Способ консервирования гемолимфы насекомых Советский патент 1989 года по МПК A01N1/02 

Изобретение относится к биологии, в частности к энтамологии, и может быть использовано при изучении цито- морфологических, иммунохимических и других вопросов функции и биохимии гемолимфы насекомых.

Цель изобретения - предотвращение слипания гемоцитов и удлинение срока их хранения.

Пример. Вариант 1. Берут 0,05М раствор полиэтиленгликоля в О,15 М растворе хлористого натрия и закапывают его на предметные стекла по одной (0,03 мп) , по две (г 0,06 мл) , по три (л 0,09 мл) ,по четыре (, ) капли и к ним добавляют по капле гемолимфы насекомых, например гeмoли 4lы гусениц большой- или малой пчелиных огневок.

Полученную смесь перемешивают стеклянной палочкой и наблюдают под

микроскопом за поведением гемоцитов. ,.,

Вариант 2. В мерный 50-миллилитро- вый цилиндр вливают 20 мл 0,08 М раствора натрия серноватистокислого пятиводного. Туда же вливают 0,5 мп . 0,29 М раствора трилона Б и 2,5 мп 0,35 М раствора стрептоцида растворимого и до 40,-миллилитровой отмет-. ки добавляют дистиллированной воды. Получают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятиводного, 0,02 стрептоцида растворимого и 0,003 М трилона Б. Раствор закапывают на предметные стекла по одной, две, три и четыре капли, что составляет около 0,03-0,12 мл, и к ним добавляют по одной капле гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют. В готовой смеси с гемолимфой концентрация нат4 ОС о:

ч

4

314967

рия серноватнстокислого пятиводного составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого - 0,01-0,016 М и трилона Б - 0,0015-0,0024 М.

Вариант 3, В мерньй 50-миллилит- ровьй цилиндр вливают 20 мл 0,08 М раствора натрия сериоватистокислого иятиводного. Туда же вливают 0,92 мл 0,29 М раствора трилона Б и 5 мл

0,35 М раствора стрептоцида растворимого и до 40-миллилитровой отметки доливают дистиллированной водой. Получают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятивод-; ного, 0,04 М стрентоцида растворимого и 0,007 М трилона Б, Раствор закапывают на предметные стекла по одной, две, три и капли, что составляет около 0,03-0, 12 -ш, к ним добавляют по одной кайле.гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют. В/готовой смеси с гемолим(1)ой концентрация натрия серноватистокислого пятиводного состав- ляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого - 0,02-0,03 М и трилона Б - 0,0035-0,006 М.

Вариант 4. В мерный 50-миллилитро- вый циливдр вливают 20 ,мл 0,08 М

раствора натрия серноватистокислого пятиводного. Туда же вливают 0,92 мл 0,29 М раствора трилона Б и 10.мл 0,35 М раствора стрептоцида растворимого и до 40-миллилитровой отметки доливают дистиллированной водой. Полу чают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятиводного, 0,09 М стрептоцида растворимого и 0,007 М трилона Б. Раствор закапыва- ют на предметные стекла по одной, две, три и четыре капли, что составляет -около 0,03-0,12 ьш, и к ним добавляют .по одной капле гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют. В готовой смеси с гемолимфой концентрация натрия серноватистокислого пятивод- ного составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого - 0,045-0,07 М и трилона Б - 0,0035-0,006

Вариант 5, В стеклянную колбу вливают 20 мл 0,08 М раствора натрия серноватистокислого пятиводного. Туд же вливают 10 мл О,29.раствора трило,на Б и 10 мл 0,35 М раствора стрептоцида растворимо.го. Получают раствор, содержащий 0,04 М натрия серноватистокислого пятиводного, 0,09 М стрептоцида растворимого и 0,07 М трилона Б. Раствор закапывают на предметное стекло по одной, две, три и четьфе капли, что составляет около 0,03-0,12 мл, и к ним добавляют .по одной капле гемолимфы насекомых, перемешивают стеклянной палочкой и микроскопируют. Б готовой смеси с гемолимфой концентрация натрия серноватистокислого пятиводного составляет 0,02-0,03 М, стрептоцида растворимого - 0,045-0,07 М и трилона Б - 0,035-0,06 М.

Данные опытов по изучению влияния в вариантах приведенных растворов на слипание гемоцитов гемолимфы гусениц большой пчелиной огневки приведены 3 таблице.

Из приведенных в таблице данных видно, что полиэтиленгликоль в физиологическом растворе, приготовленный и использованный по известной методике, к сохранению гемоцитов совершенно не пригоден, так как дает 100% их слипание, в то время, как предложенный консервант в каждом варианте применения снижает процент слипания гемоцнтов не свыше 30%, что делает возможным их изучение под микроскопом.

Формула изобретения

Способ консервирования гемолимфы насекомых путем ее введения в раствор консерванта, содержащего натрий серноватистокислый пятиводный в концентрации 0,02-3,0 М, отличающийся тем, что, с целью предотвращения слипания гемоцитов и удлинения срока их хранения, перед введением гемолимфы в консервант вводят стрептоцид растворимый в концентрации 0,02-0,26 М и этилендиаминтетра- уксусной кислоты динатриевой соли дигидрата в концентрации О,003-0,22М а введение гемолимфы в раствор консерванта осуществляют в соотношении (1:1)-(1:4).

Изобретение относится к биологии ,в частности, к энтомологии, и может быть использовано при цитоморфологических, иммунохимических и других вопросах функции и биохимии гемолимфы насекомых. Цель способа - удлинение срока хранения гемоцитов и предотвращение их слипания - достигается путем добавления к известному консерванту гемолимфы насекомых, содержащему раствор натрия серноватистокислого пятиводного (0,02-3,0 М), стрептоцида растворимого (0,02-0,26 М) и трилона Б (этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевой соли дигидрата (0,03-0,22 М), после чего в консервант вводят гемолимфу насекомого в соотношении (1:1)-(4:1). 1 табл.