Состав для криоконсервации артерий и способ подготовки их к трансплантации Советский патент 1989 года по МПК A01N1/02 

Изобретение относится к медицине, в частности к трансплантологии.

Цель изобретения - сохранение ат- рвмбогенных свойств сосудистой стенки артерий.

Состав готовится простым смешиванием компонентов.

пример 1. Берут компоненты, г/л: однозамещенный фосфат калия 1,0; двузамещенный фосфат калия 3,6; бикарбонат натрия 0,82; цитрат натрия 0,28; сукцинат натрия 0,48; маннитол 38,0; диметилсульфоксид (ДМСО) 5,0; альбумин сьшоротки человека

20,0; селенит натрия вода дистиллированная до 1 л.

При консерватщи данным ра твором отек сосудов составил в среднем 14,4+ 4%, что меньше прототипа (46+6%).

Пример 2. Берут компоненты, г/л: однозамещенный фосфат калия 1.04; двузамещенный фосфат калия 4,0; бикарбонат натрия 0,86; цитрат натрия 0,32; сукцинат натрия 0,52; ман- нитол 40,0; диметилсульфоксид 15.0; альбумин сыворотки человека 50,0; селенит натрия 4-10 ; вода дистиллиро

ванная до 1 л.

При консервации данным раствором отек сосудов составил в среднем 20+4%.

Способ осуществляют следующим образом.

Удаленную артерию промывают в, солевом изоосмотическом растворе любого состава для удаления крови и сгустков фибрина и после этого помещают в предлагаемый раствор, содержащий 5% ДМСО. После этого в раствор постепенно добавляют дополнительное количество ДМСО, повышая его концентрацию с 5 до 15% в течение 25-30 мин и выдерживают в этом растворе еще 25-30 мин при комнатной температуре. Затем артерию извлекают, помещают в контейнер для замораживания, охлаждают со скоростью 1-З С/мин до -50 - -70 С и хранят при этой темпера:Туре, При необходимости контейнер с артерией извлекают, отогревают в водяной бане при комнатной температуре и переносят в раствор, содержащий-5% ДМСО и дополнительно содержащий 30-40 г/л маннитола, для удаления избытка ДМСО из стенки сосуда при минимальных осмотических перепадах на клеточной мембране. В этом растворе вьщерживают

15

15% в течение 30 мин. После выдерживания артерии в растворе епдё 30 мин их извлекают, помещают в контейнер и замораживают со скоростью 1-3 С/мин до -50 С. Артерии хранят при этой температуре от 5 дней до 1 мес.После отогрева в водяной бане до комнатной температуры артерии извлекают из кон тейнера, погружают на 20-30 мин в ра створ , содержащий все компоненты раствора для криоконсервации; концентрация ДМСО в нем составляла 5%, а содержание маннитола увеличивают на 30-40 г/л (до 80 г/л). Затем артерии пересаживают крысам-реципиентам заменив криоконсервированным трансплантатом соответствующий сегмент брюшной аорты. При пересадке используют микрохирургическую технику и ат равматический шовный материал 10/0. У всех животных после пересадки трансплантат нормально функционировал весь период наблюдения (до 4 мес.), обеспечивая полноценное кровоснабжение нижней половины туловища животного. При осмотре через 4 мес все 5 трансплантатов были проходимы, внешне выглядели нормально без признаков стенозирования или аневризматическог расширения. На резрезе в просвете ар терии никаких тромбов не бьшо обнару жено. Интима была гладкая и блестящая. Предлагаемый состав для криоконсервации и способ подготовки артерий к трансплантации обеспечивают надежное длительное хранение донорских артерий в течение длительного времени с сохранением атромбогенных свойств сосудистой стенки. После пе ресадки этих артерий в 100% случаев трансплантат нормаль но функционирует длительное время. При пересадке артерий, криоконсервированных по спо20

25

30

35

40

.20-30 мин и переносят артерию в изо- дз собу-прототипу, функция трансплантаосмотический солевой раствор любого состава; при этом артерия готова к пересадке.

Пример 1. У5 крыс удаляют сегмент брюшной аорты ниже места отхожденйя почечных артерий длиной 0,6-0,9 см, отмывают от крови и сгустков в солевом изоосмотическом растворе (НИИТиИО-2) и помещают в пр едла- гаемый раствор, содержащий 5% ДМСО, 20 г/л альбумина, сьшоротки человека и 3-. селенита натрия. После этого постепенно увеличивают концентрацию ДМСО в этом растворе с 5 до

50

55

та длительно сохраниялась лишь в 40% Способ обеспечивает сохранение атромбогенных свойств интимы сосудов и длительное функционирование пересаженных артерий.

Формула изобретения

1. Состав для криоконсервации артерий, содержащий одно- и двузамещен- ный фосфат калия, бикарбонат натрия, цитрат натрия, сукцинат натрия, мен- нитол и дистиллированную воду, отличающийся тем, что, с

5

10

15

02314

15% в течение 30 мин. После выдерживания артерии в растворе епдё 30 мин их извлекают, помещают в контейнер и замораживают со скоростью 1-3 С/мин до -50 С. Артерии хранят при этой температуре от 5 дней до 1 мес.После отогрева в водяной бане до комнатной температуры артерии извлекают из контейнера, погружают на 20-30 мин в раствор , содержащий все компоненты раствора для криоконсервации; концентрация ДМСО в нем составляла 5%, а содержание маннитола увеличивают на 30-40 г/л (до 80 г/л). Затем артерии пересаживают крысам-реципиентам. заменив криоконсервированным трансплантатом соответствующий сегмент брюшной аорты. При пересадке используют микрохирургическую технику и ат- равматический шовный материал 10/0. У всех животных после пересадки трансплантат нормально функционировал весь период наблюдения (до 4 мес.), обеспечивая полноценное кровоснабжение нижней половины туловища животного. При осмотре через 4 мес все 5 трансплантатов были проходимы, внешне выглядели нормально без признаков стенозирования или аневризматического расширения. На резрезе в просвете ар- терии никаких тромбов не бьшо обнаружено. Интима была гладкая и блестящая. Предлагаемый состав для криоконсервации и способ подготовки артерий к трансплантации обеспечивают надежное длительное хранение донорских артерий в течение длительного времени с сохранением атромбогенных свойств сосудистой стенки. После пе ресадки этих артерий в 100% случаев трансплантат нормаль но функционирует длительное время. При пересадке артерий, криоконсервированных по спо20

25

30

35

40

собу-прототипу, функция транспланта

та длительно сохраниялась лишь в 40%. Способ обеспечивает сохранение атромбогенных свойств интимы сосудов и длительное функционирование пересаженных артерий.

Формула изобретения

1. Состав для криоконсервации артерий, содержащий одно- и двузамещен- ный фосфат калия, бикарбонат натрия, цитрат натрия, сукцинат натрия, мен- нитол и дистиллированную воду, отличающийся тем, что, с

целью сохранения атромб свойств сосудистой стенки он дополнительно содержит сульфоксид, альбумин сыво человека и селенит натрия дующих соотношениях компо

Однозамещенный фосфат

калия

Двузамещенный фосфат

калия

Бикарбонат натрия

Цитрат натрия

Сукцинат натрия

Маннитол

Диметип сульфоксид

Альбумин сыворотки

крови человека

Селенит натрия

Дистиллированная

вода

,

2

0

5

2. Способ подготовки артерий к трансплантации, включающий выдерживание артерий в консервирующем растворе, замораживание, хранение в замороженном состоянии и оттаивание до комнатной температуры, отличающийся тем, что, с целью увеличения сохранности функциональной полноценности за счет сохранения атромбогенных свойств сосудистой стенки артерий, после погружения в консервирующий раствор, концентрацию диметилсульфоксида доводят до 5-15 г/л в течение 25-30 мин, затем инкубируют 25-30 мин, замораживают

со скоростью 1 - оттаивания дополнидо (-50)-(-70) С 3 С/мин, а после тельно вносят в раствор 30-40 г/л маннитола и погружают в него артерию на 20-30 мин.

Изобретение относится к медицине , в частности, к трансплантологии. Целью изобретения является сохранение атромбогенных свойств сосудистой стенки артерии и увеличение сохранности за счет этого ее функциональной полноценности при длительном хранении в замороженном состоянии. В качестве раствора для криоконсервации используют солевой раствор, содержащий (в г/л) однозамещенный фосфат калия 1,0-1,04

двузамещенный фосфат калия 3,6-4,0

бикарбонат натрия 0,82-0,86

цитрат натрия 0,28-0,32

сукцинат натрия 0,48-0,52

маннитол 0,38-0,40 и воду дистиллированную до 1 л, в который дополнительно вводят диметилсульфоксид в концентрации 5-15 г/л, альбумин сыворотки крови человека в концентрации 20-50 г/л и селенит натрия в концентрации 2^.10^-5 - 4^.10^-5 г/л. После помещения артерии в раствор концентрацию диметилсульфоксида постепенно увеличивают от 5 до 15 г/л в течение 25-30 мин, после чего артерию выдерживают в растворе еще 25-30 мин и замораживают до (-50)-(-70)°С со скоростью 1-3°С/мин. После отогрева артерии из замороженного состояния ее погружают на 20-30 мин. в консервирующий раствор, дополнительно содержащий 30-40 г/л маннитола. После этого артерия готова к пересадке. Изобретение позволит создать запас полноценных сосудистых трансплантатов, хранящихся в замороженном состоянии, которые в нужный момент могут быть использованы хирургами для замены поврежденных артерий.