Способ определения антианоксической активности лекарственного препарата на ткань Советский патент 1989 года по МПК A61K31/00 

1

Изобретение относив я к медицине, в частности к кардиофармакологии, и может быть использовано при изучении фармакоди- намических особенностей используемых лекарств, поиска новых лекарственных средств и оптимизации путей фармакологической коррекции постише.мических состояний сосудистой гладкой мускулатуры.

Цель изобретения - повышение досто- вернос ти способа за счет дополнительной оценки нормализации сократительной функции.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый образец помещают в физиологический- раствор Кребса, содержащий 60±0,1 мМ калия хлорида, подают в раствор азот взамен кислорода, а через 15± ±2 мин аноксического периода снова осуществляют подачу в раствор кислорода взамен азота, сравнивают скорость развития быстрой фазы калиевой контрактуры за 120±5 с, затем описанные выще действия повторяют, а после периода острой аноксии в физиологический раствор Кребса вводят исследуемое лекарственное вещество и проводят статистическую обработку данных. Исследуемое лекарственное вещество вводилось в раствор Кребса после вторичного воздействия острой аноксией.

Пример. Сердце собаки со вскрытой под наркозом грудной клеткой останавливают путем введения воздуха в полость левого желудочка. Затем вскрывают перикард и и.

О

О)

ел

20

сердца собаки выделяют сегмент (в середине верхней трети) передней межжелудочковой ветви левой коронарной артерии и сразу помещают его в раствор Кребса. Перед началом эксперимента из сосудистого сег- г мента приготовляют кольцеобразные отрезки шириной 1 мм и диаметром 1,5-1,8 мм (в зависимости от веса и возраста собаки, так как участок выделения сегмента коронарной артерии строго определен). Все манипуляции с сосудистыми препаратами выполняются в растворе Кребса. Сегмент коронарной артерии хранится в растворе Кребса при +4°С не более 48 ч.

Приготовленный кольцеобразный отрезок помещают в рабочую камеру емкостью 15 ше н ие скорости развития быстрой фазы ка- 5 мл на два крючка, один из которых был не-лиевой контрактуры после периода острой

подвижно закреплен к стенке камеры, а другой соединен со LUTOKOM механотрона типа 6МХ2Б, с помощью которого и проводится измерение механической активности сосудистой гладкой мускулатуры в изометрическом режи.ме. Через камеру с постоянной скоростью (15 мл/мин) циркулирует оксигени- рованный (95°/о О. и 5% СОг) раствор Кребса, имеющий рН в пределах 7,4±0,05 и температуру 38,±0,1°С. Перед введением ги- 25 неркалиевого раствора сосудистый препарат выдерживается в камере 2 ч (период адаптации). Для измерения напряжения, кислорода в рабочей камере используют полярограф типа ПА-3 с двухэлектродной систе- д активности ле ка рственного препарата на мой. Начальная нагрузка на сосудистый пре- ткань, содержащую миоциты, путем поме- парат составляет 1000± 10 мг. Запись меха- щения исследуемого образца в физиологи- нограммы проводят на самописце Н-39 со ческий раствор и воздействия возбуждаю- скоростью движения ленты 3 мм/мин. Для щ сократительный аппарат миоцитов сред- активаций электромеханической связи в мио- ством в условиях нормоксии и аноксии и цитах коронарных артерий используют ги- 35 анализа амплитуды сокращения в указанных перкалиевые растворы Кребса, содержащие условиях, отличающийся тем, что, с целью 60 ±0,1 мМ калия хлорида. Изменения концентрации ионов калия осуществляют за счет эквивалентных изменений концентрации ионов натрия в растворе Кребса. В ряде опытов для создания аноксии раствор Кребса аэрируют газовой смесью, состоящей из 950/0 азота и 5% СОг.

На фоне развившейся калиевой контрактуры вызывают аноксию введением в рабочую камеру гиперкалиевого раствора Креб-45 ле периода острой аноксии в физиологичес- са,аэрированного азотом и углекислым газомкий раствор вводят исследуемое лекарственВыдерживают в условиях аноксии 15±2 минцое вещество и при уменьшении скорости

(колебания во времени связаны с незначи-развития быстрой фазы калиевой контрактельной разницей в скорости расслабления .ур j периода острой аноксии опреде- сосудистых препаратов). В этот период на- ют антианоксическую активность.

блюдается выраженное расслабление сосудистых гладких мыщц. Через указанный промежуток времени аноксия сменяется на нор- моксию и из.меряется скорость развития (в мг/мин) быстрой фазы возникшего сокращения в гиперкалиевом растворе Кребса, аэрированного 950/0 Oi и 50/0 СО за 120± ±5 с (это время, за которое в условиях нормоксии развивается большая часть быстрой .,,-, фазы калиевой контрактуры). Затем описанные действия повторяют, а после периода острой аноксии в раствор Кребса вводят исследуемое лекарственное вещество и проводят статистическую обработку данных. Обнаружено статистически достоверное уменьаноксии, а именно до аноксии 376,1/326,65- 425,55/±20,7 мг/мин, после аноксии 198,3/ /146,7-249,9/±21,6 мг/мин (п 12; ,05), Общественно-полезный эффект от использования предлагаемого решения по сравнению с известными состоит в том, что предлагаемый способ повыщает достоверность экспериментальных исследований в области лекарственной коррекции постишемических состояний сосудистой гладкой мускулатуры.

Формула изобретения Способ определения антианоксической

повышения достоверности способа за счет дополнительной оценки нормализации сократительной функции, исследуемый образец помещают в физиологический раствор, аноксию создают путем подачи азота, а через 15±2 мин аноксического периода снова осуществляют подачу в раствор кислорода, сравнивают скорость развития быстрой фазы калиевой контрактуры за 120±5 с, затем пос

ше н ие скорости развития быстрой фазы ка- лиевой контрактуры после периода острой

блюдается выраженное расслабление сосудистых гладких мыщц. Через указанный промежуток времени аноксия сменяется на нор- моксию и из.меряется скорость развития (в мг/мин) быстрой фазы возникшего сокращения в гиперкалиевом растворе Кребса, аэрированного 950/0 Oi и 50/0 СО за 120± ±5 с (это время, за которое в условиях нормоксии развивается большая часть быстрой фазы калиевой контрактуры). Затем описанные действия повторяют, а после периода острой аноксии в раствор Кребса вводят исследуемое лекарственное вещество и проводят статистическую обработку данных. Обнаружено статистически достоверное умень

ше н ие скорости развития быстрой фазы ка- лиевой контрактуры после периода острой

аноксии, а именно до аноксии 376,1/326,65- 425,55/±20,7 мг/мин, после аноксии 198,3/ /146,7-249,9/±21,6 мг/мин (п 12; ,05), Общественно-полезный эффект от использования предлагаемого решения по сравнению с известными состоит в том, что предлагаемый способ повыщает достоверность экспериментальных исследований в области лекарственной коррекции постишемических состояний сосудистой гладкой мускулатуры.

ивности ле ка рственного препарата на нь, содержащую миоциты, путем поме- ния исследуемого образца в физиологи- кий раствор и воздействия возбуждаю- сократительный аппарат миоцитов сред- ом в условиях нормоксии и аноксии и лиза амплитуды сокращения в указанных овиях, отличающийся тем, что, с целью

Формула изобретения Способ определения антианоксической

активности ле ка рственного препарата на ткань, содержащую миоциты, путем поме- щения исследуемого образца в физиологи- ческий раствор и воздействия возбуждаю- щ сократительный аппарат миоцитов сред- ством в условиях нормоксии и аноксии и анализа амплитуды сокращения в указанных условиях, отличающийся тем, что, с целью

ле периода острой аноксии в физиологичес- кий раствор вводят исследуемое лекарственповышения достоверности способа за счет дополнительной оценки нормализации сократительной функции, исследуемый образец помещают в физиологический раствор, аноксию создают путем подачи азота, а через 15±2 мин аноксического периода снова осуществляют подачу в раствор кислорода, сравнивают скорость развития быстрой фазы калиевой контрактуры за 120±5 с, затем пос

Изобретение относится к медицине, касается кардиофармакологии, предназначено для изучения фар.макодинамических свойств используе.мых лекарств, ноиска новых лекарственных средств, оптимальной фармакологической коррекции постишемических состояний сосудистой гладкой мускулатуры. Цель изобретения - повышение достоверности способа за счет дополнительной оценки нормализации сократительной функции. Для этого исследуемый образец помещают в физиологический р-р Кребса, содержащий 60±0,1 мМ калия .хлорида, подают в р-р азот взамен кислорода, через 1,5± ±2 мин аноксического периода вновь подают в р-р кислород взамен азота, сравнивают скорость развития быстрой фазы калиевой контрактуры за 120±5 с, вновь повторяют все процедуры и после периода острой ано- ксии в физиологический р-р Кребса вводят исследуемое лекарственное в-во и статистически обрабатывают данные. Исследуемое лекар ственное в-во вводят в р-р Кребса после вторичного воздействия острой аноксией. (О (/)