Способ прогнозирования течения воспалительного процесса в легких Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 G01N33/49 

1

Изобретение относится к медицине, в частности к пневмологии, и может быть использовано для диагностики характера течения воспалительных процессов в легких и бронхах и перехода их в затяжное, первично-хроническое, прогрессирующее или осложненное течение на ранних стадиях развития болезни.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет выявления характера течения процесса при неспецифических воспалительных заболеваниях легких и бронхов.

Способ осуществляют следующим образом.

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в сыворотке крови определяют по методу Haskova V. в модификации Гриневич КЗ.А., основанному на селективной преципитации комплексов антиген + антитело в 3,75%-ном поли- этиленгликоле с последующим спектро- фотометрическим определением плотности преципитата. Для проведения реакции готовят два раствора. Раствор

1- это 0,1 М боратный буфер рН 8,4 (3,410 г борной кислоты, 4,275 г буры растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1 л). Раствор

2готовят путем растворения 10 г реактива Полиэтиленгликоль-6000 в

4

00

ю

со

240 мл раствора 1. Кровь у больных берут из вены в количестве 5 мл, выделяют сыворотку для исследования.

В пробирку вносят 0,3 мл сыворотки, добавляют 0,6 мл раствора 1, перемешивают и переносят по 0,3 мл в две пробирки. В одну из них добавляют 2,7 мл раствора 1 (контроль), в другую 2,7 мл раствора 2 (опыт). Содержание пробирок тщательно перемешивают и оставляют на 60 мин при комнатной температуре, после чего определяют оптическую плотность образцов на спектрофотометре СФ-26 в кюветах размером 1 г 1 см при 450 нм. Высчитывают разность показателей оптической плотности, результат умножают на 1000 и получают количество ЦИК в 100 мл сыворотки крови. Ответ выражают в единицах оптической плотности.

Реакцию непрямой иммунофлюоресцен ции (НИФ) выполняют с аутоштаммом бактериальной инфекции, выделенным путем посева мокроты больного количественным методом с колибровочной петлей. Для этого полученную от больного мокроту разводят 1:2 изотоническим раствором натрия хлора, встряхи- вают, гомогенизируют. Затем петлей размером 8 8 см (0,01 мл) вносят мокроту (1 петлю) в 5 мл 2%-ной пеп- тонной воды. Получают разведение 1 ПО . После готовят второе разведение мокроты: 1 петля уже полученного разведения (1 ) вносится в 5 мл 2%-ной пептонной воды. Получают второе разведение мокроты 2 .

Чашку Петри с 20%-ным кровяным агаром делят на два сектора и производят посев каждого разведения мокроты по 0,1 мл. Чашки Петри помещают в термостат. Предварительньй учет результатов производят через 24 ч, окончательный результат получают через 72 ч. Идентификацию выделенного материала проводят с учетом культу- ральных и морфологических свойств. Для подсчета количества микробов в 1 мл мокроты количество микробных колоний в секторе с разведением мокроты 2 10 5делят на 2 и умножают на 10.

Если роста в секторе с разведением

мокроты 2 , то учитывают первый сектор с разведением 1 10 Для этого количество колоний умножают на 10.

0

0

0

Результат выражают в количестве микробных тел выделенного возбудителя в 1 мл мокроты (например, 8 104 микробных тел в 1 мл мокроты или 3 10 микробных тел в 1 мл мокроты). Бактериальную культуру,полученную при посеве мокроты больного, используют для постановки реакций непрямой иммунофлюоресценции в качестве ауто- штамма. Постановку реакции проводят по общепринятой методике. На тщательно обезжиренных предметных стеклах петлей готовят мазки выделенных бак-

5 териальных культур (6 стекол). После подсушивания на воздухе мазки фиксируют над пламенем или в метаноле (на 10 мин погружают в стакан).

Сыворотку обследуемого больного разводят физиологическим раствором от 1:20 до 1:640 (в разведении). Затем каждое разведение сыворотки наслаивают на приготовленные предметные стекла с мазками бактериальных

5 культур и помещают стекла на 30- 40 мин в термостат. Диагностическую люминесцентную кроличью сыворотку против иммуноглобулинов человека разводят в указанном на этикетке ампулы объеме дистиллированной воды (1:32). Предметные стекла вынимают из термостата и промывают водопроводной водой (2-5 мин). Люминесцентную сыворотку наслаивают на промытый препарат и выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин. Затем мазки тщательно промывают водопроводной водой (по 10 мин каждый), подсушивают на воздухе и просматривают под люминесцентным микроскопом.

Результаты оценивают по интенсивности свечения (люминесценции) по периферии микробной клетки в различных разведениях исследуемой сыворотки и выражают в титрах антител. За титр антител у данного больного принимают то наибольшее разведение сыворотки, при котором еще регистрируется свечение периферии клеток. Специфичность реакции контролируют путем нанесения люминесцентной сыворотки непосредственно на мазок микроорганизмов - антигенные препараты, подлежащие исследованию. В этом случае свечение всегда отсутствует.

Предлагаемый способ диагностики характера течения неспецифичных воспалительных заболеваний легких апробирован в клинике БелНИИ туберкулеза

5

0

5

0

5

на 40 больных, из них 28 мужчин и

12женщин в возрасте от 25 до 55 лет Больные были распределены по клиническим формам заболевания органов дыхания: больные острой пневмонией - 10 человек, хроническим бронхитом 13человек, хронической пневмонией 7 человек, абсцессами легких - 7 челвек, бронхоэктомической болезнью - 3 человека.

Всем больным проводилось комплексное клинико-лабораторное обследование в начале и в процессе лечения с обязательным исследованием содержа ния циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови и титра специфических антител к бактериям, вызвавшим развитие воспалительного процесса в легких и бронхах и выде- ленным из мокроты или содержимого бронхов больных.

Для установления диагностического уровня ЦИК в крови были исследованы сыворотки 30 здоровых лиц. (контроль- нал группа). В этой группе уровень ЦИК составил 91,0+3,6 усл.ед. Это позволило установить диагностический титр ЦИК (М + 2 & , где d - стандартное отклонение), выше которого (128 усл.ед.) результаты расценивались как положительные.

За диагностическое значение титра антител в реакции непрямой иммуно- флюоресценции с аутоштаммом бактерий были приняты следующие показате- ли: для пневмококка 1:40 и выше, для остальных возбудителей 1:20 и выше.

Анализ содержания ЦИК и титров ан

тител к выделенной у больных бактериальной аутоинфекции в сыворотке крови производили с учетом результатов ретроспективной оценки характера течения воспалительного процесса в бронхолегочной системе. Это позволило выделить две подгруппы больных по характеру течения заболевания.

Первую подгруппу (20 человек) составили больные, у которых в течение 2-3 недель проводимого комплексного лечения наступало клиническое выздоровление или стойкая ремиссия болезни с дезинтоксикацией организма (отмечалась нормализация общего состояния больного, показателей анализов крови, физикальных данных) и рассасыванием воспалительных изменений в легких и бронхах, подтверждаемое

g

0

5 Q

5

0

5

0

рентгенологическими методами исследования и динамическим наблюдением.

Вторую подгруппу (20 человек) составили больные с затяжным, прогрессирующим или осложненным течением воспалительного процесса, с тенденцией к переходу острого заболевания в первично-хроническую фазу его развития. У больных второй подгруппы в течение первых трех недель комплексного лечения наступало только частичное улучшение общего состояния (исчезновение некоторых клинических проявлений болезни) с длительным сохранением патологических изменений в бронхолегочной системе, выявляемых физикальными, лабораторными и рентгенологическими методами исследования и результатами динамического наблюдения.

Клинико-лабораторные исследования наблюдаемых больных производили в начале и в процессе лечения (через 2-3 недели).

Результаты иммунологических исследований показали, что содержание ЦИК в сыворотке крови и титры антител к аутоштаммам выявленной бактериальной инфекции в начале и Б процессе лечения достоверно различны у больных указанных двух подгрупп и зависят от характера течения заболевания.

У больных первой подгруппы (с благоприятным течением-процесса - клиническим выздоровлением или развитием стойкой ремиссии) в начале лечения определялось умеренно повышенное содержание ЦИК от 90,4 до 169,6 усл.ед. (у 85% больных) и высокие титры антител в сыворотке крови от 1:170 до 1:620 в сравнении с контрольной группой, и средний уровень их составил соответственно 135,0+3,1 усл.ед. и 5,76+0,15 (при перечислении титров антител в In).

В процессе лечения уровень ЦИК в сыворотке крови больных этой подгруппы снизился до нормы и составлял в среднем 99,0+4,7 усл.ед.

У больных второй подгруппы (с затяжным, прогрессирующим или осложненным течением) содержание ЦИК в сыворотке крови в начале лечения было в 1,7 раза выше, чем у больных первой подгруппы, зарегистрировано повышенным у 95% больных от 107,5 до 267,5 усл.ед. и средний уровень их

составил 219,0+11,4 усл.ед. (Р г 0,001), тогда как уровень антител в крови был заметно снижен от 1:40 до 1:150 в сравнении с первой подгруппой больных и в среднем составил 4,,13 In (р г 0,001).

В процессе лечения у больных этой подгруппы уровень ЦИК продолжал оставаться высоким и составил в среднем 180,5±10,5 усл.ед., являясь неблагоприятным прогностическим показателем.

В результате статистической обработки имевшихся данных были получены пограничные значения показателей ЦИК и титров антител, характеризующих переход болезни в затяжное, прогрессирующие и осложеннное течение.

Для показателей ЦИК пограничные значения были получены: для больных первой подгруппы 11 , М - & , М i М + Ј , т.е. М , 135,0 + 34,6 90,4 усл.ед., М 135,0 + 34,6 169,6 усл.ед., для больных второй подгруппы М, М - ii , М ,; М + , т.е. М , 219,0 - 48,5 170,5 усл.ед, М 7 219,0 + 48,5 267,5 усл.ед.

Для показателей титров антител в реакции НИФ пограничные значения были получены: для больных первой подгруппы М , М - 6 , М г М + 6 , т.е. М, 5,76 - 0,62 5,14, Hi 5,76 + + 0,62 6,38 (в титрах антител М , 1:170, М 1 1:620), для больных второй подгруппы М t М - 6, М ; М +6 , т,е, М , 4,38 - 0,60 3,76, М г 4,38 + 0,60 4,98 (в титрах антител М - 1:40, М 1:150).

При сравнении ЦИК и титра бактериальных специфических антител в сыворотках крови наблюдаемых больных была замечена их обратная корреляционная связь, рассчитан коэффициент корреляции (т -0,91, PhvO,001), что оценивается как сильная корреляционная связь. i

Таким образом, неблагоприятным

прогностическим признаком течения

может быть элиминирован из организ больного в силу дефектного иммунно ответа организма больного(об это св

5 детельствуют низкие титры антител к аутоштамму бактериальной инфекци Избыточное содержание антигена в с воротке больного вызывает образова ние малых (менее 15S) и промежуточ

10 ных (15S-19S) ЦИК, которые длитель циркулируют в кровотоке больных, п хо элиминируются и откладываются в органах-мишенях (в частности, в ле ких и бронхах), оказывая иммунопов

15 реждающее действие в тканях органо тем самым еще более усугубляя тече ние воспалительного процесса.

Патогенность высокого уровня ЦИ в сыворотке крови больных неспециф

20 ческими воспалительными заболевани ми легких при одновременно низких титрах специфических антител в сыв ротке крови была подтверждена морф логическими исследованиями. У 11 б

5 больных с прогрессирующим течением воспалительного процесса во время оперативного вмешательства брали биоптаты легких и бронхов для исследования . На биопсийном материал

30 проводили гистологические и иммуно морфологические исследования. На с рийных криостатных срезах легких применяли прямой и непрямой вариан иммунофлюоресцентного метода Кунса

35 моноспецифическими антисыворотками против иммуноглобулинов человека класса А, I, С,Ми С3-Фракции компл мента и метод гетерологического ко лемента по Гольвассеру-Ыепарду (с

40 постановкой контрольных реакций) д выявления фиксирующих иммунных ком лексов (ФИК) в тканях. Полученные данные сопоставлены с морфологичес ми исследованиями.

45 Был обнаружен высокий уровень

ФИК в легочной ткани у больных с н специфическими заболеваниями легки и установлена связь между распрост раненным (зона патологического про

неспецифического воспалительного про- CQ цесса и вне ее) иммунокомплексным

цесса в бронхолегочной системе является высокое содержание уровня ЦИК и низкие титры антител к аутоштаммам бактериальной инфекциь, определяемым в сыворотке крови больных в начале заболевания. При таком соотношении , указанных иммунологических показателей в гыпоротке больного накапливается в избытке антиген, который не

55

повреждением и прогрессированием воспалительного процесса в легких.

Пример 1. Больной Д., 36 лет поступил в клинику институт с диагнозом: очаговая пневмония в нижней доле правого легкого.. При п ступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки в нижней доле право

может быть элиминирован из организма больного в силу дефектного иммунного ответа организма больного(об это сви детельствуют низкие титры антител к аутоштамму бактериальной инфекции). Избыточное содержание антигена в сыворотке больного вызывает образование малых (менее 15S) и промежуточных (15S-19S) ЦИК, которые длительно циркулируют в кровотоке больных, плохо элиминируются и откладываются в органах-мишенях (в частности, в легких и бронхах), оказывая иммуноповреждающее действие в тканях органов, тем самым еще более усугубляя течение воспалительного процесса.

Патогенность высокого уровня ЦИК в сыворотке крови больных неспецифическими воспалительными заболеваниями легких при одновременно низких титрах специфических антител в сыворотке крови была подтверждена морфологическими исследованиями. У 11 больбольных с прогрессирующим течением воспалительного процесса во время оперативного вмешательства брали биоптаты легких и бронхов для исследования . На биопсийном материале

проводили гистологические и иммуно / морфологические исследования. На серийных криостатных срезах легких применяли прямой и непрямой варианты иммунофлюоресцентного метода Кунса с

моноспецифическими антисыворотками против иммуноглобулинов человека класса А, I, С,Ми С3-Фракции комплемента и метод гетерологического комплемента по Гольвассеру-Ыепарду (с

постановкой контрольных реакций) для выявления фиксирующих иммунных комплексов (ФИК) в тканях. Полученные данные сопоставлены с морфологическими исследованиями.

Был обнаружен высокий уровень

ФИК в легочной ткани у больных с неспецифическими заболеваниями легких и установлена связь между распространенным (зона патологического про5

повреждением и прогрессированием воспалительного процесса в легких.

Пример 1. Больной Д., 36 лет поступил в клинику института с диагнозом: очаговая пневмония в нижней доле правого легкого.. При поступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки в нижней доле правого

91

легкого определялись очаговоподобные инфильтративные тени. Из мокроты больного выделен пневмококк (8 10Ь микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови больного титр антител к выделенному пневмококку составил 1:b40 (In 6,5), ЦИК 138 усл.ед. В процессе лечения (через 3 недели) содержание ДИК снизилось до нормы (90 усл.ед.). Общее состояние больно го нормализовалось. При аускульта- ции в легких определялось везикулярное дыхание, хрипы не прослушивались Анализ крови: СОЭ - 12 мм/ч, количество лейкоцитов - 7,2 «109 /л, э - 4%, п - 2%, с - 62%, лимф. - 28%, мои. - 4%. Рентгенологически инфильтративные изменения в легких рассосались. Наступило клиническое выздоровление больного в относитель- но короткий период времени.

О благоприятном течении острой пневмонии свидетельствовали иммунологические исследования - умеренное увеличение ЦИК и высокий уровень антител в сыворотке крови больного определялись в начале лечения.

Пример -2. Больной Л., 38 лет поступил в клинику института с диагнозом: острая очаговая пневмо- ния в нижней доле слепа. При поступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки слева в прикорневой зоне легочный рисунок усилен, определя- ется инфильтрация легочной ткани. Из мокроты больного выделен гемолитический стрептококк (12 10 микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови больного титр антител к выделение- му стрептококку составил 1:80 (In 4,4), ЦИК 180,0 усл.ед.

В процессе /течения (через 3 недели) содержание ЦИК увеличилось до 190 усл.ед. Признаки общей интокси- кации организма больного уменьшились, нормализовалась температура, однако по-прежнему беспокоила общая слабость, кашель с выделением мокроты. При. аускультадии определялось жест- кое дыхание. Рентгенологически в лег- ких выявлялось некоторое рассасывание инфильтративных изменений, по- прежнему сохранялись перибронхиаль- ные и периваскулярные инфильтративные изменения в прикорневой зоне левого легкого.

В данном случаг имело место затяжное течение воспалительного про5

5

81

5 0

5 0

5 о

23Ю

цесса в легких с выраженной тенденцией к его первично-хроническому течению. О затяжном течении воспалительного процесса в легких можно было су- дить по высокому содержанию в сыворотке крови больного ЦИК и низкому уровню специфических антител, определяемым в начале развития заболевания.

Пример 3. Больная Д., 28 лет (история болезни № 912) поступила в клинику института с диагнозом: хронический бронхит в фазе обострения. На рентгенограмме органов грудной клетки легочные поля без видимых очаговых теней, усилен легочный рисунок в нижних отделах обоих легких. Из мокроты больной выделен зеленящий стрептококк (15 10 микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови титр антител к вьщелен- ной культуре составил 1:320 (In 5,3), ЦИК 150,0 усл.ед. В процессе лечения (через 20 дней) содержание ЦИК снизилось до 115 усл.ед. Общее состоя- ние больной нормализовалось, исчезли все жалобы. Физикально в легких перестали прослушиваться хрипы. Показатели общего анализа крови нормализовались. Рентгенологические исследования патологию в легких не выявили. В данном случае обострение хронического бронхита было купировано в течение 20 дней. Больная выписана под наблюдение участкового терапевта в удовлетворительном состоянии. В течение года обострения хронического бронхита на наблюдалось, сл едова- тельно, после лечения наступила стойкая ремиссия заболевания. Благоприятный прогноз течения болезни был установлен в начале лечения (умеренное увеличение ОД К в сы воротке крови больной и высокий титр антител к выделенному из мокроты больного стрептококку) .

Пример 4. Больная Н., 34 года. Поступила в клинику института по поводу хронического гнойного бронхита в фазе обостроения. Больна хроническим бронхитом около 10 лет. Последние 5 лет отмечала частые и затяжные обострения (2-4 раза в году). При поступлении общее состояние средней тяжести. На рентгенограмме органов грудной клетки: в обоих легких избыточен легочный рисунок, в правом легком перибронхилльнля инфильтрация, левый корень расширен.

Из мокроты больной выделен пневмококк (10 10fc микробных тел в 1 мл мокроты) и /5-гемолитический стрептококк (14 106 микробных тел в 1 мл мокроты). В сыворотке крови титр антител к пневмококку составил 1:80, к стрептококку 1:40, содержание ЦИК 220,0 усл.ед. В процессе лечения (через 4 недели) содержание ЦИК возросло до 276,0 усл.ед. Общее состояние больной улучшилось, однако рентгенологически в нижней доле легкого сохранялись перибронхиальные и пери- васкулярные воспалительные изменения На бронхограмме в этой зоне легкого определялись бронхоэктазы. Через 1,5 мес консервативного лечения произведено оперативное вмешательство (частичная резекция нижней доли левого легкого). Послеоперационный период протекал без осложнений. В ткани удаленного легкого обнаружены фиксированные иммунные комплексы, что подтвердило иммунопатологическое действие иммунных комплексов на ткань легких. Через 3 недели после оперативного вмешательства больная выписана из клиники в удовлетворительном состоянии без признаков интоксикации.

В данном случае проводимое консервативное лечение в течение первых 2 мес было неэффективным. Течение заболевания оказалось прогрессирующее и осложненное (развились бронхоэктазы) .

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность повысить точность диагностики прогноза характера

0

5

0

5

0

5

течения неспецифических воспалительных болезней органов дыхания в начале лечения и перехода острого процесса в хроническую фазу заболевания, хронического процесса - в прогрессирующую и осложненную фазу болезни в 95% случаев.

Способ прост, удобен, нетрудоемок и точен, для своего проведения не требует больших затрат рабочего времени и может быть внедрен в работу практического лечебно-профилактического учреждения любого уровня.

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения воспалительного процесса в легких путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности прогнозирования за счет выявления характера течения процесса при неспецифических воспалительных заболеваниях легких и бронхов, в исследуемой крови определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов и титры антител к бактериям, выделенным из мокроты больного, и при уровне циркулирующих иммунных комплексов от 170,5 до 264,5 ед. оптической плотности и титре антител от 1:40 до 1:150 прогнозируют затяжной осложеннный характер течения заболевания, а при уровне иммунных комп- комштексов от 90,4 до 169,6 ед. оптической плотности и титре антител 1:170 до 1:620 - благоприятное течение воспалительного процесса.

Изобретение относится к медицине ,в частности, к пульмонологии, и может быть использовано для диагностики характера течения воспалительных процессов в легких. Цель - повышение точности прогнозирования заболевания легких за счет выявления характера течения процесса при неспецифических заболеваниях легких. Для этого определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов и титр антител к бактериям, вызвавшим воспалительный процесс и выделенным из мокроты или содержимого бронхов больных количественным микробиологическим методом (при содержании в 1 мл мокроты микробных тел более 1^.10⁶), и при значении уровня циркулирующих иммунных комплексов от 170,5 до 267,5 усл.ед. и титра антител от 1:40 до 1:150 определяют затяжной осложненный характер течения процесса и иммуноповреждающее действие иммунных комплексов в легочной ткани, при значении уровня циркулирующих иммунных комплексов от 90,4 до 169,6 усл.ед. и титра антител от 1:170 до 1:620 - благоприятное течение воспалительного процесса.