Питательная среда для накопления адгезивных антигенов К-99 ЕSснеRIснIа coLI Советский патент 1989 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/19 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при изготовлении диагностических препаратов и производстве вакцин.

Цель изобретения - повышение выхода биомассы и специфической активности целевого продукта.

Питательную среду готовят следую-, щим образом.

Взвешивают компоненты среды, вносят их в колбу, наливают водопроводную воду до 1 л, помещают в водяную баню до момента расплавления агар- агара. Устанавливают рН среды 7,2- , Стерилизуют при 0,5 ати в течение 20 мин о

Фильтрат культуральной жидкости пекарских дрожжей, входяпщх в состав среды в качестве стимулятора

роста, получают след пощим образом. 100-150 г пекарских дрожжей смешивают с 1 л водопроводной воды, подогревают до 23-25 С, к смеси добавляют 10 г глюкозы и 10 г хлористого натрия. Дрожжи подращивают в этой среде 3-4 ч и затем фильтруют через ватномарлевьш;фильтр. Полученный фильтрат стерилизуют при 100 С в течение 20 мин и затем вводят в среду

Использование питательной среды иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Готовят среду, как описано, при этом компоненты среды берут в следующих количествах, г/л: гидролизат казеина 1,5; фосфорнокислый калий однозамещеиный 1,35; фосфорнокислый натрий двузамещенный 1,0; глюкоза 10; очиг(ен11ый агар-агар

Ю

4;:

СО

сд

26; фильтрат культуралыюй жидкости пекарских дрожжей, полученный описанным способом, 80 мл; вода водопроводная до 1 л.

Стимуляцию роста и увеличение накопления адгезивных антигенов определяют по плотности микробных тел в 1 мл смьюа с агаровой среды при культивировании штаммов Е. coli с наличием пилей адгезии К-99. При культивировании штаммов Е. coli на указанном варианте среды плотность микробных тел в 1 мл составляет 1,5- 1,6 млрд.

Пример 2. Для культивирования продуцента используют питательну среду следующего состава, г/л: гид- ролиэат казеина 1,75; фосфорнокислый калий однозамещенный 3,36; фосфорно- кислый натрий двузамещенный 1,05; глюкоза 12,5; очи1ценный агар-агар 28 фильтрат культуральной жидкости пекарских дрожжей 90; вода водопроводная до 1 л.

Плотность микробных тел в 1 мл составляет 1,4-1,7 млрд.

Пример 3, Для культивирования продуцента адгезивных антигенов используют питательную среду следующего состава, г/л: гидролизат казеина 2; калий фосфорнокислый однозамещенный 1,38; натрий фосфорнокисльй двузамещенньш 1,1; глюкоза 15; очищенный агар-агар 30; фильтрат культуральной жидкости пекарских дрожжей 100; вода водопроводная до 1 л

Плотность.микробных тел в 1 мл составляет 1,6-1,7.

При культивировании аналогичных штаммов Е. coli на известной среде накопление микробных клеток не пре- вьшало 500 млн./мло

Пример 4,, Для изучения специфичности адгезивных антигенов К-99 культивируют 54 штамма на опытной (предлагаемой ) и контрольной (известной) средах, с последздощим . использованием тестов определения специфичности в реакции маннозо- резистентной гемагглютинации (РМГА) реакции аггл1отинац,ии (РА, иссле- дования под электронным микроскопом

0

5

5

0

(ЭМ) на предд ет обнаружения пилей адгезии. Результаты исследования по- казьгоают, что культивирование Е. coli в опытной среде способствует накоплению адгезивных антигенов, которые по сравнению с антигенами, полученными на контрольной среде, более специфичны в РМГА на 13%, в РА - 20,4%, в ЭМ - 11,1%.

Таким образом, использование питательной среды позволяет повысить выход биомассы микроорганизмов, специфичность адгезивньк антигенов К-99, а также удешевить производство этих антигенов за счет замены дорого- стояп;их компонентов среды.

Формула изобретения

Питательная среда для накопления адгезивных антигенов К-99 Escheric- hia coli, содержащая источник азота, глюкозу, минеральные соли, уплотнитель и воду, отличающаяся тем, что, с целью повьшения выхода биомассы и специфической активности целевого продукта, она дополнительно содержит фильтрат культуральной 0 жидкости пекарских дрожжей, полученной после 3-4-часового подращивания в водной среде при массовом соотношении дрожжей, глюкозы и хлористого, натрия (100-15(5): 10:10 в 1 л воды, в качестве источника азота она содержит гидролизат казеина, в качестве минеральных солей - фосфорнокислый однозамещенный калий и фосфорнокислый двузамещенный натрий, в качестве уплотнителя - очищенный агар-агар при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Гидролизат казеина 1,5-2,0 Фильтрат культуральной жидкости пе кар- ских дрожжей80-100

Глюкоза10,0-15,0

Фосфорнокисльй однозамещенный калий l,35-lj38 Фосфорнокисльй двузамещенньш натрий 1,0-1,1 Очищенный агар-агар 26,0-30,0 Водопроводная вода Остальное

5

0

5

0

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для накопления адгезивных антигенов К-99 эшерихи. Цель изобретения - повышение выхода биомассы и специфической активности целевого продукта. Для получения адгезивных антигенов культуру E.COLI выращивают на питательной среде, содержащей (г/л): гидролизат казеина 1,5-2,0

80-100 фильтрата культуральной жидкости пекарских дрожжей, полученной после 3-4-часового подращивания в водной среде при массовом соотношении дрожжей, глюкозы и NACL 10-15:1:1 в 100 мл воды, глюкозу 10-15

KH₂PO₄ 1,35-1,38

NA₂HPO₄ 1,0-1,1

очищенный агар-агар 26-30

остальное - водопроводная вода (рН среды 7,2-7,4). Специфичность антигена проверяют в реакциях агглютинации и маннозо-резистентной агглютинации с помощью электронной микроскопии.