СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ ТРАВМЫ Российский патент 2003 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохирургии и клинической биохимии, и может быть использовано для прогнозирования гнойно-воспалительных осложнений черепно-мозговой травмы.

Исход черепно-мозговой травмы в значительной степени определяет развитие гнойно-воспалительных осложнений. Известно, что возникновение и развитие гнойно-воспалительного процесса находится в прямой зависимости от функционального состояния иммунной системы (с развитием иммунопатологии). Выяснение тонких механизмов изменения гомеостаза определяет современное направление научного поиска. Интерес к выяснению роли системы глутатиона в иммунокомпетентных клетках у больных с травмами в настоящее время имеет обоснованную базу фактов, связанную с многообразными функциями глутатиона. Так, известно, что глутатион влияет на активность многочисленных ферментов и других белков, участвует в биосинтезе нуклеиновых кислот, участвует в обмене эйкозаноидов, метаболизме ксенобиотиков, восстанавливает и изомеризует дисульфидные связи, защищает клетку от активных форм кислорода. Показатели системы глутатиона позволяют судить об интенсивности липидной пероксидации и состоянии антирадикальной защиты в организме (1).

Известен способ прогнозирования и диагностики внутричерепных воспалительных осложнений после черепно-мозговой травмы по динамике изменения числа Т-лимфоцитов в реакции розеткообразования и нейтрофилов (по Е-розеткообразоввнию, восстановлению нитросинего тетразолия, активности и интенсивности фагоцитоза, лизосомальной активности нейтрофилов (2). В периферической крови больных определяют относительное и абсолютное содержание Т- и В- лимфоцитов в реакции розеткообразования (Т-РОК и В-РОК) и нейтрофилов по тестам нейтрофильного розеткообразования, восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), активность и интенсивность фагоцитоза (АФ, ИФ), лизосомальную активность нейтрофилов на 3, 5, 7, 14-21 сутки с момента поступления.

Повышение уровня нейтрофильного розеткообразования, НСТ-теста, активности и интенсивности фагоцитоза нейтрофилов позволяет прогнозировать возникновение внутричерепного гнойного процесса, снижение количества спонтанных розеткообразующих и формазан-положительных нейтрофилов является показателем неблагоприятного течения внутричерепного гнойного осложнения.

Данный способ прогнозирования и диагностики внутричерепных воспалительных осложнений имеет ряд недостатков:
- затруднена интерпретация массива лабораторных данных, что существенно влияет на качество прогноза;
- способ требует большого количества трудоемких лабораторных исследований, повторяемых неоднократно.

Известен способ прогнозирования течения гнойно-воспалительных послеоперационных осложнений, взятый в качестве прототипа, путем определения показателей иммунной системы больных непосредственно перед началом операции и на вторые сутки послеоперационного периода посредством розеткообразования лимфоцитов больного после инкубации с аутоплазмой и без нее (3). Высчитывают индекс отношения количества ОПК-РОК (обработанные плазмой крови розеткообразующие клетки) к количеству активных Т-лимфоцитов (обработанные эритроцитами барана). При значении показателя больше 1,1 прогнозируют благоприятное течение послеоперационного периода, при значении 1,0 и меньше - возникновение гнойно-воспалительных осложнений.

Однако метод определения розеткообразующих клеток с применением аутоплазмы не является достаточно достоверным, поскольку, во-первых, аутоплазма пациента обязательно несет в себе множество факторов, не столько ускоряющих, сколько тормозящих образование розеток (4). Активность факторов может изменяться в течение суток, тем самым изменяя величину рассчитываемого индекса, что сказывается на точности способа.

Для повышения точности способа прогнозирования гнойно-воспалительных осложнений в лимфоцитах периферической крови больных с черепно-мозговой травмой определяют активность глутатионпероксидазы на первые и третьи сутки после травмы. Рассчитывают отношение активности ГПО₁ первых суток к активности ГПО₃ третьих суток и при значении индекса ГПО₃/ГПО₁ более 1,1 прогнозируют возможность развития гнойно-воспалительного осложнения черепно-мозговой травмы.

Предлагаемый способ прогнозирования гнойно-воспалительных осложнений выполняют следующим образом.

При поступлении в стационар у пациента с риском развития гнойно-воспалительного осложнения черепно-мозговой травмы в комплексном лабораторном обследовании выполняют биохимическое исследование.

Забор крови у пациентов осуществляют без жгута путем пункции локтевой вены или из катетера, установленного в центральном венозном русле. В качестве стабилизатора используют гепарин в концентрации 250 ЕД/мл. Лимфоциты из крови выделяют с помощью изопикнического центрифугирования в градиенте плотности (1,077 г/см³) фиколл-верографин ("Pharmacia", Швеция) по методу A. Boyum (5).

Активность ГПО определяют по утилизации восстановленного глутатиона (ВГ) с использованием в качестве субстрата гидроперекиси третичного бутила (ГПТБ). Для этого 1 мл раствора среды Хенкса, содержащего 2•10⁶ лимфоцитов, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Супернатант убирают, к осадку лимфоцитов добавляют 0,3 мл 0,1М трис-НСl-буфера рН 8,5 (в 1 мл буфера содержится 0,1 мг ЭДТА, 0,78 мг NaN₃ и 1 мг ВГ) и инкубируют в термостате при 37^oС в течение 10 мин. Реакцию запускают внесением 70 мкл 0,14% раствора ГПТБ. После инкубации в течение 5 мин при 37^oС реакцию останавливают внесением в пробирки по 0,2 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Пробы центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, и супернатант используют для определения количества ВГ аналогично вышеописанной методике. Активность фермента рассчитывают на основании разницы количества ВГ в опытной и контрольной пробах и выражают в наномолях ВГ, окисленного ГПО за 1 мин 10⁶ клеток (нмоль ВГ•мин^-1/10⁶ клеток). В контрольные пробы вместо раствора ГПТБ вносят эквивалентное количество Н₂О.

Высчитывают индекс отношения или "индекс воспаления":
ГПО₃/ГПО₁,
где ГПО₃ - показатель активности глутатионпероксидазы на 3 сутки с момента травмы, а ГПО₁ - показатель активности глутатионпероксидазы первых суток.

Параметры получаемого коэффициента трактуют следующим образом. Если коэффициент больше 1,1, то прогнозируется воспалительное осложнение заболевания. Если коэффициент меньше 1,1, то прогнозируется благоприятное течение ЧМТ (без гнойно-воспалительных осложнений).

Показатели активности глутатионпероксидазы именно на 1 и 3 сутки с момента травмы взяты для осуществления метода на основании собственных данных (табл.1). Известно, что именно третьи сутки после ЧМТ характеризуются максимальным отеком головного мозга, проявлениями полиорганной декомпенсации и, в частности, увеличением активности ГПО.

Исследования были проведены у 50 больных с открытой черепно-мозговой травмой (ЧМТ) в остром периоде (до 1 месяца). Оценка тяжести ЧМТ проводилась на основании длительности и степени утраты сознания больного (по шкале Глазго), неврологической симптоматики, данных ЭЭГ и ЭхоЭГ. У 22 больных течение острого периода ЧМТ с 3-х суток было осложнено интракраниальным инфекционно-воспалительным процессом (нагноением внутричерепных гематом, менинго-энцефалитом, формированием интракраниальных абсцессов).

Учитывая возможное влияние различных факторов (прежде всего - геоклиматические и экологические), были определены референтные пределы для ГПО (табл. 2) в условиях Забайкалья.

Предлагаемый способ прогнозирования может быть широко использован в лечении больных с различными нозологическими формами, а также в оценке течения послеоперационного периода больных, прооперированных в экстренном и плановом порядке. Методика универсальна и высокоинформативна в любых случаях, где существует риск возникновения воспалительных осложнений. Выполнение методики не требует исключительных средств для осуществления - сложной аппаратуры или дорогостоящих реактивов.

Предложенный способ позволяет с большей точностью диагностировать возникновение и тяжесть проявлений гнойно-воспалительных осложнений черепно-мозговой травмы, что расширяет возможности для более эффективного лечения больных, позволяя своевременно вносить необходимую коррекцию в планы лечения.

Предлагаемый способ диагностики обеспечивает достижение эффективного медицинского результата, а именно: информативность с высокой степенью точности, снижение количества неблагоприятных исходов заболеваний больного за счет своевременной коррекции лечения и, в конечном результате, сокращение сроков лечения.

Примеры выполнения способа в клинической практике.

1. Больная А. , 32 лет, поступила в нейрохирургическое отделение с диагнозом: Закрытая черепно-мозговая травма, ушиб головного мозга средней степени тяжести. Госпитализирована в течение первых суток после получения травмы. При поступлении и на третьи сутки проведено биохимическое исследование - определение активности ГПО в лимфоцитах больного, определен "индекс воспаления", величина которого составила 0,9. Выполнено традиционное лечение: дегидратация, антибиотикотерапия; назначены антигипоксанты, антиконвульсанты, ноотропные препараты. Клиническое течение черепно-мозговой травмы без осложнений. Больная выписана в удовлетворительном состоянии на 19 сутки.

2. Больной Б., 42 лет, поступил на первые сутки после травмы в нейрохирургическое отделение с диагнозом: Закрытая черепно-мозговая травма, ушиб головного мозга тяжелой степени. При поступлении и на третьи сутки проведено биохимическое исследование - определение активности ГПО в лимфоцитах больного, определен "индекс воспаления", величина которого составила 1,1. Выполнено традиционное лечение. Клиническое течение черепно-мозговой травмы без осложнений. Больной выписан в удовлетворительном состоянии на 20 сутки.

3. Больной С., 27 лет, поступил на первые сутки после травмы в нейрохирургическое отделение больницы с диагнозом: Открытая тяжелая черепно-мозговая травма, ушиб головного мозга, перелом костей свода черепа, ушибленная рана головы. При поступлении и на третьи сутки проведено биохимическое исследование - определение активности ГПО в лимфоцитах больного, определен "индекс воспаления", величина которого составила 1,4. Диагностировано осложнение основного диагноза - менингоэнцефалит. Наличие осложнения объективизировано с помощью дополнительных методов исследования - компьютерной томографии головного мозга, общего анализа ликвора. Выполнено традиционное лечение. Клиническое течение черепно-мозговой травмы с осложнениями, заживление послеоперационной раны первичное, хороший регресс очаговой неврологической симптоматики. Больной выписан в удовлетворительном состоянии на 21 сутки.

Источники информации
1. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. // Успехи современной биологии. -1990. - Т.110, вып.1 (4). - С.20-37.

2. Родюкова E. H., Харитонова К.И., Ступак И.Н., Ступак В.В. Изменение факторов клеточного иммунитета при гнойных осложнениях проникающей черепно-мозговой травмы // Вопр. нейрохирур. - 1992. - 2-3.-С.12-15.

3. А. с. 1629847 А1 СССР, G 01 N 33/53. Способ прогнозирования течения послеоперационных гнойно-воспалительных осложнений / Ж.Ш. Жумадилов (СССР). - 4438383/14. Заявлено 08.06.88. Опубл. 23.02.91, Бюл. 7. 1991. - 2 с.

4. Гамалея Н.Ф., Шишко Н.П., Касинская Н.П., Черный А.П. Суточные ритмы Е-розеткообразующей способности лимфоцитов человека // Иммунология. - 1990. - 1. - С.21-23.

5. Boyum A. //Scand. J. clin. Lab. Invest. - 1987. - Vol.97. - Suppl. 21. - P.77-89.

Изобретение относится к области медицины, в частности к нейрохирургии и клинической биохимии. Способ позволяет повысить точность прогнозирования гнойно-воспалительных осложнений черепно-мозговой травмы. Проводят биохимическое исследование крови, при этом определяют активность глутатионпероксидазы (ГПО) в лимфоцитах на первые и третьи сутки после травмы, рассчитывают отношение активности ГПО₁ первых суток к активности ГПО₃ третьих суток и при значении индекса ГПО₃/ГПО₁ более 1,1 прогнозируют возможность развития гнойно-воспалительного осложнения черепно-мозговой травмы. 2 табл.

Способ прогнозирования гнойно-воспалительных осложнений черепно-мозговой травмы путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что определяют активность глутатионпероксидазы (ГПО) в лимфоцитах на первые и третьи сутки после травмы, рассчитывают отношение активности ГПО₁ первых суток к активности ГПО₃ третьих суток и при значении индекса ГПО₃/ГПО₁ более 1,1 прогнозируют возможность развития гнойно-воспалительного осложнения черепно-мозговой травмы.