Способ определения содержания растворимого фибрина в плазме крови Советский патент 1987 года по МПК G01N33/50 

10

Изобретение относится к медицине, а именно к клинико-лабораторной диагностике, и может быть использовано при диагностике заболеваний, связанных с патологией системы гемостаза.

Целью изобретения является повышение точности и чувствительности способа за счет изменения концентрации раствора протаминсульфата, добавляемого к плазме крови, и введения поправочного коэффициента при расчете количества растворимого фибрина.

Способ осуществляют следующим образом,

К аликвоте свежевзятой бестромбо- цитарной цитратной плазмы прибавляют равный объем раствора протаминсульфата (на фосфатном буфере) до конечной концентрации последнего 0,4-0,6% Смесь тщательно перемешивают и инкубируют 30 мин при 25 С. Осадок отделяют центрифугированием, дважды промывают физиологическим раствором и растворяют в 1,5-5%-ной уксусной кислоте, 25 раствор спектрофотометрируют при длине волны 280 мм с поправкой на мутность при 320 нм.

Расчет растворимого фибрина провогде ,86, что учитывает отношение экстинкции белка в осадке к экстинкции фибрина; V - объем взятой в тест плазмы; V - объем спектрофотометрированного

раствора; ЬЕ ff -

- IBO

-E,jg- разница экстинкции раствора

при длинах волн 280 и 320 нм; 2 коэффициент экстинкции фибриногена в кислой среде равен 15,00. при ,5; ,0 и ,120 - 15 ,8 мг%.

П р и м е р 2. Определение и расчет проводят как в примере 1, но для осаждения к плазме прибавляют 0,5 мл 0,8%-ного раствора протаминсульфата (конечная концентрация протаминсульфата равна 0,4%), а осадок растворяют в 3 мл 3,0%-ной уксусной кислоты

1000

20

ЛЕ V f V

2Q о

йЕ-142,,6 мг%о

П р и м е р 3. Определение и расчет проводят как в примере 1, но для осаждения прибавляют 0,5 мо 1,2% протаминсульфата (конечная концентрация дят по формуле, исходя из соотношения 30 равна 0,6%),, а осадок растворяют в фибрина к осадку 1: (2,8-3,0),з мл 5%-ной уксусной кислоты.

I

г -uf V Z

Пример 1. В коническую пробику объемом 10-12 мл вносят 0,5 мл патологической плазмы, термостатирую 2-3 мин при 25 С и прибавляют-равный объем 1%-ного раствора протаминсульфата в 0,06 М фосфатного буфера, рН 7,4, U 0,15, . Конечная концентрация протаминсульфата равна 0,5%. Смесь тщательно перемешивают и выдерживают 30 мин при 25 С, после чего осадок отделяют центрифугированием при 2,5 тыс. об/мин в течение 15 мин и дважды промывают физиологи- ческим раствором с последук)щим центрифугированием. После последнего центрифугирования пробирки переворачивают вверх дном на фильтровальную бумагу и дают стечь несколько минут. Полученный осадок растворяют в 3 мл 1,5%-ной уксусной кислоты и получен

ный раствор спектрофотометрируют при длине волны 280 НМ с поправкой на мутность при 320 нм. Количество фибрина рассчитывают по формуле

С (мг7) V 1000 0,Ur/oJ-. у j ,

0

25

где ,86, что учитывает отношение экстинкции белка в осадке к экстинкции фибрина; V - объем взятой в тест плазмы; V - объем спектрофотометрированного

раствора; ЬЕ ff -

- IBO

-E,jg- разница экстинкции раствора

при длинах волн 280 и 320 нм; 2 коэффициент экстинкции фибриногена в кислой среде равен 15,00. при ,5; ,0 и ,120 - 5 ,8 мг%.

П р и м е р 2. Определение и расчет проводят как в примере 1, но для осаждения к плазме прибавляют 0,5 мл 0,8%-ного раствора протаминсульфата (конечная концентрация протаминсульфата равна 0,4%), а осадок растворяют в 3 мл 3,0%-ной уксусной кислоты

1000

0

ЛЕ V f V

2Q о

йЕ-142,,6 мг%о

I

uf V Z

V

з7о I

Е-133,,4 мг%.

Пример4. В этом примере проводят сравнительное определение количества растворимого фибрина в модельных смесях предлагаемым и известным спосбоами. Моделью служит донорская плазма с внесенным известным количеством фибрина. Известньш способ воспроизводят с применением препарата протаминсульфата фирмы Sigma. В предлагаемом способе для осаждения применяют отечественный препарат Хабаровского фармакологического завода. Данные, полученные обоими способами,

приведены в таблице. I

Как видно из таблицы, известный

5 О 5 0

способ обладает слабой чувствительностью, В пробах же с высоким содержанием растворимого фибрина результаты, полученные этим способом, зна- gg чительно превышают внесенное количество фибрина. Это объясняется тем, что в осадке, наряду с фибрином, обнаруживается значительное количество фибриногена, что пoдtвepждaют экспе313541

риментальные данные, полученные с помощью электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия восстановленных дитйотриэтголом протаминсульфат- ных осадков.

Формула изобретения

Способ определения содержания растворимого фибрина в плазме крови, включающий осаждение протаминсульфа- том, промывку комплекса фибриноген- фибрин с последующим растворением

Составитель В.Гудошников Редактор А.Ворович Техред Л.Олийнык Корректор С.Черни

Заказ 5688/40 Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

15

его и спектрофотометрическим анализом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и чувствительности способа, осаждение проводят при соотношении объемов плазмы к протаминсульфату 1:1 до конечной концентрации последнего 0,4-0,6%, дважды промытый комплекс растворяют в 1,5-5%-ном растворе уксусной кислоты и после фотометрирования количество растворимого фибрина определяют из соотношения фибрина к осадку 1: :(2,8-3,0),

Изобретение может быть использована при диагностике заболеваний, связанных с патологией системы гемостаза. Цель изобретения - повьшение точности и чувствительности способа. К цитратной плазме прибавляют раствор протаминсульфата на фосфатном буфере. Смесь перемешивают, инкубируют и центрифугируют. Осадок растворяют в уксусной кислоте, спектрофотомет- рируют и определяют содержание растворимого фибрина в плазме крови. Для осаждения используют отечественный препарат. 1 табл. со ел 4