Способ диагностики активной фазы ревматического заболевания Советский патент 1989 года по МПК G01N33/49 

1

Изобретение относится к лабораторной диагностике и может быть использовано для диагностики активной фазы ревматических заболеваний.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что. в бестромбоцитной плазме венозной крови комплекс фибрин - фибриноген осаждают протаминсульфатом, центрифугируют, промывают осажденный комплекс с последуюпщм растворением его и спектрофотометрированием,после чего количество растворимого фибрина определяют из соотношения фибрин

к осадку 1:(2,80-2,92), при обнаруже- НИИ растворимого фибрина диагностируют активную фазу ревматических заболеваний.

Способ осуществляется следующим образом.

К 0,5 МП исследуемой бестромбоцитной плазмы венозной крови прибавляют 0,5мл 1%-ного раствора прота- минсульфата в 0,06 М фосфатном буфере, рН.7,4, М 0,15. Смесь перемешивают и вьщерживают 30 мин при 25°С, после чего центрифугируют 15 мин при 2500 об/мин. Полученный осадок дважды промывают 0,9%-ным раствором хпо

ю

рида натрия и после второго промывания выдерхивают пробирку 5 мин в перевернутом видво Затем осадок растворяют в 3 мл 1,5%-ного раствора уксусной .кислоты и.спектрофотометриру- ют при 280 и 320 нм. Расчет концентрации растворимого фибрина вляют из соотношения фибрина к осадку 1 : (2,80-2,92).

Расчет концентрации фибрина (мг/л производят по формуле:

& „V 10000

z v К

f

V - V

й

280

где С - концентрация комплекса растворимый фибрин - фр1бриноген мг /л;

К 2,86 - коэффициент, учитываю чдай отношение белка в осадке к фибрину; объем взятой плазмы, мм ; объем спектрофотометриче рованного раствора, мм ; разница экстинкций раствора при длинах волн 280 и 320 нм; 15,0 - коэффициент зкcтинкцшi

фибриногена в кислой среде Например, если V 0,, V 3,0 мл, то U.8 0,290-0,024 0,266.

Следовательно, С 372 мг/л. При обнарухении растворимого фибрина в плазме крови диагностируют активтпо фазу ревматических заболеваний,

У всех 28 обследованных здоровых лиц растворимый фибрин в плазме крови не определялся,

П р и м ер 1 о Больной Л,, 32 лет Кгшнический диагноз: Ревматоид1мй артрит, серонегативный, быстропрог- рессиру ОР,ее течение, активность I1T степени} с множественным поражением мелких и крупных суставов верхних и нижних конечностей, ФИС II степени Исследование при поступлении в ста- ционар: К 0,3 мл цитратной плазмы венозной крови больного, лишенной тромбоцито}з, центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин, при- бавили 0,5 мл 1 %-ног о рас тв ора про- таминсульфата в 0,06 М фосфатном буфере, рН 7,4, М 0,15. Смесь перемешали и выдержали 30 мин при 25 С, после чего цемтрифз гировали 15 мин при 2500 об/мин. Полученный осадок дважды промьши .0,4%-ным раствором

хлорида натрия, затем выдержали пробирку 5 мин в перевернутом виде,Осадок растворили в 3 мл 1,5%-ного раствора уксусной кислоты и спектрофо- тометрировали при 280 нм. После спектрофотометрирования нолучили ве- личиIiy экстинкций раствора 0,405 при длине волгам 280 нм и поправку на мутность 0,063 при длине волны 320 нм. Количество растворимого фибрина рассчитали по формуле

С

V 10000

Z-V

К

IOj ОбЗ) ШООО Г15,0 2,86

478 мг/л.

Количество растворимого фибрина значительно повьгаено. Другие лабораторные данные :СОЭ 48 мм/ч, С-реак- тивный белок сыворотки 3 мм, концентрация сиаловых кислот 0,390 ммоль/л, сС-2.-глобулины сыворотки 12,4%, Y-глобулины 28,6%.

В приводимом примере клинические данные и известные лабораторные данные соответствуют активности воспа- лителтьного проп,есса ЦТ степени. Резкое повыше.ние концентрации растворимого фибрина в плазме адекватно клиническим и известным лабораторным дан}й№. Диагноз III степени активности ревматоидного артрита подтвержден,

П р и м е р 2. Тот же больной,что .и в примере 1 . Исследование после двухнедельного лечения в стационаре, сопровождавшегося значительным клиническим улучпяениём. Ход исследования идентичный описанному в примере . После спектрофотометрирования получили величину экстинкций раствора 0,210 при длине волны 280 нм и поправку на мутность 0,020 при длине волны 320 нм.

Расчет количества растворимого фибрина в исследуемой плазме

.. i2000

r-v к .

С

-.(Oj.2iOz0 020}j 3 0000 . 0,5 15 2,86

266 мг/л.

Таким образом, концентрация раст- воримого фибрина в плазме крови боль ного значительно снизилась, что

ответствует клиническому улучшению. В то же время СОЭ у больного продол- оставаться резко повышенной (46 мм/ч), С-реактивный протеин по-прежнему 3 мм, а концентрация |f - глобулинов в сыворотке повысилась до 31,4%. Известные лабораторные показатели активности ревматического процесса оказались менее динамичными, чем концентрация растворимого . фибрина в крови.

П р и м е р 3. Больной Б., 39 лет Клинический диагноз: Остеоартроз (остеоартрит) коленных суставов,ФНС I степени,

Ход исследования тот же, что и в предыдущих примерах. После спектро- фотометрирования получили величину экстинкции раствора 0,050 при длине волны 280 нм и поправку на мутность 0,050 при длине волны 320 нм. Расчет концентрации растворимого фибрина в исследуемой плазме:

С

Л У ЮООр

s:-V K

( )

075-15 , 86

Pacтвopи ьпЧ фибрин в испытуемой плазме не обнаружен, что позволило .исключить диагноз остеоартрита (т.е. активную фазу воспалительного процесса) и подтвердить диагноз остеоарт- роза (т.е. неактивной фазы воспалительного процесса).

Для проверки диагностической ценности предлагаемого метода проведены параллельные исследования растворимого фибрина и ПРФ (известный способ) в плазме крови у 28 здоровых лиц, у 49 больных ревматическими заболеваниями в активной фазе (21 бальной ревматоидным артритом, 13 - ос- теоартритом, 9 - системной красной волчанкой, .2 - системной склер.одер- мией, 2 геморрагическим васкулитом 2 - интестинальным полиартритом) и у 18 больных ревматическими заболеваниями в неактивной фазе (4 больных ревматоидным артритом, 13 - остеоарт- розом, одна больная склеродермией). Как видно из табл,1, частота обнаружения в плазме растворимого фибрина у больных ревматоидным артритом, остеоартритом и ревматическими заболеваниями в целом достоверно (соответственно на 48-77%) превьппает

711326

частоту обнар ткения ПРФ у тех же лиц. Следовательно, точность диагностики с использован ем предпагаемого спосо- ба вьш1е по сравненшс с известным - определением .

В табл. 2 срлвнкваетсл частота обнаружения растворимого фибрина и ПРФ в плазме крови одних и тех же 10 больных ревматическими заболеваниями в зависимости от акчивности процесса (49 больных активной и 8 больных в неактивной фазе).

15Таким образом, наличие растворимого фибрина в крови является достоверно (на 33-43%) более точным критерием активности процесса при ревматических заболеваниях, чем наличие 20 ПРФ.

В табл.3 сравниваются абсолютные значения концентрации растворимого фибрина, ПРФ и концентрации фибриногена в плазме крови у 12 больных рев- 25 матоидным артритом до начала лечения и через 2 недели после начала лечения. Концентрация фибриногена выбрана как известный показатель активности ревматического процесса, 30

Из приведенных в табл.3 данных следует, что концентрация растворимо- го фибрина в крови является более лабильным критерием активности рев- 2g матоидного артрита, чем концентрация фибриногена и ПРФ. У одного из 12 больных, у которого двухнедельное лечение было неэффективным, концентрация растворимого фибрина сущеетвен- 40 но не изменилась (соответственно 508 и 483 мг/л). У. остальных II больных концентрация растворимого фибрина в крови существенно снизилась, но не достигла нормы, поскольку активность 45 воспалительного процесса при эффективном лечении ревматоидного артрита снижается, но не ликвидируется в двухнедельньй срок. Снижение концентрации растворимого фибрина в крови, 0 таким образом, является ранним лабораторным признаком снижения активности ревматического процесса и может служить надежным объективным критерием эффективности проводимого лече- 5 J -имеет несомненное практическое значение.

Использование предлагаемого способа обеспечивает повышение точности лабораторной диагностики ревма7.14

тических заболеваний (по сравнению с известным) за счет увеличения (на 43%) частоты положительных результатов в активной фазе этих заболеваний, yNieHbmeHHH (на 33%) - практически устранения - ложноположительных результатов в неактивной фазе заболеваний и более адекватного (статистически достоверного) отражения динамики активности ревматического процесса.

Формула изоб-ретения

Способ диагностики активной фазы ревматического заболева шя путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, отделяют бестромбоцитарную плазму крови, обрабатывают ее протаминсуль гЪатом, полученную смесь центрифугируют, осадок промывают раствором

8

хлорида натрия, растворяют в уксусной кислоте, спектрофотометрируют при 280 и 320 нм, затем рассчитьгааю содержание комплекса растворимый фибрин - фибриноген по формуле

д i v : ipoop к

С

где G - концентрация комплекса,мг/л,

V - объем взятой плазмы, мм ; V - объем спектрофотометри- . рованного раствора, мм ; Л Е25о -5X0 разница экстинк- ций раствора при 280 и 320 нм;

21 15,0 - коэффициент экстинкции фибриногена в кислой среде; К 2,86 - коэффициент, учитывающий отношение белка в осадке к фибрину,

и при обнаружении растворимого фибрина диагностируют активную фазу ревматического заболевания,

Т а б л и ц а 1

Изобретение относится к области медицины, в частности, к кардиологии. Целью изобретения является повышение точности. Для этого бестромбоцитарную плазму крови обрабатывают протаминсульфатом. Смесь перемешивают и выдерживают при температуре 25°С в течение 30 мин., после чего центрифугируют, осадок промывают раствором хлорида натрия, растворяют в уксусной кислоте и спектрофотометрируют при длиннах волн 280 и 320 нм. Затем проводят расчет концентрации комплекса растворимого фибрин/фибриногена в мг/л с учетом объема взятой крови, объема спектрофотометрированного раствора, разницы экстинкций раствора при 280 и 320 нм и коэффициента экстинкции фибриногена в кислой среде и при его наличии диагностируют активную фазу ревматического заболевания. Способ позволяет повысить точность за счет увеличения на 43% частоты положительных результатов в активной фазе этого заболевания и уменьшения на 33% ложно-положительных результатов в неактивной фазе заболевания. 3 табл.

21 13

21 13

15 14

49 48

Ревматические заболевания в активной фазе Ревматические заболевания в неактивной фазе

49 48 92 ±249 27 55± ,001

0+6186 33± 11 . 0,05

21 13

11 3

52± 1 1 23+12

0,001 г:0,001

93171513 87±9

0,1

98±24927 55i7

0,OQ

Таблица2

0+6186 33± 11 . 0,05

- сравнение соответствующих величин с группой здоровых лиц - сравнение средних величин соответствующего показателя до и после лечения, ,

1471132

10 ТаблицаЗ