Способ определения резидентного стафилококкового бактерионосительства Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может использоваться для выявления резидентного стафилококкового бактерионосительства в хирургических отделениях и больницах, родильных домах, при массовом обследовании населения в экологическом мониторинге.

Стафилококкам принадлежит большая роль в этиологической структуре инфекций. Основным источником гнойной стафилококковой инфекции являются резидентные бак- терионосители. Для профилактики стафилококковой инфекции весьма важным является своевременное выявление бактерионосителей этого типа с последующей санацией. Кроме того, стало известно, что

формирование высокого уровня резидентного стафилокок ового бактерионосительства происходит в результате техногенного загрязнения окружающей среды. Поэтому этот показатель может служить микробиологическим тестом экологического мониторинга.

Учитывая сказанное, очевидна необходимость эффективного способа диагностики резидентного стафилококкового бактерионосительства

Известен бактериологический способ выявления носителей стафилококков. Он требует больших затрат питательных сред, лабораторной посуды, рабочего времени (72 ч), что ограничивает его использование в прак О

00

о о

тике, особенно при необходимости единовременного обследования большого количества лиц. Кроме того, этот способ не позволяет дифференцировать резидентных (постоянных) и транзиторных (временных) бактерионосителей, тогда как именно первый тип представляет наибольшую эпидемиологическую значимость. Что- бы выявить резидентных бактерионосителей, необходимо не менее, чем трехкратное бактериологческое обследование с временным интервалом. Т.е. способ имеет низкую точность диагностики резидентного стафилококкового бактерионосительства.

Известен способ выявления стафилококковых бактерионосителей, заключающийся в определении у выделенных стафилококков уровня антилизоцимной активности. В нем по наличию у золотистого стафилококка антилизоцимной активности, а у эпидермального по превышению ее уровня 6 мкг, дифференцируют носитель- ские штаммы от контаминирующей микрофлоры. Способ основан на наличии у резидентных штаммов особого свойства - антилизоцимной активности, то есть способности к ингибиции лизоцима клеток, что приводит к длительному сохранению микроорганизмов в клетках хозяина. Этот способ позволяет проводить однократное обследование при диагностике резидентного стафилококкового бактерионосительства.

Однако известный способ имеет недостаточную точность диагностики резидентского стафилококкового бактерионосительства. Указанный способ не выявляет резидентные штаммы золотистого стафилококка, обладающие антилизоцимной активностью в 1-2 мкг, Кроме того, затруднена дифференцировка штаммов на резидентные и транзиторные эпидермального стафилококка, ошбладающие антилизоцимной активностью 4 и 5 мкг. Следствием является то, что с помощью этого способа часть резидентных бактерионосителей не выявляется.

Целью изоберетения является повышение точности способа диагностики резидентного стафилококкового бактерионосительства.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе диагностики, включающем посев исследуемого материала на пи- тательные среды с последующим выделением и идентификацией чистых культур, у выделенных штаммов стафилококков определяют антииммуноглобулиновую активность, по ее наличию диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство. Резидентное бактерионосительство диагностируется в том случае, если штамм золотистого стафилококка обладает

антииммуноглобулиновой активностью 170 мг% и выше, а штамм эпидермального стафилококка - 280 мг% и выше.

Новыми признаками заявляемого способа являются:

определяют антииммуноглобулиновую

активность у выделенных штаммов стафилококков;

по ее величине у золотистого стафилококка 170 мг% и выше диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство;

по ее величине у эпидермального стафилококка 280 мг% и выше диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство.

Наличие первого нового признака в заявляемом способе позволяет выявить новый, более информативный признак резидентного стафилококкового бактерионосительства, что в итоге позволяет повысить точность диагностики данного бактерионосительства в диапазоне значений определяющего показателя, расширяя чувствительность способа на нижней границе показателя.

Второй новый признак позволяет снизить порог чувствительности диагностики бактерионосительства до 170 мг%, в результате чего повышается точность диагностики

бактерионосительства при наличии штамма золотистого стафилококка, и, практически, выявляются резидентные бактерионосители среди обследуемых лиц.

Третий новый признак позволяет снизить порог чувствительности диагностики бактерионосительства до 280 мг%, что позволяет в итоге повысить точность диагностики бактерионосительства при наличии штамма эпидермального стафилококка и,

практически, выявить всех бактерионосителей данного класса из обследуемых лиц.

Эти признаки в известных технических решениях не обнаружены.

Обнаружена статистически достоверная зависимость между способностью стафилококков длительно персистировать в макроорганизме и его свойством деградировать иммуноглобулины в биологических жидкостях.

Применение заявляемых признаков

предполагает определение антииммуноглобулиновой активности стафилококков, являющейся тестом персистирующих характеристик штамма и позволяющей дифференцировать резидентное и транзи- торное бактерионосительство.

Т.о.заявляемое техническое решение соответствует критерию существенные отличия, а совокупность его известных и отли- чительных признаков обеспечивает получение нового положительного эффекта - повышение точности способа. Предложение данного способа стало возможным после того, как авторами была выявлена с помощью экспериментально разработанной методики антииммуноглобулиновая активность стафилококков, т.е. их способность нейтрализовать иммуноглобулины различных классов в биологических жидкостях. Высказано предположение о возможности роли этого свойства в перси- стирующей способности микроорганизма, где антииммуноглобулиновая активность представляет фактор, целенаправленно нейтрализующий защитные механизмы макроорганизма. Это послужило основанием для определения антииммуноглобулино- вой активности наряду с другими характеристиками, в частности, антилизо- цимной активностью штаммов стафилококков, выделенных у 560 обследованных лиц с целью выявления бактерионосителей. Анализ полученных данных выявил прямую зависимость между величинами анти- лизоцимной и антииммуноглобулиновой G и М активностями. Причем, наиболее четко такая зависимость прослеживалась в отношении антииммуноглобулиновой G активности микроба (табл. 1).

Выяснилось, что штаммы стафилококков, обладающие высокой антилизоцимной активностью, а, следовательно, и персисти- рующими свойствами, обладают и высокой антииммуноглобулиновой активностью. Но при этом высокая антииммуноглобулиновая активность обнаруживалась и в части случаев, когда у штаммов эпидермального стафилококка антилизоцимная активность была 4 мкг или 5 мкг, а у золотистого стафилококка - 0 мкг или 2 мкг. Было решено провести трехкратное бактериологическое обследование группы лиц, у которых со слизистой носа выделены эпидермальные стафилококки с антилизоцимной активностью 4,5,6 мкг и золотистые стафилококки с антилизоцимной активностью 0, 2, 3 мкг.

Трехкратное обследование показало, что штаммы резидентных бактерионосителей могут обладать различной антилизоцимной активностью - 7, 6, 5, реже 4 мкг - эпидермальный стафилококк, 3, 2, 0 мкг - золотистый стафилококк (табл. 2). То есть штаммы эпидермального стафилококка, имеющие 4 и 5 кг, а золотистого - 0; 2 мкг

не могут быть однозначно определены как транзиторные.

Антииммуноглобулиновая активность в этом отношении оказалась более информативным показателем, так как выделенные у бактерионосителей резидентного типа штаммы эподермального стафилококка обладали антииммуноглобулиновой активностью от 289,24 ±5,7 мг% до 352,41 ±11,4

мг%, золотистого - от 178,28 ± 6,4 до

190,31,7,5 мг%. Транзиторные штаммы

эпидермального стафилококка имели антииммуноглобулиновую активность 112,86±

±6,8-198,31 4,7 мг%, а транзиторные

штаммы золотистого стафилококка - 98,64 ± 9,1-148,41 ± 5,8 мг%.

Сделан вывод, что антииммуноглобулиновая активность является более информативным показателем персистирующих

свойств микроба, нежели антилизоцимная, и может использоваться в качестве диагностического теста резидентного бактерионосительства. Это было положено в основу заявляемого способа.

Способ осуществляется следующим образом. У обследованных со слизистой носа при посеве на питательные среды выделяют чистые культуры золотистых эпидермаль- ных стафилококков бактериологическим

способом с определением общепринятых свойств - плазмокоагулазы, гемолизина, ле- цитовителазы и др. Вместе с тем, у этих штаммов определяют антииммуноглобули- новую активность. Для этого берут суточную

взвесь стафилококков, стандартизированную на ФЭК-М (Д-0,50, кювета М 2, зеленый светофльтр). Именно такая плотность взвеси была экспериментально подобрана как выявляющая максимальное проявление антииммуноглобулиновой активности микроба. 0,1 мг этой взвеси вносят в пробирку, куда добавляют 0,1 мл сыворотки крови с известным количеством Ig, определенных по методике Манчини. Пробирку со смесью

ставят в термостат на инкубацию при 37°С в течение 30 минут. По истечение времени смесь центрифугируют при 6000 об/мин в течение 10 минут и супернатант используют для повторного определения уровня иммуноглобулинов с учетом предварительного разведения в 2 раза. Затем высчитывают разницу между уровнями иммуноглобулинов в контрольной и опытных пробах сыворотки и по ней судят об

антииммуноглобулиновой активности микроба, Если уровень антииммуноглобулиновой активности золотистого стафилококка оказывается 170 мг% и выше, а эпидермального стафилококка - 280 мг% и выше, то

считают эти штаммы резидентными и диагностируют резидентное стафилококковое бактерионосительство,

П р и м е р 1. При обследовании на стафилококковое бактерионосительство у больного П.А.Д. был выделен эпидермаль- ный стафилококк, обладающий АЛА - 5 мкг, A IgG 283,4 мг%. Было предположено резидентное бактерионосительство. Многократные повторные посевы идентичного стафилококка подтвердили резидентный характер бактерионосительства. При этом титр бактериальной обсемененности возрастал.

Пример 2. У больного М.С.К. выделенный эпидермальный стафилококк имел следующие характеристики АЛА - 5 мкг, A IgG

-156,2 мг%.

Повторные посевы не дали аналогичного результата.

Пример 3. У больного Д.И.И. выделен золотистый стафилококк - АЛА - 0 мкг, A IgG

-171,2 мг%.

Предположение резидентного бактерионосительства подтвердилось трехкратным высевом идентичных стафилококков (фаго- тип 3 С). Титр бактериальной обсемененности возрастал до 10 -10 КОЕ/тампон,

Пример 4. У больного К.И.О. выделенный штамм золотистого стафилококка обладал АЛА-2 мкг, A IgG - 121,3мг%. При повторных высевах идентичные стафилококки не выявлялись, отрицая трзнзиторное бактерионосительство, как и было предположено по тесту A IgG.

Сравнивая точность диагностики заявляемого способа и прототипа примем за 100% количество резидентных бактерионосителей, выявленных трехкратным бактериологическим способом при обследовании 560 человек.

Трехкратное бактериологическое обследование выявило 198 резидентных бактерионосителей - 100%. Способом прототипа удалось выявить 124 бактерионосителя - 63,2%, заявляемым способом - 195 чел. или 98,4%, что на 35,2% больше нежели способом прототипа.

Следовательно заявляемый способ позволяет повысить точность способа диагностики резидентного бактерионосительства на 35,2 %, что позволяет проводить своевременную и целенаправленную санацию бактерионосителей. Кроме того, заявляемый способ обладает дополнительными преимуществами - он более прост, чем способ прототипа. Упрощение проявляется в том, что

антииммуноглобулиновую активность различных уровней можно регистрировать на одной чашке Петри, т.е. одновременно исследовать до 45 штаммов с минимальными затратами материала и рабочей силы. Определение же антилизоцимной активности по способу прототипа гораздо более громоздко, так как предполагает использование нескольких чашей Петри с питательным эгаром, включающим различную концентрацию лизоцима с целью выявления различных уровней антилизоцимной активности исследуемых штаммов.

Таким образом, использование способа позволит повысить точность диагностики

резидентного стафилококкового бактерионосительства, а, следовательно, и достичь положительного эффекта.

Формула изобретения

1. Способ определения резидентного стафилококкового бактерионосительства путем посева исследуемого материала на питательные среды с последующим выделением чистых культур, их идентификацией и

тестированием, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, выделенные чистые культуры тестируют по антииммуноглобулиновой активности и по ее величине определяют резидентное стафилококковое бактерионосительство.

2. Способ по п.1,отличающийся тем, что при значении антииммуноглобулиновой активности 170 мг% и выше определяют резидентное бактерионосительство,

обусловленное Staphylococcus aureus, а при 280 мг% и выше - Staphylococcus epidermidis.

Таблица 1

Использование: медицинская микробиология. Сущность изобретения: резидентное стафилококковое бактерионосительство определяют путем посева исследуемого материала на питательные среды с. последующим выделением чистых культур, их идентификацией и тестированием. Выделенные чистые культуры тестируют по антииммунглобулиновой активности и по ее величине определяют резидентное стафилококковое бактерионосительство. При значении антииммуноглобулиновой активности 170 мг% и выше определяют резидентное бактерионосительство, обусловленное Staphylococcus aureus а при 280 мг% и выше Staphylococcus epidermidis. 2 табл.

Таблица 2