Изобретение относится к микробиологической и комбикормовой промьшшен- ности и касается 1етодов контроля содержания истин)1ого белка непосредственно в кормовых дрожжах или в кор- мосмесях.
Целью изобретения является повьшге- ние точности определения белка.
Изобретение заключается в том, что предварительную обработку сухого препарата (биомассы микроорганизмов или продукта микробного синтеза) проводят ацетоном при 15-55 С в течение 15-30 мин, удаляют ацетон, инкубирук1Т препарат при 50-100 С в
течение 10-30 мин в растворе красителя амидочерн-ого 10В в подкисленной с помощью НС1 дистиллированной воде до рН 1-3, а затем фильтруют и измеряют оптическую плотность фильтрата. В качестве стандартного препарата используют биомассу микроорганизмов или продукт микробного синтеза с заранее определенным содержанием белка с помощью известного метода, например по Барнштейну.
Для определения связывания красителя амидочерного 10В с анализируемым препаратом берут небольшое количество этого препарата (около 20 г),тща4 СО СА СО СП N5
тельно растирают в фарфоровой ступке пестиком в течение 10 мин и высушивают при до постоянного веса (хранят препарат в стеклянном бгоксе с притертой крышкой).Затем делают необходимую навеску препарата, добавляют 15 мл ацетона и перемешивают при комнатной температуре (см,табл.1 в течение 15 мин (см.табл.2) на маг- нитной мешалке. После этого суспензию центрифугируют в течение 15 мин при 7000-8000 об/мин, ацетон удаляют декантацией, а осадок высушивают при комнатной температуре в течение 5-10 мин. К высушенному от ацетона препарата добавляют 0,01 н НС1, рН 2 (см.табл-. 3,4) до концентрации препарата 5 мг/мл и перемешивают при комнатной температуре на магнитной мешалке в течение 15 мин. Затем не прекращая перемешивание, разносят аликвоты суспензии по пробиркам,доводя объем до 1,5 мл с помощью 0,01 н НС1, и добавляют в каждую пробирку по 3 мл раствора красителя амидочер- ного 10В 0,6 г/л в 0,01 н НС1. Далее пробирки помещают в термостат и инкубируют при 60°С (см.табл,5) в течение 20 мин (см.табл.6) при перемешивании. После инкубации фильтруют все образцы и контроль (раствор красителя без препарата) через бумажные фильтры на воронках. Фильтраты разбавляют в 25 раз, для чего к 0,2 мл фильтрата добавляют 4,8 мл 0,01 н НС1, а затем измеряют оптическую - плотность D при 590 нм в стеклянных кюветах с длиной оптического пути 1,0 см против 0,01 н НС1. Далее определяют разницу ЛВ между оптическими плотностями контроля и опытного образца. Связывание красителя с анализируемым препаратом (разницу между оптическими плотностями) выражают в процентах от оптической плотности фильтрата контроля.
Содержание истинного белка в продуктах микробного синтеза и биомассе микроорганизмов определяют по формуле
С --I-100%,
Ах
где С - содержание белка;
у - значение связывания красителя с белком;
X - соответствующее этому связыванию значение концентрации анализируемого препарата;
А и В - эмпирические коэффициенты уравнения калибровочной прямой (), рассчитанные с помощью метода наименьших квадратов из нескольких параллельных опы- тов по связьтанию красителя амидочерного 10В со стандартным препаратом (биомассой микроорганизмов или . продуктом микробного синтеза) , содержание белка в котором определено с помощью известного метода, например по Барнштейну или по данным аминокислотного анализа. В табл.1 показано влияние температуры обработки ацетоном препарата кормовых гидролизных дрожжей с кон- . центрацией 5 мг/мл на связывание красителя амидочерного 10В с ними.
В табл.2 показано влияние времени обработки ацетоном препарата кормовых гидролизных дрожжей на связьшание красителя амидочерного 10В с ними.
В табл.3 показано влияние рН раствора красителя амидочерного 10В на его связывание с кормовыми гидролизными дрожжами.
В табл.4 показано связывание кра сителя амидочерного 10В с кормовыми гидролизными дрожжами в зависимости от состава растворителя. .
В табл.5 показано влияние температуры инкубации кормовых гидролизных дрожжей с красителем амидочерным 10В на его связывание с дрожжами.
В табл.6 показано влияние времени инкубации кормовых гидролизных дрожжей с красителем амидочерным 10В на его связывание с ними.
При ме р. Первоначальным зтапом определения белка по предлагаемому способу является определение эмпирических коэффициентов калибровочной прямой (у Ах + В), т.е. зависимости связывания красителя амидочерного 10В со стандартным препаратом от концентра- рти в этом препарате истинного белка, который определяли по Барнштейну. В качестве стандартного препарата для определения белка в биомассе микроорганизмов мы использовали кормовые
гидролизные дрожжи с содержанием белка в расчете на сухой вес 41,42%. Эмпирические коэффициенты А и В определяли по методу наименьших квадратов
по данным 5 параллельных опытов (см.табл.7):
Содержание белка в анализируемых препаратах определяли по формуле
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ШТАММ ДРОЖЖЕЙ CANDIDA FAMATA - ПРОДУЦЕНТ КОРМОВОЙ БИОМАССЫ | 1995 |
|
RU2090610C1 |
| СПОСОБ АНАЛИЗА КОРМОВЫХ ДРОЖЖЕЙ НА СОДЕРЖАНИЕ НУКЛЕОТИДНОЙ ФРАКЦИИ | 2009 |
|
RU2413942C1 |
| Способ получения кормового микробиологического белка | 2018 |
|
RU2704281C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТИМУЛЯТОРА РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ | 2011 |
|
RU2482175C1 |
| Способ получения заменителя цельного молока для молодняка сельскохозяйственных животных БИО-ЗЦМ-1 | 1987 |
|
SU1472030A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ | 1996 |
|
RU2111253C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРМОВОГО БЕЛКОВОГО ПРОДУКТА НА ОСНОВЕ ЗЕРНОВОГО СЫРЬЯ | 2002 |
|
RU2220590C1 |
| Способ количественного определения истинного белка в кормовых дрожжах | 1986 |
|
SU1401380A1 |
| Штамм дрожжей ТRIсноSроRоN сUтаNеUм - источник белковой биомассы "Биогил" и способ ее получения | 1987 |
|
SU1430402A1 |
| СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРЕВАРИМОСТИ БЕЛКОВ | 1991 |
|
RU2022021C1 |
Изобретение относится к микробиологической и комбикормовой промышленности и касается методов контроля содержания истинного белка непосредственно в кормовых дрожжах или в кормосмесях. Цель изобретения - повышение точности определения белка. Способ заключается в том, что проводят предварительную обработку образца ацетоном при 15-55°С в течение 15-30 мин и при отношении исходного образца и растворителя не более 0,5-1,0%, после чего ацетон удаляют, а инкубацию образца с раствором красителя амидочерного 10В проводят при 50-100°С в течение 10-30 мин в дистиллированной воде, причем добавление красителя осуществляют с установлением PH с помощью HCL в пределах 1-3 с последующим фильтрованием и измерением оптической плотности фильтрата при 590 нм. Предлагаемый способ позволяет количественно определять белок в биомассе микроорганизмов с высокой точностью. 12 табл.
Nl iJ-il LlALlli -Zil
NiX;- (Х,.)
В AnLi5 2jLi-l 5i)i(l.Xij:iL
N X-JT - feX;)
8,11 -
где А и В - эмпирические коэффициенты калибровочной прямой концентрация белка в стандартном препарате опытные значения связывания красителя с препаратом, соответствующие х;, N - число измерений. В табл.7 показано связьгеание красителя амидочерного 10В со стандартным препаратом кормовых гидролизных дрожжей.
X;УГ
Содержание белка в анализируемых препаратах определяли по формуле
100%.
С -Х-1-8л11- . 30,07.x
В качестве анализируемого препарата взяли дрожжи (кормовые гидролизные) с неизвестным содержанием белка (см.табл.8).
В табл.8 показано связывание красителя амидочерного ЮВ с анализируемым препаратом кормовых гидролизных дрожжей.
В результате проведенных расчетов получили следующие значения содержания белка в анализируемом препарате кормовых гидролизных дрожжей:
С, 39,99%; С 42,97%; С з 41,51 41,49 ± 0,63%.
Таким образом, содержание белка в анализируемом препарате кормовых гидролизных дрожжей составляет 41,49%.
Для определения содержания белка в продукте микробного синтеза в качестве стандартного препарата использовали дрожжёванную ржаную муку с содержанием белка по Барнштейну 10,62% (см.табл.9) и белково-вита- минный концентрат (БВК) с содержанием белка 55,13% (см.табл.11).
В табл.9 показано связывание красителя амидочерного 10В со стандартным препаратом дрожжёванной ржаной муки.
Г - У 35,63 X
100%
В качестве анализируемого препарата мы использовали дрожжеваннзто ржаную муку (см.табл.10) с неизвестным содержанием белка.
В табл.10 показано связывание красители амидочерного 10В с анализируемым препаратом дрожжёванной ржаной муки.
в результате проведенных расчетов получили следующие значения содержания белка в анализируемом препарате:
С, 11,07%; Ct 11,28%; Сз 11,19%i ССР 11,18 ± 0,07%.
Таким образом, содержание белка в анализируемом препарате дрожжёванной ржаной муки составляет 11,18%.
В табл.11 показано связьшание красителя амидочерного ЮВ со стандартным препаратом белково-витаминного концентрата.
Содержание белка в анализируемых препаратах белково-витаминных концентрациях определяли по формуле
У - 27,09 -х
100%.
В качестве анализируемого препарата использовали белково-витаминный 35 концентрат (см.табл.12) с неизвестным содержанием белка.
В табл.12 показано связывание красителя амидочерного ЮВ с анализируе- 40 мым препаратом белково-витаминного концентрата.
В результате проведенных расчетов получили следующие значе 1ия содержания белка в анализируемом препарате дс белково-витаминного концентрата:
С, 56,45%; C,j 55,88%; С, 55,96%; Сср 56,10 ± 0,24%.
Таким образом, содержание белка в анализируемом препарате БВК составля- 50 ет 56,10%.
Формула изобретения
55
Способ определения содержания белка, предусматривающий предварительную обработку исходного образца, добавление к нему красителя амидочерного ЮВ с одновременным регулировй- нием рН среды, инкубирование, удаление осадка с последующим спектрофото- метрическим анализом надосадочной фракции и расчетом содержания белка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения белка, предварительную обработку образца проводят ацетоном при IS-SS C в течение 15-30 мин и при отношении
Оптическая плотность контроля не зависела от рН в исследованном диапазоне.
исходного образца и растворителя 0,5-1,0, после чего ацетон удаляют, а инкубацию образца с раствором красителя проводят при 50-100 с в течение 10-30 мин в дистиллированной воде, при этом добавление красителя осуществляют с установлением рН с помощью НС1 в пределах 1-3.
Таблица 1
Буферный раствор содержал 37,65 г/л лимонной кислоты и 1,136 г/л ,
Таблица 5
Оптическая плотность контроля не зависела от температуры в исследованном диапазоне.
Таблица 6
В таблице представлены усредненные значения связывания, полученные из 5 опытов „
1493952
10 Таблица 4
11
В таблице представлены усредненные значения связывания, полученные из 5 опытов.
Таблица 10
В таблице предстаилены усредненные значения связьгоания, полученные из 5 опытов.
l 93952
12 Таблица 8
,5 А,5 3,5 3,5 3,0 3,0
1,20 0,19 0,21 0,40 0,38 0,48 0,48
Таблица 12
О 1,00
0,81 0,72
О 83,33
67,50 60,00
| Бузун Г.А., Джемухадзе К.М., Нилешко Л.Ф | |||
| Определение белка в растениях с помощью амидочерного | |||
| - Физиология растений, 1982, 29,1, с | |||
| Складная решетчатая мачта | 1919 |
|
SU198A1 |
