Способ прогноза рецидивирующего течения рожи Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

1

Изобретение относится к медицине и может найти применение в практическом здравоохранении для прогнозирования часто рецидивирующей формы рожи на основе исследования в крови генетически наследуемых антигенов системы HLA.

Цель изобретения - повьшение точности прогнозирования часто рецидивирующей формы рожи.

Способ осуществляют следующим образом./

У больного рожей, поступившего в стационар, в первый же день берут из вены 4-5 мл венозной крови и дефиб- ринируют ее путем помешивания стеклянной палочкой в течение 7-8 мин до образования сгустка фибрина. Затем 2 мл дефибриНИРованной крови смешивают с равным объемом среды Хенкса и наслаивают осторожно пастеровской пипеткой на градиент плотности верографин-фиколла. Последний готовят путем смешивания 8%-ного

водного раствора фиколла и 32,8%-ного водного раствора урографина в соотношении 10:24 плотностью 1,076- 1,077. Операцию проводят в пробирке диаметром 12-15 мм, куда помещают 2,5 мл смеси верографин-фиколла. Центрифугируют 30-40 мин при 200g, после чего отсасывают осторожно белое облачко лимфоцитов, образовавшихся в интерфазе, и переносят его в мерную центрифужную пробирку; Добавляют 2 объема трис-буфера и .центрифугируют 10 мин при 200 g. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспензируют в растворе Хенкса (0,3-0,5 мл), доводя концентрацию лимфоцитов до 2-410 в 1 мл. С го момента суспензия лимфоцитов готова для реакции. Антигены системы HLA определяют методом микролимфоци тотоксической реакции по Терасаки, используя для этого набор отечественных антилимфоцитарных сывороток. Панель включает 120 типирующих сыво(Л

СП

X X)

II р и м е р 1 да. Находилась в 5 инфекционном отделении больницы скорой медицинской помощи № 1 им. Н.А. Семашко г. Ростов-на-Дону по поводу первичной эри- темгСтозно-буллезной рожи левой голени. Поступила на 3-й день болезни с типичными проявлениями заболевания. При исследовании крови был выявлен следующий набор антигенов HLA:

ч; л,;

Вт; в

6

15

оток, содержащих антитела к 17 ан- игенам сублокуса А, к 25 антигенам ублокуса В и к 8 антигенам сублокуа С. Типирующие сыворотки раскапы- ают в лунки планшетов Терасаки под азелиновое масло и замораживают (-20°С) до момента использования. еред использованием сыворотки размораживают при комнатной температуре, ю Лимфоцитарную взвесь раскапывают микрошприцом Терасаки в планшеты по 1|U 1 на лунку и инкубируют при 22 С 30 мин вместе с типирующей сывороткой. В каждую лунку добавляют 5jul свежеразмороженного кроличьего комплемента и инкубируют при комнатной температуре 1 ч. После этого встряхиванием удаляют из планшетов вазелиновое ма сло и закапывают в каждую лунку l|ul трипана голубого. Спустя 10 мин избыток краски удаляют встряхиванием и учитывают реакцию. Клетки, пораженные цитотоксическими антителами, окрашены в голубой цвет и имеют нечеткие контуры вследствие начавшегося лизиса. Интенсивность лимфоцитотоксической реакции оценивают по. следующей шкале: 100-81% гибель клеток - резко .выраженная положительная реакция; 80-41% гибель клеток - выраженная положительная реакция; 41-31% гибель клеток - положительная реакция; 30-21% гибель клеток - сомнительная реакция; 20-0% гибель клеток - отрицательная реакция.

Больная Г., 72 го20

25

Отсутствие у больной антигена HLA В, позволило прогнозировать малую вероятность развития часто рецидивирующей формы рожи. Больная получала общепринятую терапию рожи. На 15 день болезни была выписана из стационара. В течение последующих 2,3 лет диспансерного

наблюдения рецидивов заболевания

не зарегистрировано.

П р и м е р 2. Больной В., 37 лет,

поступил на лечение в 1-й день болез

ю

с диагнозом первичной рожи правой

5

0

.голени, эритематозной формы. Заболел остро с повышения температуры тела до 39,2°С, появления симптомов иток- сикации и характерного для рожи поражения кожи в области правой голени. При исследовании крови в наборе лейкоцитарных антигенов был выявлен и антиген HLA В,у (А, ; А„ ; В,; ). Сделано заключение о повышенном риске часто рецидивирующего течения рожи.Спустя b дней больной по семейным обстоятельствам был выписан из стационара. От проведения рекомендованного противорецидивного лечения отказался. Через 3 мес возник реци- див заболевания. Лечился амбулатор- но. В течение последующих 1,5 лет наблюдения возникло еще три рецидива рожи, появились признаки развивающейся слоновости правой нижней конечности...

Преимуществом предлагаемого способа по сравнению с прототипом является возможность прогнозирования у впервые заболевших рожей наиболее неблагоприятной, часто рецидивирующей формы заболевания. Из 50 больнык 0 первичной рожей у 5 больных развилась часто рецидивирующая форма заболевания, не выявленная с использованием известного способа. В то же время с использованием предлага емого способа из 101 обследованных больных у 14 больных с неблагоприятным прогнозом развилась в дальнейшем часто ре-, цидивирующая форма рожи. Кроме того, использование генетических показа5

5

0

телей, а именно антигенов системы

HLA, позволяет по сравнению с известными способами значительно сократить сроки проведения исследования и осуществлять прогнозирование часто ре- 45 цйдивирукнцей формы рожи в первые часы заболевания, т.е. сразу при поступлении больного в стационар. Таким образом, предлагаемый способ позволяет прогнозировать в самые ранние сроки, болезни развитие часто рецидивирующей формы рожи при наличии в крови больного генетически наследуемого антигена HLA Выявление у больных первичной рожей этого антигена свидетельствует о высокой, генетически обусловленной вероятности развития частых рецидивов заболевания. Это является основанием для назначения уже в раннем перио де

50

55

514588266

болезни противорецидивного леченияванием, отличающийся

с рекомендациями проведения его пов-тем, что, с целью повышения точности

торных курсов в поликлинических усло прогноза, из исследуемой крови вьщевиях.ляют лимфоциты, обрабатывают антилимфоцитарной сывороткой, определяют Формула изобретенияантигены главного комплекса гистосовСпособ прогноза рецидивирующегоместимости и при наличии антигена

течения рожи, включающий забор крови B,j прогнозируют рецидивирующую фор- V больных с последующим ее исследо ю му рожи.

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - повышение точности прогноза. Взвесь лимфоцитов вносят в лунки и инкубируют с анти- лимфоцитарной сывороткой. В лунки добавляют кроличий комплемент и инкубируют. Затем удаляют вазелиновое масло и добавляют трипан голубой. Определяют антигены главного комплекса гистосовместимости. При наличии антигена В,5 прогнозируют рецидивирующую форму рожи.