Способ выявления гиперлипидемии Советский патент 1989 года по МПК G01N33/52 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к способам выявления повы- дпенного содержания липидов в крови.

Цель изобретения - повышение чув-г ствительности.

Способ осуществляют следующим образом .

Пробу крови разводят буферным раствором в 50-500 раз, отделяют форменные элементы, к полученному раствору плазмы добавляют флуоресцентный краситель (ЬК) 4-диметиламино-4 - дифторметилсульфонилбензилиденацето- фенон до концентрации 1000-1100/ /F мкМ (где F - величина разведения крови), измеряют интенсивность его флуоресценции и рассчитывают суммарное содержание холестерина (ХС) и триглицеридов $ТГ) по формуле

К

А С + 75)

в 75

нормы,

где К - суммарное содержание холестерина и триглицеридов, мг%;

А - интенсивность флуоресценции 4-диметиламино-4г-дифтор- ме тилсульфонилбензилиден- ацетофенона в исследуемом образце;

В - интенсивность флуоресцении 4-диметиламино-4 -дифтор- метилсульфонилбензштиден- ацетофенона в такой же концентрации, как в исследуемом образце, в стандартной плазме с известным содержанием холестерина и триглицеридов, разведенной в 2-F раз; С - суммарное содержание холе-. стерина и триглицеридов в стандартной плазме, мг%. На чертеже представлена зависимость между интенсивностью флуоресценс:

м

ОЭ

ции К и суммарным содержанием холестерина и триглицеридов (по оси абсцисс - интенсивность флуоресценции, мкМ; по оси ординат - суммарное содержание холестерина и триглицеридов в плазме крови, мг%).

Пример I. 20 мкл крови разводят в 100 раз () физиологическим раствором, содержащим 10 мМ трис-HCl и 2 мМ ЭДТА, рН 7,4, центрифугируют полученную суспензию при 300g в течение 10 мин, к 1 мл супер- натанта добавляют 10 мкл 1 мМ эталонного раствора К. Интенсивность флуоресценции при длине волны возбуждения 440 им и длине волны наблюдения 550 нм измеряют на флуоресцентном спектрофотометре в I-сантиметровой кювете. По приведенной формуле . рассчитывают суммарное содержание ТГ и ХС (21), равное 550 мг% (время анализа 1 мин). Величина 21, измеренная с помощью прототипа, составляет 546 мг% (объем плазмы крови 50 мкл, время анализа 15 мин). Верхняя граница нормы (N) суммарного содержания указанных липидов составляет 470 мг%. Таким образом, , мг% и в исследуемой пробе выявлено повышен- ное содержание ТГ и ХС.

П р и м е р 2. Прооу криви разводят в 50, 100, 200 и 500 раз. К полученным после отделения форменных элементов растворам плазмы добавляют ФК до концентрации (К) 20, 10, 5 и 2 мкМ соответственно. По предлагаемому способу оценивают суммарное содержание ХС и ТГ.

1 -

В таблице показано суммарное содержание ТГ и ХС в плазме крови, мг%, определенное по предлагаемому спосо - бу в зависимости от разведения крови.

Q5 05 о

5

0

5

0

5

Таким образом, во всех приведен- ( ных случаях , где N 470 мг% (пример 1), и повыпенное содержание ХС и ТГ выявляется вне зависимости от величины разведения крови.

Предлагаемое изобретение позволяет повысить чувствительность способа в 10-20 раз за счет возможности проведения регистрации в 0,5-1 мкл плазмы крови.

Формула изобретения

Способ выявления гиперлипидемии путем отделения плазмы крови, добавления к ней красителя с последующим измерением интенсивности флуоресценции в исследуемом и контрольном образцах, определением суммарного содержания холестерина и .триглицеридов и сравнением полученного показателя с нормой, отличающий- с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве красителя используют 4-диметиламино- 4 -дифторметилсульфонилбензилиденаце- тофенон в насыщающей концентрации, а суммарное содержание рассчитывают по формуле

К в А4С+752

К в 75,

где К - суммарное содержание холестерина и триглицеридов, мг%;

А - интенсивность флуоресценции 4-диметиламино-4 -ди- фторметилсульфонилбенэил- иденацетофенона в исследуемом образце;

С - суммарное содержание холестерина и триглицеридов в контрольном образце, плазмы, мг%;

В - интенсивность флуоресценции 4-диметиламино-4 -ди- фторметилсульфонилбензил- иденацетофенона в контрольном образце плазмы в такой /же концентрации,как в исследуемом образце, а гиперлипидемию выявляют при увеличении полученного показателя выше нормы.

т

500мг%

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления повышенного содержания липидов в крови. Цель - повышение чувствительности способа. Пробу крови разводят буферным раствором, отделяют форменные элементы, добавляют флуоресцентный краситель и измеряют интенсивность его флуоресценции, а суммарное содержание холестерина и триглицеридов (в мг%) рассчитывают по формуле. Способ позволяет проводить анализ в 0,5-1 мкл плазмы. 1 ил.