Способ определения прогрессирования хронического гепатита и цирроза печени Советский патент 1988 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии, и может быть применено при диагностике про- грессирования патологического процес са в печени.

Цель изобретения - повышение точности способа

Способ осуа ествляется следующим образом

У больного во время: проведения многоступенчатой пункционной биопсии печени забирают 3-4 мл печеночной крови. Многоступенчатую биопсию пе- чени проводят под общим внутривенным наркозом с применением миорелаксанто короткого действия, что позволяет избежать возможного травмирования паренхимы печени5 связанного с дыханием больного Прокол печени делают на уровне средней подмьшечной линии в 9-10 межреберье двойной иглой, состоящей из наружной иглы- (канюли), которую оставляют в печени и внутренней иглы для взятия биоптата печени, ко- торая на 15 мм длиннее наружной и легко вталкивается в просвет наружной иглы,.

Внутреннюю иглу с биоптат.ом извлекают из печени, а канюлю оставляют в печени и через-нее собирают в пробирку 3-4 мл печеночной крови. Если кровь не течет, канюлю медленно извлекают, пока в канюле не появляется кровь После забора, необходимого дл исследований количества печеночной крови, в канюлю вставляют электрод диатермокоагулятора и производят электрокоагуляцию пункционного канала. Это исключает возникновение лю- бых послеоперационных осложнений.

Параллельно с печеночной кровью забирают 3-4 мл периферической венозной крови из локтевой вены.

Из обеих проб крови стандартным методом центрифугирования.в градиенте плотности фиколл-верографина выделяют лимфоциты, два;кды отмывают их фосфатным буфером и,доводят окончательную концентрацию до 10 млн. .кле- ток в 1 мл. В маленькие силикониро- ванные пробирки микрошприцем берут 50 мкл клеточной взвеси и добавляют 10 мкл конъюгированных л флуоресцеи- ном моноклональнй1х антител, реагиру- ющих со специфическими рецепторами натуральных киллеров (Ж-клеток) . Взвесь инкубируют в течение 1 ч при температуре 4°С, после чего делают

.нативные мазки и исследуют их при по- Moniji флуоресцентного микроскопа, В каждом препарате считают не менее 200 кл.: сначала в ультрафиолетовом спектре считают светящиеся клетки (NK-клетки), после чего микроскоп переключают на режим освещения видимого спектра и в том же поле Зрения оп- 1 ределяют общее число лимфоцитов. Из

общего числа лимфоцитов вычисляют относительное содержание Ж-клеток,

При повышении относительного содержания Ж-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической ве-. нозной кровью на 7,97% и более определяют прогрессирующий патологический процесс в печени,, а при повышении относительного содержания Ж-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью на 1,44% и менее равно как и при отсутствии повышения или даже уменьшении определяют непрогрессирующий патологический процесс.

Пример 1, Больной Ш.А.З, но- м ер .истории болезни 17663 86, поступил в гастроэнтерологическое,отделение с жалобами на боли в правом подреберье, чувство полноты в желудке после употребления жирной пищи, общую слабость, повышенную р-аздражимость, утомляемость, с диагнозом направления; цирроз печени. При осмотре больного отмечена увеличенная на 2 см ниже реберной дуги чувствительная при пальпации печень обычной консистенции. Из анамнеза известно, что больной злоупотребляет алкогольными напитками « После лабораторного обследования констатировано: общий анализ крови - гемоглобин 112 г/л, лейкоцитов 6,9 X 10 в литре, эоз, 5, п.яд.4, сегм.44, лимф,42, мон.6, СОЭ 16, вре мя свертывания крови - начало 5 мин, конец 5 мин 30 с Общий белок 80,9 г/л, альбумины 51,2%, глобулины альфа -1 5,7%, альфа 2 9,8%, бетта 15,4%, гамма 17,9%, Бетта липопроте- иды 4800 г/л. Холестерин 4,1ммоль л. Аланртовая аминотрансфераза 0,28 ммоль/л-ч. 1Делочная фосфатаза 0,24 ммоль/л-ч„ Анализ мочи - норма. Эхоскопическое исследование печени: печень и селезенка увеличеныj увеличено отражение эхо-сигнала по всей печени, расширен диаметр, портальной вены. Для уточнения диагноза .проведена многоступенчатая биопсия печени.

во время которой взят материал для морфологических исследований, а также печеночная и периферическая венозная кровь для параллельного исследования содержания NK-клеток. Установлено, ЧТО в периферической венозной крови содержание Ж-клеток составляло 35,86%, что могло бы указывать на ак1309

25,16%, а в печеночной - 33,13% (разница 7,97%). На основании увеличения содержания Ж-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью диагностировано про грессирование патологического процесса в печени. Повторное комплексное клинико-лабораторное исследование,

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии,. и предназначено для диагностики про- грессирования патологического процесса в печени. Цель изобретения - повышение точности способа. Для этого проводят многоступенчатую биопсию печени под общим внутривенным наркозом с применением миорелаксантов короткого действия, что предотвращает трав-, мирование паренхимы печени, забирают 3-4 мл печеночной крови, параллельно 4°С, забирают 3-4 мл периферической венозной крови. Из обеих проб центрифугированием в градиенте плотности фи- колл-верографина вьщеляют лимфоциты, отмывают их дважды фосфатным буфером, доводят конечную концентрацию до 10 млн. клеток в 1 мл. В пробирки бе-, рут 50 мкл клеточной взвеси, добавляют 10 мкл конъюгированных с флуо- ресцином моноклональных антител, реагирующих со специфическими рецепторами натуральных киллеров (NK-кле- ток). Взвесь инкубируют 1 ч при сделанные нативные мазки исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа. В каждом препарате считают не менее 200 кл.: в ультрафиолетовом спектре считают светящиеся клетки (NK-клет- ки), микроскоп ставят в режим освещения видимого спектра и определяют число лимфоцитов. Из .общего числа лимфоцитов вычисляют относительное содержание Ж-клеток, при его превышении в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью на 7,97% и более определяют прогрессирующий патологический процесс в печени, а при повышении на 1,44% и менее - непрогрессирующий патологичес кий процесс. с S

20

25

тинное прогрессирование патологическо-|0 а также морфологическое исследова- кого процесса. В параллельном исследовании печеночной крови найдено 18,93% Ж-клеток, На основании резкого (на 16,9%) снижения содержания Ж-клеток в печеночной крови по срав- нению с периферической венозной кровью было констатировано снижение ак- тивност и патологического процесса в печени. Повторное комплексное клинико-лабораторное обследование больного, а также анализ морфологического исследования биоптата печени полностью подтвердили правильность поставленного диагноза,

П р и м е р 2, Больная Б.В-Б,Т, номер истории болезни 2161.86, поступила в гастроэнтерологическое отделение с жалобами на боли в правом подреберье, общую слабость, повьшен- ную раздражимость, утомляемость, вре-30 менами появлякрщийся зуд, желтизну глаз, с диагнозом направления: хронический гепатит. При осмотре больного обнаружена легкая желтизна склер, умеренно увеличенная (2 см ниже реберной дуги), чувствительная- при пальпации печень плотной консистенции. Результаты некоторых лабораторных исслед;ований: общий анализ крови -.гемоглобин 117 г/л, лейкоцитов 4,5 X 10 в литре, эоз.1, п.яд,2, сегм.67, лимф,26, мон,3, СОЭ 15, время свертывания крови - начало 4 мин 30 с, конец 4 мин 50 с. Общий белок 69 г/л, альбумины 48,2%, глобулины альфа 1 6-,6%, альфа 2 6,6%, бетта 16,0%, гамма 22,6%. Билирубин общий 15,7 мкмоль л (связанный - 9,0, свободный - 6,7). Бетта липопротеиды 5500 г/л. Холестерин 7,4 ммоль/л. Активность аланиновой аминотрансфе- -разы 0,98 ммоль/л«ч, щелочной фосфа- тазы 2,5 ммоль/л-ч. Для уточнения диагноза произведена многоступенчатая пункционная биопсия печени с параллельным взятием печеночной и периферической венозной крови для определения содержания Ж-клеток, Содержание Ж-клеток в периферической крови

35

40

45

50

55

ние биоптата печени полностью подтвердило достоверность диагноза, по ставленного на основании предлагаем го способа.

П р и м е р 3, Больной У.В.Л., номер истории болезни 4005,86, поступил в 3-е терапевтическое отделен с жалобами на сильную слабость, чув ство полноты в правом подреберье, резкое увеличение объема живота, же тизну кожи и склер, одьппку. При осмотре больного кожа и видимые слизистые умеренно желтушны, на коже туловища - усилен сосудистый рисунок, видны звездочки. При пальпации печень резко увеличенная, бугристая, выступающая из-под правого подреберья на 10 см. Селезенка увеличена, отчетливо констатируется ас цит. Предварительный диагноз: цирро печени, возможно - рак печени. Данные лабораторных исследований: общи анализ крови - гемоглобин 139 г/л, лейкоцитов 6,9 х 10 в литре, зоз,2, сегм.52, лимф,40, мон.6, СОЭ 32, Протеинограмма: общий белок 86,01, альбумины 47,2%, альфа 1 4,5%, альф 2 9,0%, бетта 16,9%, гамма 22,4%, -Х лестерин 6,7 ммоль/л, Бетта липопро теиды 8000 г/л. Билирубин 34 2мкмоль/л Активность аланиновой амино- трансферазы 1,98 ммоль/л-ч, аспа- рагиновой аминотрансферазы Т), 14 мкмоль/л.ч. Для уточнения диаг ноза проведена многоступенчатая пун ционная биопсия печени с параллельным взятием печеночной и перифериче кой венозной крови для определения Ж-клеток, Содержание Ж-клеток в периферической венозной крови - 29,72%, а в печеночной - 57,68% (ра ница 27,9%), На основании резкого увеличения содержания Ж-клеток в п ченочной крови по сравнению с периферической венозной определено резк прогрессирование активности патологического процесса в печени. Послед ющее комплексное клинико-лабораторн обследование, а также морфологическ

0

5

0 а также морфологическое исследова-

0

5

0

5

0

5

ние биоптата печени полностью подтвердило достоверность диагноза, поставленного на основании предлагаемого способа.

П р и м е р 3, Больной У.В.Л., номер истории болезни 4005,86, поступил в 3-е терапевтическое отделение с жалобами на сильную слабость, чувство полноты в правом подреберье, резкое увеличение объема живота, желтизну кожи и склер, одьппку. При осмотре больного кожа и видимые слизистые умеренно желтушны, на коже туловища - усилен сосудистый рисунок, видны звездочки. При пальпации печень резко увеличенная, бугристая, выступающая из-под правого подреберья на 10 см. Селезенка увеличена, отчетливо констатируется асцит. Предварительный диагноз: цирроз печени, возможно - рак печени. Данные лабораторных исследований: общий анализ крови - гемоглобин 139 г/л, лейкоцитов 6,9 х 10 в литре, зоз,2, сегм.52, лимф,40, мон.6, СОЭ 32, Протеинограмма: общий белок 86,01, альбумины 47,2%, альфа 1 4,5%, альфа 2 9,0%, бетта 16,9%, гамма 22,4%, -Холестерин 6,7 ммоль/л, Бетта липопротеиды 8000 г/л. Билирубин 34 2мкмоль/л, Активность аланиновой амино- трансферазы 1,98 ммоль/л-ч, аспа- рагиновой аминотрансферазы Т), 14 мкмоль/л.ч. Для уточнения диагноза проведена многоступенчатая пунк- ционная биопсия печени с параллельным взятием печеночной и периферичес- кой венозной крови для определения Ж-клеток, Содержание Ж-клеток в периферической венозной крови - 29,72%, а в печеночной - 57,68% (разница 27,9%), На основании резкого увеличения содержания Ж-клеток в печеночной крови по сравнению с периферической венозной определено резкое прогрессирование активности патологического процесса в печени. Последующее комплексное клинико-лабораторное обследование, а также морфологическое

исследование пунктата печени полностью подтвердили достоверность диагноза.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет на 47,6% точнее определить пр1огрессирование активности патологического процесса в печени по сравнению с известным и тем самым заблаго- вдеменно начать активные лечебные ме- рЬприятия тем больным, у которых пр едвидится прогрессирование активности патологического процесса в печени, сократить случаи неблагоприятных исходов, коррегировать лечение.

Формула изобретения Способ определения прогресснрова- ния хронического гепатита и цирроза печени путем определения относитель- ,ного содержания натуральных киллеров в периферической венозной крови, о т- личающийся тем, что, с целью повышения точности способа, параллельно определяют содержание натуральных киллеров в печеночной крови и при повышении их содержания на 7,97% и более в печеночной крови по сравнению с периферической венозной кровью, определяют прогрессирование патологического процесса.