СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СЕНСОНЕВРАЛЬНОЙ ТУГОУХОСТИ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в оториноларингологической практике при диагностике и лечении больных с сенсоневральной тугоухостью (СНТ).

Известно, что число больных СНТ постоянно возрастает. Причиной заболевания могут быть различные факторы (сосудистый, инфекционный, токсический), и развитие СНТ происходит вследствие поражения структур слухового анализатора. Этому могут способствовать самые разнообразные нарушения в организме человека. Используемые в настоящее время традиционные лечебные воздействия часто оказываются неэффективными, приводя, преимущественно, к стабилизации слуховой функции. Многообразие предлагаемых средств для лечения СНТ объясняется особенностями развития заболевания, а также тем, что при этом не удается улучшить слух значимо для больного. Это заставляет искать возможные новые звенья в патогенезе СНТ, которые могут уточнять состояние больного и быть использованы при диагностике нарушений в структурах слухового анализатора. Диагностика нарушений в организме человека при СНТ может способствовать уточнению этиологических и патогенетических факторов и проведению в последующем адекватной терапии.

Обследование больных, находящихся на лечении в ЛОР клинике РГМУ по поводу СНТ с сопутствующей соматической патологией (заболеваниями сердца, суставов, крови, печени, почек), показало наличие сдвигов параметров липидного обмена. У них же были исследованы свободно-радикальные процессы и тоже обнаружены изменения. Эта случайно выявленная закономерность навела на мысль о возможности участия в патогенезе СНТ нарушений липидного обмена на фоне изменений процессов свободнорадикального окисления.

Пример 1. У б-й К., 41 г. (и/б №1641), находящейся на лечении по поводу двусторонней хронической сенсоневральной тугоухости (2-3 степени) сосудистой этиологии, с сопутствующим заболеванием -хроническая ишемическая болезнь сердца, были выявлены признаки дислипидемии.

Показатели липидного спектра сыворотки крови больного: холестерин - 7,6 ммоль/л; общие липиды - 7,08 г/л; триглицериды - 1,56 г/л, липопротеиды - 6,8 г/л.

При исследовании свободнорадикальных процессов сыворотки крови получены достоверно отличающиеся от нормальных показатели хемилюминесценции (ХЛ) сыворотки крови, в частности спонтанная хемилюминесценция (S), отражающая интенсивность эндогенного свободнорадикального перекисного окисления липидов и пропорциональная концентрации гидроперекисей в данной системе, оказалась, вопреки ожидаемому повышению, сниженной

S=0,93·10³ импульсов за 100 с.

Пример 2. Б-ая Т., 48 л. (и/б 1313), находилась на лечении в ЛОР клинике РГМУ по поводу двусторонней сенсоневральной тугоухости неясной этиологии, прогрессирующей в течение 5 лет, с сопутствующим заболеванием - хронический гепатит, были выявлены признаки дислипидемии: холестерин - 7,8 ммоль/л; общие липиды - 7,82 г/л; триглицериды - 1,48 г/л; липопротеиды - 6,2 г/л.

Показатели ХЛ сыворотки крови свидетельствовали о снижении светосуммы спонтанного свечения

S=0,98·10³ импульсов за 100 с.

При анализе приведенных двух историй болезней и еще 8 историй болезней больных СНТ с различной сопутствующей соматической патологией во всех случаях выявлены признаки дислипидемии, сопровождающейся увеличением содержания холестерина, общих липидов, триглицеридов, липопротеидов, а также обнаружены признаки угнетения системы свободнорадикального окисления по показателям хемилюминесцентного анализа.

Полученные данные навели на мысль о возможности участия в патогенезе СНТ обнаруженных нарушений липидного обмена и процессов свободнорадикального окисления. Введение в схему лечения антиоксидантов приближало к нормальным исследуемые показатели и способствовало не только улучшению соматического состояния, но и более значимому улучшению слуховой функции у больных, что и подтверждало наше предположение.

Мы посчитали возможным использовать обнаруженные особенности патогенеза слуховых расстройств для дополнения диагностических критериев при СНТ.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской, патентной литературе выявлены различные способы диагностики сенсоневральной тугоухости.

Основой аудиологической диагностики СНТ является тональная пороговая аудиометрия (Руководство по оториноларингологии / Под ред. И.Б.Солдатова. - М.: Медицина. - 1994. - С.166). Наряду с акуметрией тональная пороговая аудиометрия давно используется и является обязательной для диагностики СНТ, так как позволяет определить нарушение в системе звуковосприятия и степень тугоухости. Тем не менее, этот способ диагностики не всегда способствует выявлению звеньев патогенеза и направлений в коррекции нарушений при СНТ.

Л.А.Лазарева (2000) использует для диагностики СНТ иммунологические данные (Клинико-иммунологические аспекты острой нейросенсорной тугоухости. Дисс...к.м.н. Краснодар, 2000). Автор проводит исследование содержания в крови больных СНТ иммуноглобулинов, показателей фагоцитарной системы, субпопуляции лимфоцитов и цитокинов и считает основой формирования патогенетических реакций при СНТ гиперпродукцию фактора некроза опухоли (TNFα) и интерлейкина 1 (IL 1). При сохранении высоких показателей указанных цитокинов в крови больных с СНТ предлагается проведение иммунокоррегирующей терапии. Недостатками данного способа являются экономические и технические трудности при выполнении предлагаемых иммунологических исследований, необходимость иметь специальные дорогостоящие импортные диагностикумы и диагностическую аппаратуру (спектрофотометр, иммуноферментный анализатор), не указан характер иммунокоррегирующей терапии.

Известен “Способ диагностики тугоухости”, предложенный Е.П.Москаленко и соавт., 1987 (А.с. №1332230), основанный на выявлении в сыворотке крови больных противомозговых (ПМА), противокохлеарных (ПКА), противовестибулярных (ПВА) антител при СНТ и противоневриномных (ПНА) антител при невриноме слухового нерва. Недостатком способа является сложность выделения и приготовления антигенов из тканей умерших людей и удаленной опухоли, используемых в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

В.Т.Пальчун, Н.А.Петухова, 2001 (Коррекция нарушений метаболизма печени при нейросенсорной тугоухости методом квантовой гемотерапии. Вести, оторинолар. - 2001. - №4. - С.4-9) для обоснования метода квантовой гемотерапии изучали функцию печени у больных с СНТ и обнаружили нарушения ее метаболизма. Авторы определяли методом спектрографии на биохимическом анализаторе “Express” (в мг/дл) содержание в плазме крови общего холестерина (ХС), холестерина липопротеидов высокой плотности (ХСЛПВП), триглицеридов (ТГ), вычисляли количество холестерина липопротеидов низкой плотности (ХСЛПНП), определяли коэффициент дислипопротеидемии Кд по формуле

Кд=(ХС-ХСЛПВП)/ХСЛПВП.

Эти же авторы оценивали активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) по концентрации субстанций, дающих позитивную реакцию с 2,4-тиобарбитуровой кислотой (в единицах оптической плотности), и обнаружили нарушение липидного метаболизма при СНТ, что выражалось в повышении концентрации липидов плазмы (ХС, ТГ, Кд) и снижении уровня ХСЛПВП. Данная методика достаточно сложна и помимо оборудования для спектрографии требует математической обработки по формулам. Что касается определяемого авторами состояния ПОЛ, то полученные ими результаты исследований неоднозначны, имеется несоответствие данных, представленных в таблице (с.8) в различных сериях исследований и описания и оценки в тексте, что не позволяет сделать конкретные выводы и использовать эти критерии для диагностики СНТ.

Наиболее близким по своей сущности и взятым в качестве прототипа является “Способ диагностики тугоухости”, предложенный Н.В.Крыловой и Н.А.Крюковой, 1985 (А.С. 1138129, опубл. 07.02.85, Бюл. №5). Способ осуществляется путем определения в крови содержания холестерина, а также магния и кальция, оксипролина или гликозаминогликанов. При увеличении содержания холестерина в сочетании с гипомагниемией или гипокальциемией, а также с гипероксипролинемией или гипогликозамингликанемией диагностируют тугоухость. Проведенные исследования крови у больных СНТ с применением данного способа показали указанные соотношения в 70% случаев.

К недостаткам описанного способа относятся

- недостаточная точность диагностики (в 70% случаев);

- труднодоступность диагностикумов для определения множества компонентов предлагаемого способа.

Целью изобретения является создание доступного способа диагностики нарушений при СНТ с высокой степенью точности диагностики, раскрывающего звенья патогенеза данного заболевания с определением направления для их коррекции.

Эта цель достигается оценкой состояния липидного обмена и процессов свободнорадикального (СРО) окисления при СНТ путем определения показателей липидного спектра сыворотки крови и исследования сыворотки крови методом хемилюминесценции (ХЛ).

Исследование содержания липидов в сочетании с изучением процессов СРО представляется целесообразным при СНТ в связи с имеющимися сведениями о строении клеточной мембраны и роли нарушения ее функции в патогенезе заболеваний нервной системы (Л.М.Пустовалова. Практикум по биохимии. - Ростов-на-Дону: издательство “Феникс”. - 1999. - 544 с.). Как известно, биологическая мембрана - образование, организованное из молекул фосфолипидов (ФЛ) в виде бислоя, обеспечивающего ее полупроницаемость; холестерина, способствующего упорядочности ФЛ и поддержанию свойства текучести на среднем уровне; белков; гликопротеинов и гликолипидов. Перекисное окисление липидов (ПОЛ) это свободнорадикальный процесс, а основными субстратами ПОЛ являются полиненасыщенные высшие жирные кислоты (ВЖК), находящиеся в структуре ФЛ мембран. ПОЛ регулирует проницаемость мембран, влияет на деление и рост клеток, начинает фагоцитоз, а антиоксидантная система осуществляет контроль за уровнем ПОЛ. Снижение активности антиоксидантов (АО) или высокая активность прооксидантов способствуют нарушению процессов СРО, переходу ПОЛ в неконтролируемое состояние, ведет к повреждению клеточных структур и гибели клетки, что имеет место в патогенезе сенсоневральной тугоухости, относительно нейроэпителиальных клеток спирального органа и нервных элементов головного мозга. Вышеперечисленные механизмы могут приводить к дегенеративно-атрофическим изменениям в структурах слухового анализатора, лежащим в основе патогенеза СНТ.

Исследование показателей липидного спектра сыворотки крови, а также биохимические исследования с использованием метода хемилюминесценции (ХЛ) проведено нами 30 больным СНТ в динамике до и после лечения. У каждого обследуемого изучали холестерин (ХС), общие липиды (ОЛ), триглицериды (ТГ), β-липопротеиды (ЛП) по унифицированным методикам с помощью стандартных наборов реактивов; для оценки состояния СРО использовали метод ХЛ в присутствии ионов двухвалентного железа. Показатели ХЛ регистрировали на установке ХЛМ 1 Ц-01 по методу Ю.А.Владимирова и соавт. (Ю.А.Владимиров, В.Н.Оленев, Т.В.Суслова. Сверхслабое свечение плазмы крови в клинической диагностике // Сб. трудов 2 МОЛМИ. - Т.9, вып.8. – М., 1974, с.6-33).

Важнейшими преимуществами применения ХЛ биологических субстратов для оценки СРО является высокая чувствительность метода, позволяющая обнаружить в биологических жидкостях свободные радикалы в самых низких концентрациях. Кроме того, становится возможным получение информации как о свободнорадикальных процессах (СРП) в организме, так и об антиоксидантной системе (АОС), что важно для комплексной оценки состояния больного и его коррекции при патологии.

Изучали следующие показатели ХЛ.

1. Спонтанная хемилюминесценция (S) - отражает интенсивность эндогенного свободнорадикального перекисного окисления липидов. Интенсивность спонтанного свечения пропорциональна концентрации гидроперекисей в данной системе. Светосумма спонтанного свечения измеряется в импульсах за 100 с.

2. Быстрая вспышка (h) - наблюдается при введении ионов двухвалентного железа (Fe²+) в систему, содержащую гидроперекиси липидов. Вспышка обусловлена бурным выделением радикалов при разложении перекисей ионами двухвалентного железа (величина пропорциональна квадрату концентрации гидроперекисей в системе); измеряется в милиметрах.

3. Латентный период (L) - длительность L зависит от снижения концентрации ионов двухвалентного железа до критической величины и от наличия антиоксидантов в биологическом субстрате; измеряется в секундах.

4. Угол наклона (α) начальной фазы медленной вспышки - зависит от соотношения прооксидантов к антиоксидантам в данном биологическом субстрате. Результаты этой зависимости выражают величиной тангенса угла наклона (tg α).

5. Время “до плато” (Т “до плато”) - характеризует продолжительность нарастания медленной вспышки и зависит от количества субстрата окисления, особенно от неокисленных жирных кислот; измеряется в секундах.

6. Интенсивность медленной вспышки (Н) - отражает потенциальные возможности системы к генерированию свободных радикалов; зависит от способности системы противостоять накоплению свободных радикалов и от длительности нарастания процессов перекисного окисления, что в свою очередь связано с наличием антиоксидантов; измеряется в импульсах (F) за 1000 с.

Результаты исследования липидного спектра крови и ХЛ контрольной группы (здоровые) и больных с СНТ представлены в таблице 1 и таблице 2 соответственно.

Из анализа полученных данных выявлено, что у больных СНТ все показатели липидного спектра достоверно повышены относительно нормы, что указывает на дислипидемию при хронической СНТ. Выраженным увеличением показателя отличается уровень холестерина.

Из анализа приведенных в таблице 2 данных видно, что у больных с СНТ выявлены достоверные отличия показателей СРО от контрольной группы. Интенсивность спонтанного свечения (S) до лечения оказалась достоверно сниженной до 1,13±0,07 импульсов/100 с·10 (р<0,10) по отношению к контрольной группе - 1,60±0,07, что указывает на угнетение процессов СРО при хронической СНТ. При определении процентных соотношений показатель интенсивности спонтанного свечения у больных с СНТ был на 23,63% меньше относительно контрольной группы. Имеет тенденцию к снижению при СНТ и показатель быстрой вспышки (91,2±2,4), указывающий на уменьшение содержания гидроперекисей, укорачивается латентный период (96,5±5,4), что предполагает уменьшение числа антиоксидантов в системе. Незначительно повышаются tg α (0,35±0,25) и показатель Т “до плато” (204,0±11,6), и более заметно - “Н”: интенсивность медленной вспышки (47,0±3,2), что может свидетельствовать о повышенной потенциальной способности системы к генерированию свободных радикалов и отражает снижение количества антиоксидантов.

Таким образом, течение хронической сенсоневральной тугоухости сопровождается признаками нарушения липидного обмена с тенденцией к повышению его показателей в сочетании с угнетением процессов свободнорадикального окисления, что является одним из компонентов патогенеза СНТ и требует коррекции при лечении. Указанные соотношения выявлены у 27 из 30 обследованных больных с хронической СНТ, что составило 90% случаев.

Предлагаемый способ диагностики сенсоневральной тугоухости осуществляется следующим образом.

Проводят забор крови из локтевой вены больного СНТ и определяют показатели липидного спектра сыворотки крови - холестерин (ХС), общие липиды (ОЛ), триглицериды (ТГ), β-липопротеиды (ЛП) унифицированным методом, используя стандартные наборы реактивов, а затем оценивают состояние СРО методом ХЛ в присутствии ионов двухвалентного железа на установке ХЛМ 1Ц-01 с определением его показателей - спонтанная хемилюминесценция (S), быстрая вспышка (h), латентный период (L), тангенс угла наклона tg α, время “до плато” (Т “до плато”), интенсивность медленной вспышки (Н). При выявлении признаков гиперлипидемии, сопровождающейся увеличением содержания ХС, а также ОЛ, ТГ и ЛП, в сочетании с признаками угнетения системы СРО по показателям хемилюминесцентного анализа, сопровождающегося снижением S - интенсивности спонтанного свечения (на 23% и более), диагностируют сенсоневральную тугоухость.

Предлагаемый способ апробирован в ЛОР клинике РГМУ у 30 больных и показал положительные результаты.

Представляем выписки из 2-х историй болезни, иллюстрирующих возможности предлагаемого способа.

Выписка из истории болезни №1313 больной Т., 45 лет, находившейся на лечении в ЛОР клинике РГМУ с диагнозом: двусторонняя сенсоневральная тугоухость. Жалобы на снижение слуха и шум в ушах отмечает более 1 года. При аудиометрическом исследовании выявлено: двустороннее снижение слуха, больше справа, по типу нарушения звуковосприятия, с преобладанием в диапазоне высоких частот (до 50-60 дБ). Для определения состояния липидного обмена и процессов СРО исследована сыворотка крови больной. Изучены показатели липидного спектра с использованием стандартных наборов реактивов. Затем исследовали состояние СРО методом ХЛ на установке ХЛМ 1Ц-01.

Получены следующие данные.

Показатели липидного спектра сыворотки крови больной:

ХС - 7,0 ммоль/л;

ОЛ - 7,04 г/л;

ТГ - 1,38 г/л;

ЛП - 6,2 г/л.

Показатели ХЛ сыворотки крови:

S - 0,93·10³ импульсов за 100 с;

h - 80,0 мм;

tg α - 0,26;

Т “до плато” - 204 с;

Н - 45,3·10³ импульсов.

На основании полученных данных выявлены признаки дислипидемии, сопровождающейся увеличением содержания ХС, ОЛ, ТГ и ЛП, а также признаки угнетения системы СРО по показателям хемилюминесцентного анализа, сопровождающегося снижением S - интенсивности спонтанного свечения на 41,9%, что значительно превышает контрольные данные (более чем на 23%). На основании полученных данных были обнаружены изменения, определяемые нами как характерные для сенсоневральной тугоухости. Выявление указанных изменений позволило назначить своевременную коррекцию патогенетически направленной терапии.

Выписка из истории болезни №745 больной Ч., 35 лет, поступившей в ЛОР клинику РГМУ с жалобами на снижение слуха, шум в ушах с детского возраста. При аудиометрическом исследовании выявлено двустороннее снижение слуха по типу нарушения звуковосприятия, преимущественно в диапазоне средних и высоких частот (от 30 до 60 дБ на 500-8000 Гц). При поступлении в стационар больной проведено исследование липидного спектра сыворотки крови и изучение процессов СРО методом ХЛ.

Для определения состояния липидного обмена и процессов СРО исследована сыворотка крови больной. Изучены показатели липидного спектра с использованием стандартных наборов реактивов. Затем исследовано состояние СРО методом ХЛ на установке ХЛМ 1Ц-01.

Получены следующие данные.

Показатели липидного спектра сыворотки крови больной:

ХС - 7,4 ммоль/л;

ОЛ - 6,99 г/л;

ТГ - 1,40 г/л;

ЛП - 5,84 г/л.

Показатели ХЛ сыворотки крови:

S - 1,21·10³ импульсов за 100 с;

h - 97,0 мм;

L - 84 с;

tg α - 0,34;

Т “до плато” - 210 с;

Н - 51,7·10³ импульсов.

На основании полученных данных выявлены признаки дислипидемии, сопровождающейся увеличением содержания ХС, ОЛ, ТГ и ЛП, а также признаки угнетения системы СРО по показателям хемилюминесцентного анализа, сопровождающегося снижением S - интенсивности спонтанного свечения на 24,4%, что превышает контрольные данные (более чем на 23%). На основании полученных данных были обнаружены изменения, определяемые нами, как характерные для сенсоневральной тугоухости. Выявление указанных изменений позволило назначить своевременную коррекцию патогенетически направленной терапии.

Заявляемый способ обладает следующими преимуществами:

- высокой точностью диагностики (90% случаев);

- доступен для осуществления в биохимических лабораториях;

- позволяет выяснить звенья патогенеза СНТ для проведения адекватного лечения.

Изобретение относится к области медицины, а именно, к оториноларингологии, и предназначено для диагностики сенсоневральной тугоухости. Определяют в сыворотке крови больных содержание холестерина (ХС). Исследуют показатели липидного спектра сыворотки крови: общие липиды (ОЛ), триглицериды (ТГ), β-липопротеиды (ЛП). Оценивают состояние свободнорадикального окисления (СРО) методом хемилюминесценции (ХЛ). По увеличению содержания ХС, ОЛ, ТГ и ЛП в сочетании с признаками угнетения системы СРО, сопровождающегося снижением показателя (S) интенсивности спонтанного свечения на 23% и более, определяют сенсоневральную тугоухость. Способ позволяет своевременно назначить коррекцию патогенетически направленной терапии. 2 табл.

Способ диагностики сенсоневральной тугоухости (СНТ), предусматривающий определение в крови больных содержания холестерина (ХС), отличающийся тем, что исследуют и другие показатели липидного спектра сыворотки крови: общие липиды (ОЛ), триглицериды (ТГ), β-липопротеиды (ЛП), а также оценивают состояние свободно радикального окисления (СРО) методом хемилюминесценции (ХЛ), и при увеличении содержания ХС, а также ОЛ, ТГ и ЛП в сочетании с признаками угнетения системы СРО, сопровождающегося снижением показателя (S) интенсивности спонтанного свечения на 23% и более, диагностируют сенсоневральную тугоухость.