Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения препаратов - эубиотиков, используемых для нормализации микробиоценоза влагалища .
Целью изобретения является новый штамм, обладающий антибиотикоустой- чивостью и вьфаженными адгезивными свойствами.
Штамм Lactobacillus acidophilus получен из исходного штамма L.acidophilus ВР-27 путем селекции. Исходный штамм L.aeidophilus ВР-27 выделен из влагалища здоровой взрослой женшины.
Штамм Lactobacillus acidophilus депонирован в Центральном Музее про- мьшшенных микроорганизмов института ВНИИгенетика под номером ЦМПМ В-3324 и характеризуется следующими признаками.
Культурально-морфологические свойства. Длинные и тонкие неспоро- образующие клетки окрашиваются грам- положительно. В чистой культуре клетки располагаются бессистемно. В жидкой селективной среде МРС растет диф- фузно. Характерен придонный рост, вся среда при этом остается прозрачной, иногда бактерии распределяются по стенкам пробирки.
UD
эо
00 4
На плотной среде МРС образует колонии S-типа, круглые с ровными краями, гомогенные, -непрозрачные, пигмента не образуют; профиль колоний выпуклый, без блеска, легко снимаются петлей с поверхности плотной среды.
Штамм может расти на следующих средах: обезжиренное молоко - на вторые сутки после посева молоко свертывается, с образованием плотного сгустка и отделением сыворотки; на жидкой синтетической среде H.Haenel - количество жизнеспособных клеток при этом достигает 10 -10 в 1 мл; первые пассажи штамма дают обильный придонный рост на жидкой среде Блау- рокка для бифидобактерий; в последующих пересевах рост штамма может истощаться; в полужидком Х0,7%) агаре Блаурокка (при посеве в пробирки с 9 МП среды) образует слегка выпуклые дисковидные колонии.
Физиолого-биохимические признаки. Оптимум роста при 37,5-38,0°С, оптимум рН 6,2-6,4, анаэроб.
Каталазы не образует. . Сбраживает сахарозу, мальтозу, галактозу, фруктозу, лактозу, раффи- нозу; че сбраживает ликсозу, ксилозу, маннит, рамнозу, дульцит, цит- руллин, рибозу, сорбит.
Кислотообразование при выращивании в обезжиренном молоке 92 (по Тернеру).
Устойчивость к антибиотикам и антагонистические свойства приведены в табл. 1.
Пример 1, Изучение влияния лактобактерий L.acidophilus на восстановление вагинальной нормофлоры у женщин,
Под наблюдением находилось 18 жен- дд щин в возрасте 23-35 лет с вагинальным дисбактеризом. У всех женщин отмечался резко вьфаженный дефицит молочнокислой лактофпоры. Количество лактобактерий во влагалище всех обследованных женшин составляло 10 - 10 кл./г. В то же время число стафилококков и дрожжей достигало 10 - 10 кл./г исследуемого материала.
50
40 затем в смесь добавляют 2,0 г ланолина, который связывает свободную воду и обеспечивает гомогенность смеси. После этого гомогенную массу раскатывают и выкладывают ,в специальный металлический дозатор, при помощи которого готовят 30 свечей. Свечи хранят в целлофановых обертках в холодильнике при 4° С на протяжении 10 сут. На 1, 5 и 10-е сут хранения определяют в свечах количество жизнеспособных лактобактерий. Установлено, что на протяжении ТО сут после изготовления свечей число жизнеспособных
лактобактерий в каждой свече составУ 8 женщин определялисьэнтеробактери ляет 1-10 клеток. в количестве 10 - 10 кл,/г иссле
ные группы. Женишны первой группы получали ежедневно в течение 10 дней местно штамм L.acidophilus В-2
№ В-3324 в количестве 1-10 жизнеспособных клеток. Женщинам второй группы не назначали местно лактобак- . терии. У женщин первой группы на 1-й и 2-й дни после завершения курса бактериотерапии отмечалась выраженная нормализация вагинальной микрофлоры, которая сохранялась и в последующие сроки наблюдения. На 7-й день после отмены лактобактерий количество стафилококков составляло 10 кл./г, энте- робактерий менее 10 кл./г, дрожжей 10 кл./г. Лактобактерий, занимая доминирующее положение среди других представителей вагинальной микрофлоры, составляли 10 кл./г и превьш1али уровни условно патогенных микроорга- низмов в 10 раз.
У жeншJ н второй группы в те же сроки наблюдения сохранялся выраженный, вагинальный дисбактериоз: коли- ч-ество энтеробактерий, стафилококков и дрожжей составляло Ю - 10, 10 - 10 и - 10 КЛ../Г соответственно при значительном дефиците лактофлоры
i02 - 10 кл./г.
Пример 2. Изучение жизнеспособности лактобактерий L.acidophilus В-2, В-3324, находящихся в вагинальных свечах.
Получают биомассу суточной культуры лактобактерий, выросших на жидкой среде МРС, содержащую 3.10 жизнеспособных клеток. Биомассу лактобактерий смешивают с 30 г масла какао и
затем в смесь добавляют 2,0 г ланолина, который связывает свободную воду и обеспечивает гомогенность смеси. После этого гомогенную массу раскатывают и выкладывают ,в специальный металлический дозатор, при помощи которого готовят 30 свечей. Свечи хранят в целлофановых обертках в холодильнике при 4° С на протяжении 10 сут. На 1, 5 и 10-е сут хранения определяют в свечах количество жизнеспособных лактобактерий. Установлено, что на протяжении ТО сут после изготовления свечей число жизнеспособных
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения препаратов - зубиотиков, используемых для нормализации микробиоценоза влагалища. Цель изобретения - создание штамма бактерий LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS, обладающего антибиотикоустойчивостью и выраженными адгезивными свойствами. Штамм получен путем селекции, депонирован в Центральном Музее промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-3324. Штамм L.ACIDOPHILUS в виде свечей используют для лечения нарушений микробиоценоза влагалища. 2 табл.
дуемого материала.
Все обследованные женщины бьти разделены на две равные и эквивалентСравнительные данные по адгезив- ностной способности штамма представлены в табл. 2.
51
Индекс адгезивностн по отношению к эпителиоцитам влагалища определяют следующим образом.
Культуру лактобактерий (В-2) выращивают на жидкой среде МРС в течение 36 ч, центрифугируют Т5 мин при 3000 об/мин и трехкратно отмывают в растворе Хэнкса, Эпителиоциты из влагалищного отделяемого отмывают
троекратно в среде 199, после чего подсчитывают их концентрацию в единице объема (с помощью камеры Горячева) . Смесь лактобактерий и эпите- лиоцитов в соотношении 100:1 (в ере- де 199) инкубируют 30 мин при 37 С, Для фиксации лактобактерий, взаимодействующих с эпителиоцитами, в смес добавляют глютаровый альдегид, после чего на предметных .стеклах готовят мазки и окрашивают их по Романовско- му-Гимза,
Индекс адгезии определяют как среднее число лактобактерий, прикрепленных к одному эпителиоциту (при подсчете на 100 эпителиоцитов, участвующих в адгезии) в препарате.
Формула изобретения
Штамм бактерий Lactobacillus aci- dophilus, ЦМПМ В-3324 (Центральный Музей промьшшенных микроорганизмов института ВНИИгенетика), используемый для приготовления бакпрепаратов для нормализации микрофлоры при нарушении микробиоценоза влагалища.
Таблица
Продолжение табл.1
30
35
| Ленцнер А.А., Миксельсаар Н.Э., Кирх Р.А | |||
| Лактофлора близнецов и экспериментальных животных одного ромета | |||
| - Актуальные вопросы иммунодиагностики и иммунорегуляции | |||
| Материалы V научной конференции по проблеме клинической иммунологии | |||
| Таллин, 1982, с.210. |
