Способ количественного определения ретикулоцитов в крови Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине а именно к гематологии. Цель изобретения - ускорение И упрощение способа.

Пример 1. Крыс линии Wistar ;усыпляют под эфирным наркозом. Кожу тщательно обрабатывают дезинфицирую- ;щим раствором (спирт 70), Стимуля- iцию ретикулоцитоза проводят путем I ежедневного отбора крови из хвостовой вены 50-60 капель в течение 5 6 дн, либо введением 60 мг/кг фенют- гидразина внутрибрюшинно (дважды чв - рез 48 ч), В обоих случаях нараста- ние числа ретикулоцитов в перифери™ ческой крови обнаруживают через 5- 6 дн. Для определения содержания ре- Тикулоцитов берут 7-8 капель крови из хвостовой вены в пробирку содержащую физраствор и 2 мг гепарина. Затем туда же добавляют 2-3 капли насыщенного раствора бриллиантового кре- зклового синего (1,2 г на 100 мп абсолютного спирта). Количество добавл емой краски достаточно для прокрашивания. При большем количестве затруняется отмывание пробы от краски. Тщательно перемешивают, закрывают пробкой.и оставляют на 10-15 мин для прокрашивания при комнатной температуре. После этого проба отмывается от краски в 5-кратном объеме физраствора в течение 5 мин при 350g. При такой скорости все эритроциты оседают и практически отсутствует разруше ни€; эритроцита. Отбирают недостаточную жидкость и повторяют процедуры 3 или 4 раза до прозрачного цвета недостаточной жидкости. При возможности полностью отбирают надосадоч-- ную жидкость и определяют содержание ретикуло1днтов. С этой целью эритрома су набирают в капилляр (примерно 90% длины капилляра) хщаметром 1,0 мм и

.

5

10

5

20

-25

30

35

40

длиной 75 мм. Чем выпе длина капилляра и уже диаметр, тем выраженней столбики элементов крови - эритроцитов и ретикулоцитов.

Со стороны заполнения капилляр закупоривают и помещают в диск гема- токритной центрифуги. Вращение происходит в горизонтальной плоскости в течение 10 мин при 500g. При таком времени и скорости происходит разделение по плавучей плотности эритроцитов и ретикулоцитов.

Определение ретикулоцитов. После центрифугирования определяют ретику- лоциты количественно в процентах по соотношению зоны ретикулоцитов (синий цвет) , в общей высоте, занимаемой клетками (желтовато-зеленоватые и синий), в капилляре.

Если высота зоны ретикулоцитов ( цвет) 4 мм, то высота общей зоны, занимаемой эритроцитами и ре- тикулоцитами (желтовато-зеленоватые и синий) , 20 мм.

В таком случае количество ретикулоцитов составляет 20%,

Формула изобретения

Способ количественного определения ретикулоцитов в крови путем окрашивания пробы бриллиантовым кре- зилсвым синим, отличающий- с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, окрашенные пробы промывают физиологическим раствором, центрифугируют 5 мин при 35Og, затем переносят в капилляр диаметром 1 мм, центрифугируют 10 мин при 1500g, измеряют общую высоту столбика жидкости,, окрашенной в желто-зеленый и синий цвета, и столбика5 окрашенного в синий цвет, НПО их соотношению определяют количество ретикулоцитов в крови.

Изобретение относится к медицине, касается гематологии. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Стимуляцию ретикулоцитоза проводят лабораторным животным путем ежедневного отбора крови из хвостовой вены (50-60 капель) 5-6 дн или введением 60 мг/кг фенилгидразина внут- рибркшинно (дважды через 48 ч). Нарастание числа ретиколоцитов в периферической крови обнаруживают через 5-6 дн. Для определения содержания ретикулоцитов пробу крови из хвостовой вены помещают в пробирку с физиологическим раствором и гепарином и добавляют 2-3 капли насыщенного ; р-ра бриллиантового крезилового синего (,2 г на 100 мл абсолютного спирта). После 10-15-минутного прокрашивания пробу отмывают от краски в 5- кратном объеме физраствора при 35Qg, Эритроциты оседают без раярушения, Отбирают надосадок и 3-4 раза повторяют процедуру до прозрачного цвета надосадка определяют со- держание ретикулоцитов, для чего эритромассу центрифугируют 10 мин при 1500g. В результате происходит разделение по плавучей плотности эритроцитов и ретикулоцитов. Ретику- лоциты определяют количественно в прО центах по соотношению высоты зоны ретикулоцитов (синий цвет) в общей высоте, занимаемой клетками (желтовато-зеленоватые и синий) в капилляре.