образом,эффективность техники разведения была увеличена более чем на 100%, что существенно улучшает экономичность предлагаемого способа.

П р и м е р 2. Получение вегетатиного материала герберы для тканевой пересадки. Растения герберы размно

жались in vitro по предлагаемому спо-ЗО рольных растений.

собу размножения и образования корневой системы. К одной части пита- тельной среды для образования корневой системы в концентрации 10 мг/л добавлен дихлорацетилгексаметилен- имин и половина растений образовала корневую систему. Затем выращенные in vitro растения бьши помещены в теплицу и у развивавшихся в условиях in vivo растений производился подсчет погибших и переживших саженцоБ, Было установлено, что 98-100% развивших на питательной среде с содержанием 10 мг/л дихлорацетилгексаметиленимина корневую систему растений пережили пересадку, тогда как на необработанной контрольной питательной среде из образовавших корневую систему растений погибло 30-35%. Обработанные растения бьши более плотными, их листы бьши тверже и более развитыми,

П р и м е р 3, Как. и в примере 1, бьш приготовлен вегетационный материал гвоздичных растений с тем отличием, что к разведенному в пять раз основному питательному раствору для стимуляции образования корневой системы вместо индолуксусной кислоты

в концентрации 0,1 мг/л была добавлена п-хлорфеноксиуксусная кислота в концентрации 0,1 мг/л.

Затем к питательной среде были добавлены различные соединения по общей формуле в различных концентрациях и растения вьфащивались на этих .питательных средах до образования корневой системы.

. Когда корни стали достаточно большими для высаживания,-растения были высажены в теплицу и развивались в ней.

Влияние предлагаемых соединений на развитие растений гвоздики представлено в табл.2,

Примененная вместо индолуксусной . кислоты п-хлорфеноксиуксусная кислота повысила долю переживших растений гвоздики с 46 до 61%. С другой стороны видно, что применение растворов соединений согласно изобретению еще больше повысило жизнеспособность после высадки. Стебли и лиСточки выращиваемых гвоздик были толще, а их зеленая окраска отличалась более темным тоном, чем у необработанных контП р и м е р 4. Вегетационньй ма- териал герберы готовился путем тканевого разведения, как указано в при .мере 2. Наименования примененных со,е g динений по общей формуле, концентра- ции, в которых они применялись, и процентное соотношение переживших растений показано в табл.3.

П р.и м е р 6. Как и р примеров-3,

45 ГОТОВИЛСЯ вегетационный материал виноградной лозы для метода тканевого размножения. Примененные соединения по общей формуле, их концентрации, процентное соотношение переживших растений видны из табл.5.

50

55

Пример. Способ по примеру 3 был применен также для размножения не пораженных вирусом привоев яблок. Примененные соединения, их концентрация и процентное соотношение переживших растений показаны в табл,6.

Способ согласно изобретению может успешно применяться для повышения

эф(Ьективности размножения как культурных, так и декоративных растений посредством тканевого разведения,а также для повышения способности к вы- живанию растений после высаживания. Кроме того, стебли и листья обработанных растений становятся сильнее, лучше развиваются, их окраска становится более темной, чем у необрабо- танных .растений, а слой воска на- листьях становится толще.

Обработанные предлагаемым раствором соединений по общей формуле расте .ния после пересадки начинают быст- рее расти и в целом на две недели раньше приобретают размеры, необходимые дпя их реализации в торговле.

Пример. Материал для размножения гвоздик приготовляется путем 20 повышения выхо- выращивания ткани, как в примере 3. Название используемых соединений общей формулы, их используемая концентрация и процент выживающих при посадке растений представлены в табл.7. 25

да приживающихся саженцев, доращивание проростков осуществляют на среде, содержащей дополнительно 2-20 мг/л соединения общей формулы

RCON

/RI

Примере, Материал для размножения герберы приготовляется путем культивирования ткани, как в примере 3. Название используемых соедине- НИИ общей формулы, их используемая концентрация и процент выживающих при посадке; растений представлены в табл.8.

Пример 9. С помощью способа и препаратов согласно примеру 7 приготовляют материал для размножения лишенной колючек малины (ежевики) , винограда и це зараженного виру

Содержание дихло раце тил- гексаметилен- имина в питательной среде мг/л

1

2 4

6 8

10

.12

14

20

О (контроль)

сом яблочного привоя. Соединения общей формулы используются в концентрациях 2,5,10,20 и 50 мг/л, причем сделаны наблюдения, что доля укоренившихся соответственно корню или выживших растений не зависит от концентрации. В табл.9 указаны применяемые соединения и опредепен процент выживания растений.

Формула изобретения

Способ размножения культурных растений in vitro, включающий культивирование эксплантатов в среде Мураси- ге-Скуга и доращивание проростков на той же среде с уменьшенным содержанием макросолей, отличающий повышения выхо-

да приживающихся саженцев, доращивание проростков осуществляют на среде, содержащей дополнительно 2-20 мг/л соединения общей формулы

RCON

/RI

R9

5

где при R -CHj, CHjCl, CHCl,, CClj, R и R вместе - группа (СНз),

или при R - CHClj и Н,-водород, R2-изoпpoпшI, С -С -алкип,циклогек- сил, фенил, бензил, аллил или группа (СН) NCOCHC1;2.

или при R - CHClj и R,- метил,зтил, изопропил или бензил.

Т

или

ИЗОПРОПИЛ, изобутил, амил. Таблица 1

при R - CHClj, R и R каждый Пережившие, %

45

47 64

96

87

70 70

50 43

46

Необработанные (контрольные) растения

N-Ацетил гексаметиленимин

Н-Хлорацетил-гексаметиленимин

Н-Дихлораметил-гексаметиленимин

N-Трихлорацетил-гексаметиленимин

Таблица 2

63 84

82

00

69

63 83

79

100

68

63 82

80

100

68

N-(Дихлорацетил)-11-метил-. -11-бензиламид

Таблица 7

98

100

100

100

15

Необработанный контроль N-(Дихлорацетил)-цикло1417787

16 Таблица

65

62

70