Способ обработки спермы быка Советский патент 1987 года по МПК A61D7/02 

1

Изобретение относится к способам обработки и хранения спермы и может быть использовано на станциях искусственного осеменения и госплемстан- циях.

Цель изобретения - стабилизация биологической полноценности спермы и повышение ее оплодотворяющей способности.

Пример 1. Свежеотобранную сперму разбавляют защитной средой и сразу после этого на каждый 1 мл спермы добавляют андекалин в дозе 1-10 ед. Обработанную таким образом сперму хранят при и при -196 С после эквилибрации в течение 3-4 ч при 2-4°С и последующего заморажива3,0

о1,4

х

5,0

б 3,0

1,А

в 3,0

1.4

г 3,0

1.А

2,0 6,0 4,0 75-90 75-90 75-90 75-90

100

100

100

100

В табл,1 показано влияние различного содержания желтка куриных яиц на качественные показатели спермы.

Сразу после разбавления защитной средой в опытные группы добавляют андекалин для инъекций в следующих количествах, ед, на 1 мл спермы: 1(а); 5(6); 10(в),

Раствор андекалина готовят непос- редственно.перед применением, раст- , воряя содержимое флакона в дистиллированной воде (в одном флаконе 40 ед,)

В табл,2 показано влияние различного содержания апдекалина на качественные показатели спермы.

Биологическую полноценность спермы, обработанной предлагаемым и известным способами, оценивают по показателям подвижности спермиев по утечке аспартат-трансаминазы (АсТ), по состоянию акросомы.

Подвижность спермиев определяют согласно ГОСТу в раздавленной капле

314992

ния в парах ЖИДКОГО азота. Контрольные пробы, предназначенные для хранения при 2-4 и -19б С, разбавляют глюкозо-цитратно-желточной и лактозо- желточно-глицериновой средами.

Каждый зякулят делят на две пробы, одну из которых сразу после разбавления обрабатывают андекалином, 10 т,е, по предлагаемому способу, а другую - по известному способу.

П р и м е р 2, Пробы спермы разбавляют защитной средой. Опытные пробы спермы, предназначенные для кратковременного хранения при , разбавляют защитной средой следующего состава:

в 3,0

1.4

г 3,0

1.А

100

100

100

спермы под микроскопом в проходящем свете при увеличении 100x180 раз с . использованием нагревательного столика при 40-41 с. Оценку подвижности спермиев производят по 10-балльной шкале, Аспартат-трансаминазу определяют в плазме спермы после центрифугирования при 3 000 об/мин в течение 20 мин по Рейтману и Френкелю с использованием набора химических

реактивов для определения а ктивнос- ти АсТ и АлТ в сьшоротке крови методом колориметрирования, который основан на изменении преломления света при боковом освещении раздавленной

капли семени с помощью конденсора темного поля, В зависимости от состояния акросомы оптическая плотность ее изменяется и это обнаруживается по наличию ИЛИ отсутствию ее светящегося контура,

П р и м е р 3, Опытные пробы спермы, предназначенные для длительного хранения при -196 С, разбавляют защитной средой следующего состава:

31

Лактоза, г 11,5 Желток куриных яиц, мл 5,0 Глицерин, мл 5,0 Спермосан-3, тыс.ед. 50,0 Вода-дистиллированная, мл 100 Контрольную и опытную пробы спермы, предназначенные для длительного хранения, после разбавления защитной средой и обработки андекали- ном в дозе I ед. охлаждают в холодильнике до 2°С в течение 4 ч, после чего замораживают в виде гранул 0,2 мл на фторопластовой пластине в парах азота и хранят в жидком азоте при .

Биологическую полноценность спермы, обработанной известным (контроль) и предлагаемым (опыт) способами, оценивают по подвижности, по состоянию акросомы (акроскопический метод) и по оплодотворяемости после ректального исследования коров.

В табл.3 дана биологическая полноценность спермы, обработанной известным и предлагаемым способами.

Таким образом, данные, приведенные в примерах, свидетельствуют о том, что по сравнению с известным, являющимся базовым способом, обрабока спермы предлагаемым способом улучшает подвижность спермиев (в день получения на 9,0%, через 3 дня хранения при 2°С на 12,5%, табл.2, а после замораживания-оттаивания на 20%, табл.3). Процент спермиев с целой неповрежденной акросомой также вьппе в предлагаемом способе как при хранении при (в день получения на 9,8%, через 3 дня хранения на 18,6%, табл.2), так и после замораживания-оттаивания (на 24,6%, табл.3), что свидетельствует о том, что обработка спермы предлагаемым способом способствует замедлению деструктивных процессов, неизбежных при хранении спермы вне организма, т.е. способствует стабилизации биологической полноценности спермы.Наблюдается также упрочнение цитоплаз- матической мембраны спермиев, что проявляется не только в сохранении

9

акросомы, но и я малой утечке фермента АсТ (в день получения на 50%, через 3 дня хранения на 100%, табл.2), которая выполняет важную роль в сохранении контроля над моторикой спермиев. И, наконец, оплодотворяемость коров при использовании спермы,обработанной предлагаемым способом,по сравнению с известным повышается на

1 т

1 J , О/, ,

В табл. 4 и 5 представлены данные о биологической полноценности спермы в зависимости от дозы андекалина и количества желтка в разбавителе.

Как следует из табл. 4 и 5, наилучший эффект достигается при строго определенном соотношении андекалина и желтка.

Как видно из данных, обработка спермы предлагаемым способом дает двойной практический эффект: во-первых, стабилизирует биологическую

полноценность спермиев, замедляя тем самым деструктивные процессы, неизбежные при хранении спермы вне организма, и упрочняет цитоплазмати- ческую мембрану спермиев, что способствует сохранению акросомы, которая является носителем ферментов иан- тигенов, участвующих в оплодотворении, и малой утечке фермента аспар- тат-трансаминазы, которая выполняет

важную роль в сохранении контроля над моторикой спермиев, в результате повьш1ается результативность осеменения, во-вторых, позволяет значительно снизить (с 20 до 5% ) затраты

ценного и дорогого пищевого продукта - куриных яиц на цели искусственного осеменения.

Формула изобретения

Способ обработки спермы быка,включающий ее разбавление средой, содержащей желток куриного яйца, отличающийся тем, что, с целью

стабилизации биологической полноценности спермы и повышения ее оплодотворяющей способности, сперму разбавляют средой, содержащей 4-5 мл желтка, а после разбавления к сперме добавляют андекалин в дозе 1-10 ед. на I мл спермы.

10

Предлагаемый 8,510,25 Известный 7,8tO,27 Разница, % 9,0

ЛосТоверность Р i О, I

Предлагаемый 8,3tO,33 Известный 7,710,31 Разница, Z 3,0

Достоверность Р О, I

Предлагаемый 8,410,32 Известный 7,8tO,37 Разница, Х 7,7

.Достоверность

8.1to,328l,4t2,u52,8t 1,01 0,08+0,0020,125tO,004 7,2tO,257A,it2,24i,5tl,n 0,12tO,0040,2510,006

12,59,818,6 50,0100

P iO,aiP -iO,OIP 0,01 PfO,05P fO,05

7,8tO,2880,512,0150,It 1,3 0,,0020,1310,004

7.2to,3174,Oil,945,0 t 1 ,35 0,121 to,0030,2310,007

8,338,811,3 42,3577,0

P (0, I

P(0,lPiO,l

8,OJO,3181,212,0

7,,2573,9tl.8

9,649,9

P 0,1P iO.I

P 0,01 P 0,OIP 0,05

50,4 t I,310,081 to,0030,12510,003

44,,10,12510,0050,21 1 0,002

14 54,3268,0

P 0,OOI

P iO,OOI

P 0,005

Таблица 1

Таблица 2

P 0,01 P 0,OIP 0,05

50,4 t I,310,081 to,0030,12510,003

44,,10,12510,0050,21 1 0,002

14 54,3268,0

P 0,OOI

P iO,OOI

P 0,005

О (Контроль)

Таблица 3

Таблица 4

133149910

Продолжение табл.4

Изобретение относится к животноводству. Целью изобретения является стабилизация биологической полноценности спермы и повышение ее оплодотворяющей способности. Сб ежеотоб- ранную сперму разбавляют защитной средой. Содержание желтка куриных яиц в разбавителе 4-5 мл. После разбавления в сперму добавляют андека- лин в дозе 1-10 ед. на 1 мл спермы. Обработанную таким образом сперму хранят при 2 С или при -196 С после зквилибрации в течение 3-4 ч при 2-4°С и последующего замораживания в парах жидкого азота. Способ стабилизирует биологическую полноценность спермиев, в результате чего повьша- ется результативность осеменения и снижаются затраты желтка куриных яиц на цели искусственного осеменения. 5 табл. (Л со 00 4 СО СО