Способ электрофоретического разделения белков гемолимфы насекомых в полиакриламидном геле Советский патент 1991 года по МПК A01N1/00 

Изобретение относится к биохимии и иммунологии насекомых.

Целью является улучшение качества разделения белковых фракций гемолимфы насекомых.

Пример. Электрофоретическое разделение белков проводят в полиакриламид- ном геле при помощи аппарата для электрофореза Модель-69 фирмы Реа- нал ВНР, Будапешт, трис-глициновом буфере, рН 8,3 при напряжении 250-500 В, силе тока 5 мА на колонку, продолжительности 1,5-2 ч в интервале температур 3-5°С. На каждую колонку наносят 0,1 мл гемолимфы, разбавленной 0%-ным раствором сахарозы.

Берут гемолимфу насекомых гусеницы большой пчелиной огневки и к ней добавляют раствор натрия серноватистокислого пяти- водного с таким расчетом, чтобы в смеси концентрация его составила 0,005; 0,01; 0,02; 0,04; и 0,05 М. Приготовленную гемолимфу подвергают электрофоретическому

исследованию е полиакриламидном геле по общепринятым методикам сразу же или после длительного хранения в холодильнике при +4°С до -17°С. например 75 и больше дней.

В таблице приведены результаты исследований старших гусениц большой огневки.

Самые высокие результаты достигают, когда содержание натрия серноватистокислого пятиводного в гемолимфе составляет от 0,01 до 0,04 М, так как фракции белков выражены четко, а общее их число достигает 16.

Берут гемолимфу насекомых по прототипу (таблица 1, п.6), к ней добавляют несколько кристаллов фенилтиомочевины, перемешивают стеклянной палочкой, так как она труднорастворима, и так обработанную гемолиму подвергают электрофоретическому исследованию. Получают в среднем 12 недостаточно четко разделенных белковых фракций.

О

ю о о VI о

Берут нативную гемолимфу насекомых (таблица 1, п,7) и подвергают ее электрофо- ретическому исследованию белков. Получают в среднем 12 довольно четко выраженных белковых фракций.

Таким образом, химические добавки натрия серноватистокислого пятиводного в гемолимфу насекомых улучшают качество электрофоретического разделения белковых фракций гемолимфы.

Формула изобретения Способ электрофоретического разделения белков гемолимфы насекомых в полиэк- риламидном геле, включающий добавление в гемолимфу реагентов для предотвращения механизации, отличающийся тем. что, с целью улучшения качества разделения белковых фракций, в качестве реагента используют натрий серноватистокислый пя- тиводный, причем его концентрация в смеси с гемолимфой составляет от 0,01 до 0,04 М.

Изобретение относится к биохимии и иммунологии насекомых. Целью является улучшение качества разделения белковых фракций гемолимфы насекомых. Для этого в качестве реагента, предотвращающего ме- ланизацию, используют натрий серновати- стокислый пятиводный. причем его концентрация в смеси с гемолимфой составляет 0,01-0,04 М. Применение данного реагента увеличивает число разделяемых белковых фракций и улучшает качество их разделения. 1 табл.

№

Варианты опытов

Гемолимфа, со держащая 0,005 М натрия серноватисто- кислого пятиводного Гемолимфа.содержащая 0,01 М натрия серноватисто- кислого пятиводного Гемолимфа.содержащая 0,02 М натрия серноватисто- кислого пятиводного Гемолимфа.содержащая 0,04 М натрия серноватисто- кислого пятиводного Гемолимфа.содержащая 0,05 М натрия серноватисто- кислого пятиводного Гемолимфа.содержащая фе- нилтиомочевину по прототипу Нативная гемолимфа (без хим. добавок)

Количество белковых фракций

Качество разделения фракций

12 16 16 16 -15

12 12

Фракции разделены удовлетворительно

Фракции разделены четко

Фракции разделены четко

Фракции разделены менее четко

Фракции разделены довольно четко