Способ диагностики реконвалесцентного бактерионосительства при дизентерии Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической практике дпя прогнозирования реконвалесцентного бактерионосительства при дизентерии.

Целью изобретения является ранняя диагностика и повьшение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

В период разгара болезни у больных обеих групп определяют содержание лизоцима в биоптатах слизистой оболочки дистального отдела толстой кшики. Параллельно проводят определение антилизоцимной активности выделенных шигелл.

Определение лизоцима в биоптатах слизистой оболочки дпстального отдела толстой кшчки, получетшого с помощью прибора для ректальной биопсии, производят по методике О.В. Бухарина.

Полученный биоптат помещают в гомогенизатор Потера, в KOTOpbrii добавляют 1,5-2 мл холодно1 о физиологического раствора. Гомогенизац)1Ю производят на холоде. Гомогенат помещают в холодипьник на 12-15 ч, после чего центрифугируют при 6000 об/мин в течение 20 мин. Супернатапт собирают в

о со

00

о

антилизоцимной активности возбудителя и лизоцима биоптатов слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки.

В таблице представлены допустимые интервалы значений антилизационной активности возбудителя и содержание лизрцима дистального отдела толстой

пробирку и ставят на холод на 12 - 15 ч. На 0,1 m взвеси Micrococcus lysodeicticus, -приготовленного заранее на трисбеферном растворе (М-0,2 ; г рН - 6,2), .доведенном до оптической плотности 0,400 (ФЭК-М; кювета № 2; .зеленьй светофильтр). В контроле вместо исследуемого гомогента исноЛьзуют

физиологическ1 й раствор. Через 30 мин Ю кишки, при которых прогнозируется инкубации в термостате при заме- реконвалесцентное бактерионоситель- ряют оптическую плотность контрольных ства. и.опытных проб. Расчет производят по калибровочной таблице и выражают в мкг/мл. Одновременно определяют содержание белка по Лоури, Результаты выражают в мкг/1 г белка.

Определение ант илизоцимной активности возбудителя проводится также по методике О.В. Бухарина. Суточную агаровую культуру шигелл, выделенную у больного, им шедуют на 1,5%-ном мясопептонпом агаре, содержащем лизо- цим в концентрациях от 3 мкг/мл до 15 мкг/мп. Чашки со средой подсушивают 10-15 мин в стерильном боксе, стандартной петлей (у)- 3 мм) наносят культуру исследуемых шигелл и инкубируют 24 .4 при 37°С. Выросшие микроколонии шигелл в течение 30 мин уби- 30 вают парами хлороформа, после чего запивают вторым слоем 0,7%-ного питательного агара (3 мл), содержащего О, 1 мл одномшшиардной Взвеси ипдика- -торной на лизоцим культуры, и ипку биру1от 24 ч в термостате при 37°С. Результаты учитьгоаются по наличию роста Micrococcus lysodeictius вокруг культуры, инактивировавшей определен- нуто концентрацию лизоцима, внесенного 40 зоцима в биоптате слизистой оболочки в питат пьную среду,дистального отдела толстой кишси.

Количественная оценка антилизоци-при которых формируется реконвалёсмной активности проводится по макси-центное бактерионосительство,

мальной концентращ1и лизоцима в ере-Если анализационная активность

де кнактированкого данной культурой 45 возбудителя и содержание лизоцима в шигелл, я выражается в мк: .биоптате слизистой оболочки дистальИзучение данных по антршизоцимнойного отдела толстой кишки соответстактивности шигелл и лизоцима биопта-вует указанным интервалам, то прогногов слизистой оболочки дистальногозируется реконвалесцентное бактериоотдела толстой кишки средствами тео- 0 носительство,

рии вероятности, квантовой теорииПример. У больного Е.,

стационарных состояний и динамической 50 лет, выделена из кала Sh. Newcast- теории регулирования позволило раз-1е. Антилизоцимная активность возбуработать модель связанной системы ли- дителя 10 мкг/мл. Содержание лизоци- зоцим хозяина - антилизоцитная актив- ма в биоптате слизистой оболочки дис- ность возбудителя и предложить способ тального отдела толстой кигаки прогнозирования реконвалесцентного6., 12 мкг/1 г.

бактерионосительства при дизентерииИз приведенного примера, видно, что

по допустимым интервалам значенийполученные значения лизоцима и антиЭтими группами значений исчерпьша- ются возможные области изменения ак- тилизоцимной активности шигелл и лиантилизоцимной активности возбудителя и лизоцима биоптатов слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки.

В таблице представлены допустимые интервалы значений антилизационной активности возбудителя и содержание лизрцима дистального отдела толстой

зоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишси.

Этими группами значений исчерпьша- ются возможные области изменения ак- тилизоцимной активности шигелл и лилизоцимной активности возбудителя входят в интервалы допустимых изменений лизодима и антштизоцимной активности, характерйзуюище формирование реконвалосцентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократным выделением возбудителя при бактериологическом обследовании больного в период реконвалесцендии. Пример 2. У больной С.,

20лет, выделена из кала Sh. Newcastle Антилизодимная активность возбудител 4 мкг/мл. Содержание лизодима в биоп тате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки 8,75 мкг/1 г.

Из приведенного примера видно, что полученные значения антилизоцим- ной активности возбудителя и содер- жание лизодима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки не входят в указанные интервалы изменений антилизодимной активности возбудителя и лизоцима биптатов , и, следовательно, прогнозируется (Выздоровление. При бактериологичес- ком обследовании больного в период реконвалесдендии возбудитель не выделен .

Пример 3. У больной Я., 23 лет, выделена из кала Sh. Flexneri. Антилизоцимная активность возбудителя 8 мкг/мл. Содержание лизодима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки 7,01 мкг/1 г

Из приведенного примера видно, НТО полученные значения актилизодим- ной активности возбудителя, и содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки входят в интервалы допустимых изменений лизодима и антилизоцимной активности,, характеризующие формирование реконвалесцентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократным выделением возбудителя при бак:териологическом обследовании больного в период реконвалес- денции..

П р и м е р 4. У больной Р.,

21года, из кала выделена Sh. Flexneri 2-2а. Антилизоцимная активность

13 мкг/мл. Содержание лизодима в биоптате 4,82 мкг/г.

Из приведенного примера видно, что полученные значения антилизодимной активности и лизоцима в биоптате слизистой дистального отдела толстой кишки не входят в указанные интервалы

.

5009366

изменений антипизодимной активности возбудителя и лизодима биптатов, следовательно, прогнозируется выздоровление. Данный прогноз подтвержден трехкратными отрицательными результатами бактериологического обследования через 3, 7, 12 дней после клинического выздоровления.

10Пример 5. У больной Н.,

48 лет, выделена из кала Sh. Flexne- ri. Антилизодимная активность возбудителя 9 мкг/нп. Содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дис15 тального отдела толстой кишки 7,13 мкг/1 г.

Из приведенного примера видно, что полученные значения антипизоцим- ной активности возбудителя и содержа20- ние лизодима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки входят в интервалы допустимых изменений лизоцима и антилизоцтамиой активности, характериззтощие формиро25 вание реконвалентного бактерионосительства. Данньй прогноз подтвержден неоднократным выделением возбудителя при бактериологическом обследовании больного в период реконвалесденции.

30 Пример 6. У больного К., 18 лет, из капа выделена Sh. Flexneri 1-1в, антилизоцимная активность возбудителя 13 мкг/мл. Содержание лизодима в биоптате слизистой дистального отдела толстой кишки 4,96 мкг/г.

Из приведенного примера видно, что полученные значения антилизодимной активности и лизоцима в биопта- те слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки входят в указанные интервалы изменений антилизо- ДИМКОЙ активности возбудителя, и лизо- дима биоптатов, характеризующие фор45 мирование реконвалесцентного бактерионосительства. Данньй прогноз подтвержден неоднократным выделением возбудителя при бактериологическом обследовании больного в периоде ре-

50 конвалесденции (через 6, 12 и 15 дн. после клинического выздоровления). Пример 7. У Оольного В., 32 года из кала выделена Sh. Flexne- ri 2-2а. Антилизоцимная активность

55 возбудителя 6 мкг/мл. Содержание

лизоцима в биоптате слизистой дистального отдела толстой кишки 7,94 мкг/г.

Из приведенного примера видно, что полученные значения входят в ука35

40

занные интервалы изменений антилизо- цимной активности и лизоцима биопта- тов, характеризуюпдае формирование ре- конвалесцентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократным выделением возбудителя нри бактериологическом обследовании в период реконвалесценции (через 6, 12 и 15 дн. после клинггческого выздоров- ления).

Было обследовано 78 больных острой дизентерией, диагноз был подтвержден клинически и бактериолох ически.

Реконвалесцентное бактерионосительство было спрогнозировано- у 1I больных. Фактически реконвалесцетное бактерионосительство сформировалось у 12 больных, что подтверждено поло- жнтельньмй результатами бактериологического исследования.

Таким-образом, эф(1)ективность предлагаемого метода составляет 91,6%.

Опыты на белых мышах позволили установить, что длительность выделения шигелл зависит от. уровня антилизоцим- ной активности. 1)1таммы с высоким уровнем антшгизоцнм ной активности (9 мкг/мп) выделялись из органов ин- фицироваьшых мып1ей в средд ем на 7 - 10 дн. бодь1пе, по сравнению со штаммами с низкой антилиэоцимной активностью (3 мкг/мл).

5

Q

5 о

0

Использование предлагаемого спосо- .ба позволяет с высокой точностью (в 9),6% случаев) прогнозировать вероятность формирования реконвалесцентного бактерионосительства. Кроме того, предлагаемый способ позволяет эффективно прогнозировать реконвалесцент- ное-бактерионосительство на ранних этапах развития заболевания, что позволяет осуществлять индивидуальный подход к лечению больных с целью сокращения числа бактерионосителей. Со-., крастение числа бактерионосителей позволяет уменьшить опасность распространения инфекции среди людей.

Формула изо. бретения

Способ диагностики реконвалесцентного бактерионосительства при дизентерии путем определения антилквоцим- ной активности шигелл, вьщеленных у больного, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики и повышения точности способа, дополнительно определяют содержание лизо- . цима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки и при значениях первого показателя. 6,0- 13,0 мкг и второго - 4,96-7,94 мкг/1 г белка диагностируют реконвалесцентное бактерионосительство.

Изобретение относится к медицине , в частности, к инфекционным болезням. Целью изобретения является ранняя диагностика и повышение точности способа. Для этого в период разгара болезни определяют содержание лизоцима в биоптате слизистой оболочки дистального отдела толстой кишки и антилизоцимную активность шигелл, выделенных у больного по методикам О.В. Бухарина. Результаты содержания лизоцимы выражают в мкг/г белка, а количественную антилизоцимную активность оценивают по максимальной концентрации лизоцима в среде, инактивированного культурой шигелл, и выражают в мкг. При значении первого показателя 4,96-7,94 мкг/г белка и второго 6,0-13,0 мкг диагностируют реконвалесцентное бактерионосительство. Использование способа позволяет с высокой точностью (91,6%) диагностировать реконвалесцентное бактерионосительство на ранних этапах развития заболевания. 2 табл.