Способ прогнозирования инфекционных осложнений у больных ревматизмом с протезированными клапанами сердца Советский патент 1988 года по МПК G01N33/53 

j Изобретение относится к медицине, именно к кардиохирургии. j Целью изобретения является ранняя Диагностика и упрощение способа. г

На чертеже схематически изображен дискриминантный анализ,

Способ осуществляется следующим образом.

Методика определения количества ю Т-лимфоцитов в периферической крови методом розеткообразования с эритро цитами барана (Е-РОК) (по Jondal et al, 1972).

В пробирку с гепарином забирают 15 2 мл венозной крови больного. Кровь наслаивают на верографин (.2 мл с удельным весом 1,077), центрифугируют 30 мин при 1500 об/мин. Отсасывают кольцо ЛИМФОЩ1ТОВ в центрифужную 20 пробирку.и отмывают средой 199 2 раза по 7 мин при 1000 об/мин. Подсчитывают количество Т-лимфодитов (.должно быть не менее ШООООО--1500000 в 1 Мл). в центрифужную пробирку вносят25 0,1 мл взвеси лимфоцитов и 0,1 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов барана, на 15 мин в термостат при

мин при

1000 об/мин и оставляют в холодильнике j на 1 ч. К 0,3 мл взвеси добавляют 0,1 мл 0,6%-ного глютарового альдегида, .пипетируют и оставляют для фиксации на 20 мин при комнатной темпеатуре. Добавляют физиологический створ, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, физиологический раствор сливают, а осадок (0,2-0,5 мл взвеси) наносят на предметное стекло, высушипомещают

37 С, далее центрифугируют 3

водяной бане (при и 15 мин при 18-20 С на воздухе. Делают мазки на стеклах, высушивают на воздухе, фиксируют легким жаром и окрашивают дополнительно 0,1%-ным раствором нейтрального красного в течение/ мин. Подсчет клеток (100 нейтрофилов) осуществляют под микроскопом с масляной иммерсией. НБТ-позитивными считаются только неповрежденные нейтрофилы с четко определяемыми клеточными мембранами, у которых в цитоплазме имеются крупные включения формазана,равные или превосходящие размер ядерных долей.

Приготовление НБТ-краоки. Готовят 2 буфера: первый - 0,2 М раствор од- нозамещенного фосфата натрия; второй - 0,2 М раствор двузамещенногО фосфата натрия.

Конечный рабочий раствор получаем добавлением 100 мл дистиллированной воды к 20 мл первого и 80 мл второго раствора. рН конечного буфера 7,2, Краска готовится путем растворения кристаллического НБТ в фосфатном буфере до концентрации 0,2%. Затем по линейным уравнениям A,-9,647+0,010xXi+0,406xX ; (1) ,107+0,008xXi+0,132xX2, (2) где X , - абсолютное число Т-лимфоцитов (Е-РОК) в 1 мкл крови;

X-2 - фагоцитарная активность нейтрофилов в НБТ-тесте, %, определяют два показателя, которые свравнивают между собой. При значении А, 7 А прогнозируют благоприятное течение послеоперационного периода, а при значе

вают и окрашивают по Романовскому. ™ прогнозируют осложненное

зеткообразующей клеткой считается лимфоцит, присоединивший 3 и более эритроцита барана. Подсчет производится на 100 лимфоцитов в % и затем определяется абсолютное количество Т-лимфо- цитов в 1 мкл крови.

Методика определения фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАЛ.) в НВТ- тесте-(по Park et al, в модификации Ал.А. Демина).

Кровь в количестве 0,9 мл забирают в пробирку с 0,1 мл 5%-ного цитрата натрия, смешивают, встряхивают, центрифугируют 8 мин при 1500 об/мин, сливают плазму, слой лейкоцитов переносят силиконизированной пастеровской пипеткой в силиконизированную.пробирку и добавляют равный объем раствора НБТ, смешивают, инкубируют 30 мин на

течение послеоперационного периода. Указанные показатели получены путем дискриминантного анализа лабораторных данных. Была поставлена задача нахождения решающего правила для прогноза послеоперационных инфекционных осложнений. ГРУППЫ больных с ос- ложенным и не осложненным течением послеоперационного периода до операции статистически достоверно (Р -с 0,01) отличались по двум иммунологическим показателям: ФАЛ и Е-РОК. Эти показатели и были включены в анализ для нахождения решающего правила, В результате дискриминантного анализа были получены две дискриминантные функции: А и А. Указанные дискриминантные функции разделяют признаковое пространство на 3 области: 1 - где

предполагается развитие инфекционных осложнений; 2 - где предполагается гладкое течение послеоперационного периода; 3 - пограничная область.

Для того, чтобы определить, будут или нет развиваться у конкретного больного инфекционные осложнения, значения Х и Х- подставляют в указанные уравнения и находят значение А и А2. Физический смысл А, и Aj - это расстояние в пространстве признаков от классифицируемого объекта (т.е. конкретного больного) до границ между областями 1-3 и 2-3. В за-- висимости от того, какое расстояние больше, определяем, в какой области (1-й или 2-й) находится объект. Если объект находится в 3-й области, то с помощью дискриминантных функций определяем, к границе с какой областью (1-й или 2-й) он расположен ближе. .

Статистическая обработка проведена на ЭВМ-ЕС-1022 по программе DISCR пакета прикладных программ SSP.

Для исследованных групп больных у казанные показатели являются постоянными величинами.

Пример 1. Больная И, 44 лет, с диагнозом: ревматизм, неактивная фаза. Сочетанный митральный порок с преобладанием недостаточности, IV стадия, IV функциональный класс. Больна в течение 22 лет, последние 3 года прогрессировали признаки недостаточности кровообращения с отсутствием эффекта от проводимой консервативной терапии. Исходные показатели клеточного иммунитета были снижены: число Т-лимфоцитов составило 998 клеток в 1 мкл крови,фагоцитарная активность нейтрофилов в НБТ-тесте 4%. При решении уравнения (1) с учетом перечисленных показателей получен результат 1,957,ауравнения (2) 3,405. 1,957- ,405, что позволило предполагать осложненное течение послеоперационног го периода. Затем была произведена операция имплантации искусственного клапана МКЧ-3-25 в митральную позицию На 7-е сут после операции у больной возникло нагноение послеоперационной раны с последующим развитием гнойного медиастинита.

Пример. 2. Больная С., 47 лет. Поступила с диагнозом: ревматизм, неактивная фаза. Недостаточность митрального клапана, IV стадия IV функциональный класс. Был имплантирован

0

5

искусственный клапан ЖЧ-3-25 в митральную позицию. До операции содержание Т-лимфоцитов составило 2032 клеток в 1 мкл крови, фагоцитарная активность нейтрофилов в НБТ-тесте 16%. При решении уравнения (1 получен результат 17,169, а уравнения (2) 13,261. Таким образом, значение уравнения (1) больше значения уравнения (2), что дало возможность прогнозиро-; вать благоприятное течение послеоперационного периода, которое и имело место у данной больной.

Предлагаемый способ прогнозирования применен у 50 больных, в 75% случаев прогноз совпал с истинным течением послеоперационного периода.

Предлагаемый способ прогнозирования инфекционных послеоперационных осложнений у больных ревматизмом с протезированными клапанами сердца дает возможность прогноза указанных осложнений еще до операции; в усло- 25 ВИЯХ клиники это может диктовать необходимость проведения комплекса лечебно-профилактических мероприятий, направленных на предупреждение развития осложнений, в дооперацион- ном периоде.

Данный способ имеет достаточно высокую точность прогноза (см.табл.) и, кроме того, прост в выполнении (отсутствует взятие биоптата). В таблице приведены показатели клеточного иммунитета ФАЛ и Е-РОК до операции у больных с гладким и осложненным течением послеоперационного периода М+т.

0

0

35

Формула из обретения

Способ прогнозирования инфекционных осложнений у больных ревматизмом с протезированными клапанами сердца пу-. тем определения в биологическом материале Т-лимфоцитов, от. дичающий с я тем, что, с целью ранней диагностики и упрощения способа, исследование проводят в периферической крови методом реакции розеткообразова- ния, дополнительно определяют фагоцитарную активность нейтрофилов в НЕТ- тесте, рассчитывают первый показатель исхода заболевания по формуле

А,-9,647 0,010-Х,+ 0,406-X,j, а второй показатель по формуле

,107 + O,00a-Xi+ 0,132-Х,

5I2i29027

где A, - первый показатель исхода и при значении первого показателя

заболевания;больше второго прогнозируют благоА. - второй показатель исхода

заболевания;

Х - абсолютное число Т-лимфоци- тов (Е-РОК) в 1 мкл крови;

приятное течение послеоперационног периода, а при значении первого по зателя меньше второго - осложненно течение.

Х - фагоцитарная активност15 нейт- рофилов в НБТ-тесте, %,

ФАЛ, % 7,70+0,66 4,и±0,83 0,01 Е-РОК, абс. 1630,00+106,31 1150,33+95,02 :0,01

/Г

Offbef(

приятное течение послеоперационного периода, а при значении первого показателя меньше второго - осложненное течение.