Способ определения повреждений клеток экстремальным физическим воздействием Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

4::

СП

Изобретение относится к радиобиологии, медицине, селекции и может быть использовано для определения пореждения и относительной устойчивости организма к действию радиации I .и других экстремальных факторов. Цель изобретения -; упрощение и

I ускорение способа, а также раннее i определение повреждений клеток.

IЦель достигается тем, что, в проI бах нативных клеток до и после воздействия радиации и других повреждающих факторов в процессе микроэлектрофореза определяют минимальный ток - мии смещения 10% ядер и ядрьппек и по

изменениям показателя Т

судят о

степени повреждения и о различии в устойчивости объектов к экстремаль- ным воздействиям.

Объектами оценки повреждения являются клетки человека, растений, животных.

Способ осуществляется следующим образом.

Для анализа берут соскоб клеток эпителия внутренней поверхности щеки наносят его на покровное стекло с добавлением одной капли воды и накрвают вторым покровным стеклом. Все

дальнейшие исследования проводят in vitro. Пробы клеток буквального зпи- телия, заключенные между двумя покровными стеклами, подвергают действи высокой температуры, для чего помещают их во влажную камеру и погружают водный термостат (или облучают их гамма-лучами Со , или подвергают их действию УФ-излучения). Далее препат рат помещают в камеру для микроэлек рофореза, представляющую собой предметное стекло, на котором на расстоянии 20 мм друг от друга укреплены платиновые электроды. Камеру устанавливают под объективом микроскопа МБИ-3, наблюдение ведут при увеличении к 400о Выводы электродов камеры подключают к прибору для электрофореза и включают прибор. Плавно увеличивая ток, определяют минимальный ток

S Р котором 10% клеточных ядер или ядрьшек начинают смещаться.

Пример 1. Клетки буккального эпителия человека, двух доноров воз-tf раста 20 лет и 40 лет прогревают в течение 20 мин при 70°С. До прогрева минималь ий ток смещения клеточных ядер составляет для первого доно

J5

20

25

30

35

- .

0

5

ра 70 мкА, для второго 100 мкА. После прогрева - 140 мкА и 190 мкА. П р и м е р 2. Клетки буккального эпителия тех же доноров подвергают облучению гамма-лучами мощностью 8 мкр/с. В контроле 1, 20-летнего донора 70 мкА, 40-летнего 100 мкА. При экспозиции 1 мин минимальный ток смещения после облучения у первого донора составляет 240 мкА, у второго 310 мкА, при экспозиции 10 мин.

IVMH У первого донора 420 мкА, у второго 500 мкА.

Пример 3. Эпидермис 7-дневных проростков гороха берут на расстоянии 10 мм от меристемы стебля. Определяют минимальный ток смещения ядрьш1ек в ядрах клеток эпидермиса до и после 20-минутного прогрева,проростков при 40 и 42 С в водном термостате. До прогрева минимальный ток смещения ядрьщ1ек составлял 150 мкА,- после прогрева - 340 мкА и 420 мкА.

П р и м е р 4. Проростки гороха подвергают облучению гамма-лучами мощностью 8 мкр/с. В контроле IMMH 150 мкА. При экспозиции 1 мин минимальный ток смещения после облучения составляет 290 мкА, при экспозиции 10 мин и 60 мин 380 мкА и 460 мкА.Пример5. Проростки гороха подвергают облучению УФ-лучами.. Источник излучения - лампа ПРК-2, мощностью 375 Вт, спектр лампы 220 - 380 мм. Минимальный ток смещения яд- рьплек в контроле составляет 120 мкА. При экспозиции Гмин I uocлe облучения составляет 280 мкА, при экспозиции 5 мин и 10 мин - 420 мкА и 670 мкА.

П р и м е р 6. Минимальный ток смещения клеточных ядер слюнных желез дрозофилы определяют в норме и после прогрева в термостате при 37 и 40 С в течение 20 мин. До прогрева минимальный ток смещения ядер слюнных желез дрозофилы составлял 220 мкА, после прогрева - 300 мкА и 340 мкА.

Формула изобретения

Способ определения повреждений клеток экстремальным физическим воздействием, включающий микроскопиро- вание до и после воздействия, от- личающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа,

- 1451600

а также раннего определения поврежде- рой наблюдается смеще)сие 10% ядер НИИ, в процессе микроскопированияи/или ядрьппек, и при увеличении ее

клетки подвергают электрофорезу, ре-значения после воздействия определягистрируют величину тока, при кото-ют повреждение.

Изобретение относится к радиобиологии, медицине, селекции, касается определения степени повреждения и относительной устойчивости к действию радиации и других экстремальных факторов; С целью упрощения и ускорения способа, а также для раннего определения степени повреждения натив- ных клеток радиацией и другими экстремальными воздействиями путем оценки их биоэлектрических показателей для повышения точности используют для определения минимальный ток смещения (1„им ) ядер и ядрьшек до и после воздействия и по изменениям показателя судят о степени повреждения и о различиях в устойчивости объектов в к экстремальшлм воздействиям. Способ позволяет значительно ускорить исследование клеток и тканей с помощью мнкроэлектрофореза. о $ (О