Способ контроля безвредности коклюшной вакцины Советский патент 1989 года по МПК A61K39/10 C12Q1/00 

1

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам оценки безвредности коклюшной вакцины.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Пример. Вьщеляют альвеолярные макрофаги мьшей, доводят их концентрацию до 1x10 кл в мл среды 199. В 3,5 мл среды 199 добавляют 20 мг агаро- зы и растворяют на кипящей водяной бане. После полного растворения ага- розы температуру раствора доводят до и добавляют 1,5 мл инактивиро- ванной прогреванием сыворотки крупного рогатого скота. Суспензию клеток смешивают с равным объемом раствора агарозы и поддерживают температуру . С помощью микрошприца на дно прогретых до 37°С пластиковых планшетов наносят по 1 мкл смеси клеток

(Л

с раствором агарозы. Затем планшеты охлаждают до 10 мин для застывания нанесенных капель смеси, после чего в лунки добавляют 0,4 мл среды 5 199 с добавлением 50 ед/мл пенициллина и исследуемой вакцины. Лунки герметизируют нетоксичной лентой для заклеивания планшетов и помещают в

to

термостат при 37 С на 20 ч.

По окончании времени инкубации планшеты рассматривают под микроскопом, предварительно перевернув их

15 дном лунок вверх. Подвижность клеток оценивают, измеряя диаметр зон миграции в двух взаимно перпендикулярных направлениях с помощью шкалы микрометра. Изменение подвижности макрофа20 гов оценивают по величине индекса миграции (ИМ), который рассчитывают по формуле:

1

;:ь

со

14544734

Диаметр зойы миграции в опь1те.

ДЙамётр зоньГмйг рации в контроле

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам оценки безвредности коклюшной вакцины. Цель изобретения - повьшгение чувствительности способа. Для осуществления способа выделяют альвеолярные макрофаги мьш1ей, смешивают их с агарозой и вносят на дно планшетов. Затем добавляют исследуемую вакцину. После инкубирования оценивают подвижность макрофагов по величине индекса миграции. Безвредная вакцина не должна оказывать ингибирукнцего действия на подвижность альвеолярных макрофагов. По чувствительности способ превосходит сушествукнцие методы контроля. 1 табл.

I

Вакцина не должна оказьюать инги бирующего действия на подвижность альвеолярных макрофагов.

Изменением подвижности считают 1оказа:тели ИМ, отличающиеся от контроля при р 0,05.

При исследовании действия корпускулярной коклюшной вакцины из штамма :Ю5 на подвижность альвеолярных мак- офагов установлено, что угнетение подвижности происходит при использо- кании вакцины в концентрациях 100 млн.м.кл/мл, 1 мпра и 10 мпра 1.кл/мл (см. таблицу).

При испытании той же вакцины по способу-прототипу было установлено, что последняя безвредна в концентрации менее 312,5 млн.м.к./мл. По данным теста на токсичность для мьш1ей данная вакцина была токсична в дозе 10 мпра м.к.

Таким образом,предложенный способ контроля безвредности коклюшной вакцины в 3 раза чувствительнее способа-пртотипа и в 102 раз чувствительнее теста на токсичность для мышей.

Аналогичные результаты получены при испытании коклюшных вакцин, приготовленных из Bordetela pertussis штаммов 38, 312, 345, что свидетель icTByeT об универсальности способа.

1формула изо

бретения

f Способ контроля безвредности кок- о пюшной вакцины при совместном инкубировании исследуемой вакцины и тест

культуры in vitro с последующим учетом результатов по сравнению с контролем, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения чувствительности способа, в качестве тест-культуры клеток используют альвеолярные макрофаги мьш1ей и безвредность вакцины определяют по изменению подвижности макрофагов.

Влияние коклюшной вакцины (штамм 305) на подвижность альвео- , лярных макрофагов

Диаметр зон миграции в мкм (доверительный интервал с вероятностью больше или равной 957,) .