Способ определения степени тяжести кандидоза Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике заболеваний, вызываемых грибами рода Candida для оценки их тяжести.

Целью изобретения является повышение точности определения степени тяжести кандидоза.

Способ осуществляют следующим образом.

К 4-5 мл крови, полученной пункцией локтевой вены в гепаринизирован- ную пробирку, добавляют 1,5 мл 6%-но- го раствора желатины. Плазму с лейкоцитами центрифугируют при 300 g 10 мин о Избавляются от аутологичных эритроцитов, приливая к полученному осадку клеток 0,5 мл дистиллированной воды с последующим трехкратным отмыванием избытком раствора Хенкса при указанном режиме центрифугирования. Осадок клеток взвешивают в среде Игла или Хенкса до концентрации 2,5 «105 кл. в 1 мл. Смешивают 0,2 мл взвеси клеток с равным объемом антигена Candida albicans в рабочей дозе, предварительно оттитрованной на крови здоровых добровольцев. Это опытные пробы. В контрольные пробы вместо антигена добавляют соответствующий объем среды Игла или Хенкса. Все пробы инкубируют в термостате 45 мин (время, в течение которого еще не вырабатываются лимфокины, но уже происходят мембранные изменения) при 37°С (обычная температура для клеточных реакций у млекопитающих). После этого клетки трижды отмывают средой Хенкса при 300 g по 5 мин, чтобы избавиться от антигена, и осадок взвешивают в О,1 мл среды Игла или Хенкса. Затем к клеточной взвеси добавляют равный объем 0,4%-ных эритроцитов

00

со со л

Ј

барана на среде Хенкса, смесь выдерживают в термостате 5 мин при 37 °С, центрифугируют при том же режиме и затем инкубируют 1 ч при (+4)°С в хо лодилышке. Далее добавляют 0,1 мл сыворотки человека IV (АВ) группы, осторожно пипетируют клеточную взвес и делают мазки на предметных стеклах После высушивания на воздухе мазки окрашивают красной Май-Грюнвальда 1 мин и 2 мин этой же краской, разведенной в два раза водой Краску смывают водой мазки высушивают на воздухе и под микроскопом с иммер- сией подсчитывают 200 лимфоцитов и среди них число розеткообразующих (Е-РОК), т.е. присоединивших 3 и более эритроцитов барана. Для характеристики реакции лимфоцитов на об- работку антигеном высчитывают процент прироста или уменьшения количества Е-РОК после инкубации с антигеном Candida albicans по сравнению с контролем-пробами, не обработан- ными предварительно антигеном, так называемый индекс сдвига спонтанного розеткообразования (ИС) по формуле:

72,5. Следовательно, количество Е-РОК повысилось на 19%. Поставлен диагноз: хронический кандидоз кожи и слизистых ( тяжелая степень кандидо- за). Последующее наблюдение, частые рецидивы, эффективность только комплексной терапии, включающей гормоны, иммуномодуляторы, наряду с антимико- тической подтвердили этот диагноз,,

Пример 2. Больная X., 53 года, поступила 08.09.85. Клинически обнаружено поражение слизистой языка. Степень тяжестки кандидоза оценить не представляется возможным и титр антител в РИГА 1/32 (-log,,0). До лечения больная обследована предлагаемым способом . Установлено, что количество Е-РОК в контроле 45, после обработки антигеном 37, Следовательно, имеет место уменьшение количества Е-РОК на 17%. Определена легкая степень кандидоза. Больная выпечена местной антимнкотической терапией, рецидивов нет в течение двух лет, что подтверждает празильность определения степени тяжести кандидоза предлагаемым способом.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в диагностике заболеваний, вызванных грибами рода CANDIDA ALBICANA. Цель изобретения- повышение точности способа. В пробах крови считают число лимфоцитов, присоединивших 3 и более эритроцитов барана (Е-РОК) после предварительной инкубации с антигеном грибов CANDIDA в течение 45 мин. при 37° по сравнению с контролем (без антигена), и при увеличении количества розеткообразующих лимфоцитов определяют тяжелую степень кандидоза, а при уменьшении или сохранении их количества на уровне контроля определяют легкую степень кандидоза.

г. т,тг т- ,-.тгПример 3„ Больная Щ.,31 год,

„. Е - РОК в опыте - Е - РОК в контроле,,,,.„, ,„ 0 ,, - ИС :--- 3« поступила 21.12,85. Клинически обнаружено поражение слизистой влагалища и двух ногтевых пластинок. Оценить степень тяжести затруднительно по этим симптомам. Титр антител в РНГА 35 1 Л6(-logЈ 4,0), Больная обследована до лечения указанным способом. Количество Е-РОК в контрольных пробах 58, после обработки лимфоцитов антигеном 59« Следовательно, количество 40 Е-РОК практически не изменилось. Определена легкая степень тяжести канЕ - РОК в контроле х 100% ,

Если количество Е-РОК повышается в пробах, обработанных антигеном, по сравнению с контролем на 10 и более процентов, определяют тяжелую степень кандидоза, например, хронический кандидоз кожи и слизистых, характеризующийся тяжелым хроническим течением с частыми рецидивами, плохо поддающийся антимикотической терапии,,

Если количество Е-РОК после об- .работки проб антигеном Candida albicans уменьшается или не изменяется, определяют легкую степень тяжести кандидоза, например, локализованный кандидозкый вульвовагинит, хейлит и т.п. локализованные формы.

Пример 1., Больная О., 30 лет поступила 12009.85 года. Клинически при осмотре обнаружено поражение слизистой оболочки рта, языка, конъ- юктивы, ногтевых пластинок. Степень тяжести по этим признакам определить невозможно. Титр антител в РИГА 1/16 (-logЈ 4,0). Больная обследована до лечения предлагаемым способом. Количество Е-РОК в контроле 64, после обработки лимфоцитов антигеном

45

50

55

дидоза. Назначена местная антимикоти- ческая терапия. Больная выздоровела через 23 дня. Повторно поступила через 1 год 8 мес. с признаками вульво- вагинита, который при бактериологическом обследовании исключался. Однако местная антимикотическая терапия вновь привела к выздоровлению. Все это подтверждает установленную степень тяжести кандидоза.

Предлагаемым способом обследовано 35 больных тяжелой степенью кандидоза и 31 - с легкой. Обнаружено, что данный способ позволяет в случаев точно определить степень тяжести кандидоза, в отличие от прототипа, что доказано статистической об5

0

5

дидоза. Назначена местная антимикоти- ческая терапия. Больная выздоровела через 23 дня. Повторно поступила через 1 год 8 мес. с признаками вульво- вагинита, который при бактериологическом обследовании исключался. Однако местная антимикотическая терапия вновь привела к выздоровлению. Все это подтверждает установленную степень тяжести кандидоза.

Предлагаемым способом обследовано 35 больных тяжелой степенью кандидоза и 31 - с легкой. Обнаружено, что данный способ позволяет в случаев точно определить степень тяжести кандидоза, в отличие от прототипа, что доказано статистической об514833746

работкой результатов различными спо- количество розеткообразующих лимфоци- собами.тов после обработки их антигеном Сап1 dida albicans, и при увеличении колиФормула изобретениячества розеткообразующих лимфоцитов

по сравнению- с контролем определяют

Способ определения степени тяжес- тяжелую степень кандидоза, а при ти кандидоза путем исследования кро- уменьшении розеткообразующих лимфо- ви, отличающийся тем, цитов или сохранении их количества что, с целью повышения точности диаг- ю на уровне контроля определяют легкую ностики, в исследуемой крови выявляют степень кандидоза.