Способ диагностики аспириновой бронхиальной астмы Советский патент 1989 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике аспириновой бронхиальной астмы.

Целью изобретения является повышение специфичности и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Для исследования берут 3,0 мл ге- паринизированной венозной крови, добавляют 0,3 мл 10%-ного раствора желатины, инкубируют 45 мин, отбирают плазму, центрифугируют 10 мин (g 300), затем сливают надосадочную жидкость, ресуспендируют лейкоциты в 3,0 мл раствора Тироде (NaCl 8 г/л, КС1 0,2 г/л, CaClti 0,2 г/л, MgCLj 0,01 г/л, NaHuP04 0,005 г/л, NaHCCXj 1,0 г/л, глюкоза 1,0 г/л/ рН 7,4), вновь центрифугируют 10 мин, сливают надосадочную жидкость, осадок ре- суспендируют в 1,0 мл указанного саст вора. После этого 0,02 мл полученной суспензии растворяют в 0,4 мл 3%-ной уксусной кислоты и производят подсчет клеток в камере Горяева. К 1,0 мл исследуемой суспензии лейкоцитов добавляют 0,01 мл 0,01%-ного раствора ин- дометацина. Инкубируют, встряхивая 30 мин при 37°С. После этого центрифугируют 10 мин (), надосадочную Жидкость сливают и к ней добавляют 0,5 мл изопропанола, 0,03 мл муравъи14833794

зации к аллергену из домашней пыли, начата специфическая гипосенсибили- зация. Во время пребывания ребенка

5 в отделении для снятия зубной боли были применены местно анальгин и аспирин, после чего появилась сыпь, сухие свис.тящие хрипы. Стал вопрос о наличии у ребенка аспириновой аст10 мы на фоне атопии, причем проведение провокационного теста было признано нецелесообразным из-за опасности развития приступа удушья. При инкубации 1,5х 1 О7 лейкоцитов с 0,01%-ным раст

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике аспириновой бронхиальной астмы. Целью изобретения является повышение специфичности за счет использования более патогенетически обоснованного показателя -регистрации лейкотриенов и ускорение способа. Для этого выделяют из периферической крови больного лейкоциты подсчитывают число клеток, отмывают их центрифугированием в растворе Тироде, затем суспензию лейкоцитов инкубируют с 0,01%- ным раствором индометацина в течение 30 мин. при 37°С со встряхиванием. После инкубации лейкоциты осаждают центрифугированием, а из надосадочной жидкости экстрагируют органическую фазу добавлением изопропанола, муравьиной кислоты и спустя 5 мин. этилового эфира, к органической фазе добавляют 25%-ный раствор аммиака и высушивают под вакуумом. Осадок после высушивания растворяют в смеси ацетонитрил-вода -уксусная кислота (50:50:0,1 по объему). Лейкотриены определяют на жидкостном высокоэффективном хроматографе в системе ацетонитрил- вода -уксусная кислота (50:50:0,1, PH 3,7) со скоростью потока 1,5 мл/ мин на колонках 4,6х 250мм с сорбентом ОДС С₁8 по оптической плотности при длине волны 280 нм. При этих условиях лейкотриен (ЛТ) С₄ определяется на 8-й мин, а ЛТД₄ -на 22-й мин. При наличии лейкотриенов диагностируют аспириновую бронхиальную астму. Способ позволяет установить диагноз в 100% случаев, а также сократить время исследования в 2 раза.

ной кислоты, через 5 мин - 1,5 мл эти-15 вором индометацина в супернатанте вы20

25

левого эфира. Верхнюю (органическую) фазу отбирают, к ней добавляют 0,022 мл 25%-ного раствора аммиа-са и высушивают под вакуумом. Экстракцию лейкотриенов проводят по Clansy- Hugly. Осадок растворяют в 0,025 мл раствора ацетонитрил - вода - уксусная кислота (50:50;0,1 по объему); лейкотриены определяют на жидкостном высокоэффективном хроматографе в системе ацетонитрил - вода - уксусная кислота (50:50:0,1, рН 3,7) со скоростью потока 1,5 мл/мин на колонках 4,6x250 мм с сорбентом ОДС С ,а , размер частиц 5 мкм. Чувствительность 30 УФ детектора 0,02 ед. на шкалу при длине волны 280 нм (Peters с соавт.). При этих условиях лейкотриен (ЛТ) С4 определяется на 8-й мин, ЛТ Д - на 22-й мин. Расчет количества ЛТ проводят относительно определенного количества простагландина Вг, используемого в качестве внутреннего стандарта. Появление этих пиков на хрома- тограмме свидетельствует о неперено- 40 мым способом, симости больными нестероидных противовоспалительных препаратов и наличие у ни аспириновой бронхиальной астмы, В норме указанные пики в исследуемом материале отсутствуют.

Пример 1, Больная К„, 4 года, поступила с диагнозом бронхиальная астма, атоническая, средне-тяжелое течение, межприступный период. За год до поступления в клинику при респираторной инфекции родители давали ребенку амидопирин, анальгин, реакции не отмечалось. При аллерголо- гическом обследовании в отделении отмечена высокая степень сенсибили- 55

явлено 3,46x10 г/мл лейкотриена С4/С4 (2, 107 лейкоцитов), что свидетельствует о непереносимости больной препаратов из группы НСПП и подтверждает наличие у нее аспириновой бронхиальной астмы. Таким образом, полученные данные позволили дать рекомендации о необходимости избегать назначения для больной препаратов из группы НСПП и пищевых що- дуктов, в которых они содержатся, что позволит избежать дальнейшего обострения заболевания.

35

Положительный эффект предлагаемого способа состоит в том, что он позволяет повысить специфичность диагностики путем использования более пато- гномичного показателя, значение которого у больных в среднем в 28 раз выше, по сравнению с контролем. Ускорение диагностики в 2 раза достигается путем сокращения времени анализа с 6 ч в прототипе до 3 ч предлагаеФормула изобретения

Способ диагностики аспириновой 45 бронхиальной астмы путем высокоэффективной жидкостной хроматографии, о т- личающийся тем, что, с - „. целью повышения специфичности и ускорения способа, в надосадочной жидкости отмытых лейкоцитов периферической крови, обработанных 0,01%-ным раствором индометацина, определяют содержание лейкотриенов Сд, Д, Е и при их наличии диагностируют аспири- новую бронхиальную астму.

50

вором индометацина в супернатанте вы

мым способом,

явлено 3,46x10 г/мл лейкотриена С4/С4 (2, 107 лейкоцитов), что свидетельствует о непереносимости больной препаратов из группы НСПП и подтверждает наличие у нее аспириновой бронхиальной астмы. Таким образом, полученные данные позволили дать рекомендации о необходимости избегать назначения для больной препаратов из группы НСПП и пищевых що- дуктов, в которых они содержатся, что позволит избежать дальнейшего обострения заболевания.

мым способом,

Положительный эффект предлагаемого способа состоит в том, что он позволяет повысить специфичность диагностики путем использования более пато- гномичного показателя, значение которого у больных в среднем в 28 раз выше, по сравнению с контролем. Ускорение диагностики в 2 раза достигается путем сокращения времени анализа с 6 ч в прототипе до 3 ч предлагаемым способом,

Формула изобретения

Способ диагностики аспириновой бронхиальной астмы путем высокоэффективной жидкостной хроматографии, о т- личающийся тем, что, с - „. целью повышения специфичности и ускорения способа, в надосадочной жидкости отмытых лейкоцитов периферической крови, обработанных 0,01%-ным раствором индометацина, определяют содержание лейкотриенов Сд, Д, Е и при их наличии диагностируют аспири- новую бронхиальную астму.