СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано для диагностики фаз рассеянного склероза.

Известен способ диагностики рассеянного склероза на основе реакции торможения миграции лейкоцитов с тканевыми антигенами мозга.

Недостатком данного способа является невозможность оценить в целом состояние иммунной системы, которое необходимо учитывать при лечении больных рассеянным склерозом, и вследствие этого невозможно определить фазу заболевания. Он указывает только на выраженность специфической сенсибилизации и лишен возможности дать интегральную оценку функционирования иммунной системы с позиций целостного организма, единства его регуляторных систем и их полифункциональности.

Известен способ оценки активности монооксигеназной системы, тесно сопряженной с иммунной системой по методу B.Brodie J.Biol.Chem. 1949, Vol, 179, p. 25-29) с модификациями R.De Angelis, R.Welch Fed.Proc., 1974, Vol 33, p. 534).

Известен также способ диагностики рассеянного склероза с помощью антипириновой пробы, недостатком которого является невозможность выявления фаз рассеянного склероза ввиду того, что он лишен специфичности.

Цель изобретения - повышение точности выявления фаз рассеянного склероза путем полисистемной оценки состояния иммунной системы.

Цель достигается тем, что проводят оценку состояния иммунной системы с помощью исследования активности монооксигеназной системы антипириновой пробой и дополнительно определяют специфическую сенсибилизацию лимфоцитов с мозговыми антигенами, причем в качестве антигенов использовали основной белок миелина и лиофилизированные экстракты белого вещества нормального и патологического (от больного рассеянным склерозом) гомологичного мозга и при периоде полувыведения антипирина менее 9,0 ч и наличии сенсибилизации к основному белку миелина и к патологическому мозговому антигену (процент миграции в реакции торможения миграции лейкоцитов < 80%) диагностируют иммунодефицитную фазу, а при периоде полувыведения антипирина более 11,0 ч и наличии сенсибилизации к нормальному мозговому антигену (процент миграции в реакции торможения миграции лейкоцитов < 80%) диагностируют аутоиммунную (нейроаллергическую) фазу.

Сущность изобретения состоит в том, что утром в 7 ч натощак больные принимали во внутрь навеску антипирина (15 мг на 1 кг массы тела), затем отбирали в пробирки слюну по схеме: 0, через 3, 6, 9, 12 и 24 ч. Больные находились на обычном водно-пищевом режиме, исключая прием лекарств. В каждой пробе содержание препарата производили спектрофотометрическим методом на спектрофотометре СФ-26. Метод основан на спектрофотометрической регистрации 4-нитрозоантипирина, образующегося при добавлении азотистокислого натрия и серной кислоты к свободному от белка фильтрату образцов, содержащих антипирин (Brodie B. J.Biol. Chem. 1949, Vol.197, p. 25-29).

Параллельно в этот же день утром натощак у больных забирали кровь из локтевой вены для реакции торможения миграции лейкоцитов с мозговыми антигенами. Использовался капиллярный метод реакции торможения миграции лейкоцитов (Хавинсон В.Х. с соавт. Методические рекомендации по проведению иммунологических исследований. Л. : ВМедА. 1980, с.18). Смесь, состоящая из 0,4 мл гепаринизированной крови и 0,1 мл антигена, приготовленных в необходимой концентрации (10 и 2 мкг/мл культуры), набирали в капилляры до метки на уровне 2/3 длины капилляра. Контрольная проба содержала гепаринизированную кровь и изотонический раствор хлорида натрия. В каждой пробе использовали по 5 капилляров. Капилляры запаивали с одного конца пластической массой и центрифугировали 5 мин при 1500 об/мин. Инкубировали в термостате при температуре 37^оС в течение 18-22 ч. После инкубации учитывали результаты реакции. Под микроскопом с помощью измерительного окуляра определяли величину миграции основной массы лейкоцитов от границы эритроцитарного осадка в контроле и опыте. Результаты реакции торможения миграции лейкоцитов выражали в виде процента миграции (ПМ):
ПМ = · 100
Причем, чем меньше величина процента миграции лейкоцитов, тем выраженнее сенсибилизация лимфоцитов к данному антигену.

Такие же исследования проведены 10 здоровым донорам такого же возраста.

Признак - определение активности монооксигеназной системы с использованием антипириновой пробы известен. Он используется для диагностики нарушений функциональной активности данной системы при хронических заболеваниях печени, аллергических дерматозах, псориазе и рассеянном склерозе.

Признак - определение сенсибилизации лимфоцитов к мозговым антигенам известен. Он используется в диагностике рассеянного склероза.

Новым является совокупность антипириновой пробы и реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) с мозговыми антигенами, а также выявление периода полувыведения антипирина менее 9,0 ч и сенсибилизации лимфоцитов к основному белку миелина и к патологическому мозговому антигену (процент миграции в реакции торможения миграции лейкоцитов < 80%) при диагностике иммунодефицитной фазы, и периода полувыведения антипирина более 11,0 ч и наличии сенсибилизации лимфоцитов к нормальному мозговому антигену (процент миграции в реакции торможения миграции лейкоцитов < 80%) при диагностике аутоиммунной (нейроаллергической) фазы, что говорит о соответствии заявляемого решения критерию "новизна". Совокупность вновь введенных признаков и известных в неврологии для достижения заданной цели ранее не применялась, что говорит о соответствии заявляемого решения критерию "существенные отличия". Совокупность указанных новых и известных признаков позволяет получить новый положительный эффект - выявить фазы рассеянного склероза.

П р и м е р 1. Больная А., история болезни N 11583, 28 лет. Длительность заболевания 8 месяцев. Поступила 3.09.90 г. с жалобами на невозможность самостоятельно ходить, слабость в руках, нарушение зрения, учащенное мочеиспускание с императивными позывами. Объективно: ослабление конвергенции, горизонтальный и вертикальный нистагм. Нарушения координаторных проб в руках, больше справа. Тетрапарез с повышением рефлексов и патологическими рефлексами (Россолимо, Гофмана, Бабинского). Брюшные рефлексы отсутствуют.

При проведении предлагаемого теста выявлено:
повышение скорости окисления антипирина (Т 1/2 антипирина равнялся 6,5 ч);
в РТМЛ с мозговыми антигенами наблюдалась сенсибилизация лимфоцитов к основному белку миелина (процент миграции (ПМ) составлял 64%) и к патологическому мозговому антигену (ПМ 75%).

У больной диагностирована иммунодефицитная фаза.

П р и м е р 2. Больной Д. История болезни N 11407, 25 лет. Длительность заболевания 3 года. Поступил 30.08.90 г. с жалобами на шаткость при ходьбе, императивные позывы на мочеиспускание, слабость в ногах. Объективно: нистагм при крайнем отведении глазных яблок вправо и влево. Патологические рефлексы на руках (Pоссолимо) и ногах (Бабинского). Рефлексы на руках оживлены, на ногах высокие (клонусы коленных чашечек). Высокий тонус в ногах. Интенционное дрожание, неустойчивость в позе Ромберга. Нарушение суставно-мышечного чувства в пальцах ног. Гипестезия всей правой ноги, начиная со средней трети голени - гиперестезия.

При проведении предлагаемого теста выявлено:
значительное угнетение монооксигеназной системы (Т 1/2 антипирина составил 16,5 ч);
в реакции торможения миграции лейкоцитов наблюдалась сенсибилизация лимфоцитов к нормальному мозговому антигену (ПМ 66%).

У больного диагностирована аутоиммунная (нейтроаллергическая) фаза.

П р и м е р 3. Больная Л. История болезни N 13246, 20 лет. Длительность заболевания 1 год. Поступила в клинику 18.10. 90 г. При поступлении предъявляла жалобы на чувство неловкости в левой руке, пошатывание при ходьбе.

Объективно: со стороны черепно-мозговой иннервации патологии не выявлено. Неустойчивость в позе Ромберга, адиадохокинез слева.

При оценке активности монооксигеназ период полувыведения антипирина незначительно повышен (Т 1/2 = 11,2 ч). Процент миграции лейкоцитов составил 92% , 100% и 110 на основной белок миелина, патологический и нормальный мозговой антигены соответственно.

Несмотря на незначительное снижение скорости окисления антипирина у больной отсутствуют иммунопатологические реакции, так как нет специфической сенсибилизации лимфоцитов к мозговым антигенам.

Основной терапией рассеянного склероза является воздействие на иммунную систему, поскольку общепризнана роль иммунопатологических процессов в патогенезе демиелинизирующих заболеваний.

Если сам факт наличия иммунопатологических процессов у больных рассеянным склерозом не вызывает сомнений, то показания и направление воздействия на иммунную систему - угнетение или стимуляция - широко дискутируются и неоднозначны. Около 10-15 лет назад основным направлением воздействия на иммунную систему считалась иммуносупрессия. Основными препаратами лечения больных рассеянным склерозом являлись кортикостероиды, препараты, обладающие цитостатическим действием (азатиоприн, метотрексат, циклофосфан и др. ).

Однако, назначаемые без достаточных оснований кортикостероиды вызывают соматические осложнения, а иногда обострение заболевания или оказываются неэффективными. По полученным данным, только около 22% всех больных рассеянным склерозом нуждаются в назначении кортикостероидов.

Поскольку основным иммунологическим дефектом при рассеянном склерозе является дефицит Т-клеточного иммунитета, в частности Т-лимфоцитов-супрессоров, выражается сомнение в иммунодепрессии, как методе лечения рассеянного склероза.

В связи с этим появилось второе направление в терапии рассеянного склероза - стимуляция Т-системы иммунитета. С этой целью использовались препараты вилочковой железы (тималин, Т-активин, тимоген и др.), левамизол. Но и в этом случае положительный эффект отмечен в 30-50% случаев, в зависимости от применяемого иммуномодулятора.

Становится очевидным, что клинические и особенно иммунологические результаты лечения в подавляющем большинстве случаев зависят от исходного состояния иммунной системы, которое отражает фазу заболевания. Установлено наличие фаз в процессе развития рассеянного склероза, что указывает на важность выяснения исходного состояния иммунной системы при назначении иммуномодулирующей терапии и демонстрирует неэффективность терапии у больных рассеянным склерозом без учета фаз состояния клеточного иммунитета.

Исходя из сказанного, ясно, что знание фазы рассеянного склероза является залогом успешной коррекции нарушений механизмов иммунологической защиты, развивающихся при этом заболевании.

Было обследовано 24 больных рассеянным склерозом в возрасте от 17 до 43 лет. Мужчин - 10 человек, женщин - 14 человек. Продолжительность заболевания составляла от 6 месяцев до 16 лет. У всех больных диагностирована цереброспинальная форма рассеянного склероза с легкой и средней степенью неврологического дефицита. Контрольную группу составили 10 доноров такого же возраста.

По результатам предлагаемого теста установлено, что среди 24 больных рассеянным склерозом 12 человек (50%) имели иммунодефицитную фазу, 8 человек (33%) - аутоиммунную (нейроаллергическую) фазу и 4 человека (17%) - не имели нарушений иммунной системы. Результаты теста представлены в табл.1.

При помощи общепринятых иммунологических тестов (определение абсолютного и относительного числа лимфоцитов, Т (Е-розеткообразующих клеток) и В (ЕАС-розеткообразующих клеток) лимфоцитов и концентрации различных классов иммуноглобулинов) нельзя было выделить фазы рассеянного склероза.

Нормальные показатели относительного и абсолютного числа лимфоцитов Т (Е-РОК)-лимфоцитов, В (ЕАС-РОК)-лимфоцитов и концентрация различных классов иммуноглобулинов (JgM, JgG, JgA) установлены у 12 (50%) больных.

Снижение относительного и абсолютного числа лимфоцитов, Т(Е-РОК)-лимфоцитов, нормальное количество В(ЕАС-РОК)-лимфоцитов, нормальное количество В(ЕАС-РОК)-лимфоцитов и нормальный уровень иммуноглобулинов выявлен у 8 (33%) больных.

Повышение числа В-лимфоцитов и уровня иммуноглобулинов классов М и G, при нормальных значениях других иммунологических показателей установлено только у 4 больных (17%).

Иммунологические показатели представлены в табл.2, 3.

Анализ полученных данных показал, что на основании только иммунологических показателей удалось выделить 3 группы больных:
1. Больные без нарушений иммунной системы (12 человек или 50% обследованных).

2. Больные с Т-лимфопенией (8 человек - 33%).

3. Больные с В-лимфоцитозом и гипериммуноглобулинемией (4 человека - 17%).

Проведение предлагаемого полисистемного иммунобиохимического теста выявило из 24 больных рассеянным склерозом:
1) 12 больных с иммунодефицитной фазой, из которых только 8 человек соответствовали критериям оценки по иммунологическим тестам;
2) 8 человек с аутоиммунной (нейроаллергической) фазой рассеянного склероза, из которых только 4 соответствовали критериям иммунологических тестов, не дающих кроме того ответ, что является аутоантигеном;
3) 4 больных не имели иммунологических нарушений. На основании оценки только иммунологических тестов, таких больных было 12 человек.

На основании данных, полученных в результате проведения предлагаемого иммунобиохимического теста были выделены 12 больных с иммунодефицитной фазой рассеянного склероза. Этой группе больных была проведена иммунокорригирующая терапия с целью восстановления иммунологической реактивности. В качестве иммунокорректора использовали тималин - препарат, который индуцирует образования, дифференцировку и функциональную активность иммунокомпетентных клеток, регулирует реакции клеточного иммунитета.

Тималин применяли 1 раз в сутки по 10 мг в течение 10 дней внутримышечно. Препарат предварительно растворяли в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия. В результате проведенного лечения наблюдались клинический и лабораторный положительный эффект, регистрируемый в предлагаемом тесте (снизилась исходно высокая скорость окисления антипирина Т 1/2 - 9,4+0,6 ч, значительно уменьшилась сенсибилизация лимфоцитов к основному белку миелина (р < 0,05) и к патологическому мозговому антигену (р < 0,05) (см. табл.4).

Данная группа больных рассеянным склерозом (8 человек) имела аутоиммунную фазу (нейроаллергический синдром). Этой группе больных была проведена иммунокорригирующая терапия дексаметазоном (60-70 мг на курс), перорально, начиная с 4 мг ежедневно с последующим снижением дозы каждые 5 дней на 0,5 мг. У всех больных в результате лечения состояние значительно улучшилось. Уменьшилась гиперрефлексия, исчезли клонусы, восстановилась функция тазовых органов, увеличилась сила в паретичных конечностях в 1,5-2 раза по показаниям динамометра.

Наблюдалась нормализация лабораторных показателей (Т 1/2 антипирина 11,2+0,5 ч), снизилась сенсибилизация к нормальному мозговому антигену (р < 0,01) (см. табл.4).

Изобретение относится к медицине, в частности к области неврологии и может быть использовано для диагностики фаз рассеянного склероза. Цель изобретения - повысить точность выявления фаз рассеянного склероза путем полисистемной оценки состояния иммунной системы. Сущность изобретения состоит в том, что проводят оценку состояния иммунной системы с помощью исследования активности монооксигеназной системы антипириновой пробой и дополнительно определяют специфическую сенсибилизацию лимфоцитов в реакции торможения миграции лейкоцитов с мозговыми антигенами. Причем в качестве антигенов использовали основной белок миелина и лиофилизированные экстракты белого вещества нормального и патологического (от больного рассеянным склерозом) гомологического мозга. Описанный способ является эффективным при диагностике фаз рассеянного склероза и позволяет, диагностируя фазу заболевания, проводить целенаправленную патогенетическую терапию. 4 табл.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА путем исследования монооксигеназной системы с помощью антипириновой пробы, отличающийся тем, что , с целью повышения точности способа при выявлении состояния иммунной системы пациента, параллельно проводят реакцию торможения миграции лейкоцитов с мозговыми антигенами, при этом в качестве антигена используют основной белок миелина и лиофилизированный экстракт белого вещества нормального и патологического мозга и при значении периода полувыделения антипирина менее 9,0 ч на фоне сенсибилизации к основному белку миелина и патологическому мозговому антигену диагностируют иммунодефицитную фазу рассеянного склероза, а при периоде полувыведения антипирина более 11,0 ч на фоне сенсибилизации к нормальному мозговому антигену диагностируют аутоиммунную фазу рассеянного склероза.