Способ выявления возбудителя при гнойно-воспалительных процессах Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/04 

09

ел

00

; Изобретение относится к медицине и| может быть нспользовпно при бакте™ риолопг еской диагностике гнойно- в спалительньпс заболеваний,

Цель изобретения - повышение точности дифференциации этиологически ,, з|€ачимых микроорганизмор, от микроор- г низмов-ассоциантов

Пример 1 г. При бактериологическом исследовании мочи у больной М1 тодом количественньк разведений о шаружены колонии двух типов s колота первого типа в количестве 1) микр„кл /мл мо.чи, колонии второ гэ типа в количестве 5 Ю микрокл,/мл М5ЧИ. Низкие показатели бактериурии

; позволяют подтвердит1з участие выд лгннык микроорганизмов в развитии 1елонефрита. Через 18 ч ка скошен- JM агаре получают чистые культуры и:) колоний обоих типов„ При микроско

п;фовании обе культуры грамотрица- Т1шьныв палочки. На этом -этапе устаэвления этиологически значимого М1кроорганизма прш 1еня1от метод опре- Д ления у культур антклизоцимной ак TJiBHocTH, Из суточных arapoBbix куль- TTJfp исследуемых микробов первого и второго типов готовят взвеси на фос буфере рН 6j2 с оп ической тщетностью 0,05j определяемой на Ф1:|( К-56М К 1 мл пробы иссле- Д51 емой г-гикробной взвеси добавляют ПСi 1 мл раствора лизоцима Б концентрации 2.0 мкг/мл, так что конечная кснцентрация лизоцш-ia в пробе состав- л;:ет 10 мкг/мл., Смесь выдерживают 1 |ч при и затем центрифугируют 6000 об/мин 5 мин и отделяют над- о$адочн то ядадкость. К О,,6 мл надоса дсИной ясидкости из ка)вдой пробы до- бг4вляют по 0,4 мл фосфатного буфера и по 2 мл взвес-и т-шдикаторной культуры микрококка, предварительно под- ввергнутого холодовому шоку. Пробы пс мещают в термостат выдерживают 10 мин при 37 С и затем определяют оптическую плотность По калибровоч- кривой определяют остаточный ли- зйцим в пробах..

В пробе культуры первого типа кон- щШтрация остаточного лизоцима 7 мкг, тфе, ее антилизоцимная активность равна 3 мкг (), а в про- б« культуры второго типа остаточньм Л113ОЦИМ не определялсяJ т,е ее анти- Л1 зоцим{1ая активность равна 10 мкг„ Ш предлагаемому способу оценки вто-10

5

0

5

0

о

0

5

0

5

рая культура оценена как истинньй возбудитель пиелонефрита, первого типа - как представитель транзитор- ной микрофлорЫс На следующие -сутки при исследовании биохимических свойств культура второго типа рщентифицирова- на как Proteus wirabilis., а первого типа - как Escherichia coli,, В последующем этиологическая роль протея под- тверл дена повторностью его выделения из мочи больной и в РИГА с парными сьгооротками, а контаминация мочр эшерихиями доказана отрицательным результатом РПГА и отсутствием вьщеле- ния R,coli при трехкратно - бактерио логическом исследовании г-,очн,

И р и м е р 2„ Из ожоговой раны больного при первом бактериологическом исследовании вы челены два ассоци- анта вульгарный протей с антилизо™ цимной активностью tO мкг и концентрацией в 10 кое/мл и кишечная палочка с антилизоцимной активностью 1 мкг и концентрацией 10 кое/мп. При последующем трехкратном бактериологическом исследовании с интервалом в 5 дней протей определен во всех исследованиях. Концентрация кишечной палочки в нсследз емсм матери™ але быстро уменьшалась и при третьем - исследовании этот вид бактерий не определялся. Следовательно, возбудителем данного гноймо-воспЕлительного процесса является штамм }зульгарного протея с

II р и м е р 3„ Из ожоговой раны больного при бактериологическом мс следовании выделены два ассоцяанта мирабильный протей с антилизоцимной активностью 9 мкг и клебсиелла пийв- монии с антилизоцимной активностью 3 мкг При, последзтощих бактериологи- ческигс исследованиях концентрация клебсиелл у меньшается, В то же время бактериальная обсемененность очага протеем нарастает достигнув к тре- тьемз дню 10 кое/мл по сравнению с исходной величиной 10 кое/мл. Это подтв€фждает этиологическуто роль мирабельного протея.

Сравнительная характеристика ме тодов выявления истинного возбудителя гнойно-воспалительных заболеваний представлена в таблице,

Способ может быть использован для дифференциации возбудителя.от существующей микрофлоры при стафилококковом бактерионосительстве.

1Д49587

Приме р4. У больного сахарным диабетом со слизистой носа при посеве на желточно-солевой агар методом серийных разведений обнаружены колонии двух типов: перв ого типа - круглые, вьтуклые с палевым пигментом и аре- олом лецитовйтеллазной активности в количестве Ю кое/тампон, второго типа - круглые беспигментныё, без ареола лецитовителлазы в количестве 10 кое/тампон. Через. 18 ч инкубации на скошенном агаре получены чистые культуры первого и второго типов. Из суточных агаровых культур готовят взвеси на фосфатном буфере (рН 6,2) с оптической плотностью 0,05. 1 мл каждой пробы микробной взвеси смешивают с 1 мл раствора лизоцима в коикультура первого типа идентифициро вана как золотистьй стафилококк, а второго типа - как эпидермальный ст g филококк. Таким образом, культура первого типа (золотистый стафилокок расценена как истинный, резидентный носительский штамм, а эпидермальный стафилококк - как представитель по10 сторонней микрофлоры. Резидентный х рактер бактерионосительства золотис того стафилококка был подтвержден многократными повторными высевами с слизистой носа идентичных стафилоко

15 ков (фаготип 3 С), при этом титр ба териальной обсемененности возрастал достигая кое/тампон.

Таким образом, использование спо соба позволит повысить точность диф

„„,. низиолит повысить ТОЧНПГТЬ гтмН

7., :. оз5.„,„ел,

в термостате 1 ч и затем отделяют надосадочную жидкость, содержащую неинактивированный лизоцим, центрифугированием в течение 5 мин при 6000 об/мин. К 0,6 мл надосадочной жидкости из каждой пробы добавляют по 0,4 мл фосфатного буфера и по 2 мл взвеси индикаторной культуры микрококка (оптической плотности 1,2). После инкубации в течение 10 мин при 37 С определяют оптическую плотность проб на ФЭК-56М в кювете шириной 5,09 мм при зеленом светофильтре. Остаточный лизоцим в пробах определяют по калибровочной кривой.

По результатам исследования обнаружено, что концентрация остаточного лизоцима в пробе культуры первого типа 6 мкг, т.е. антилизоцимная активность культуры первого типа 4 мкг, а в пробе культуры второго типа концентрация остаточного лизоцима 7 мкг, т.е. ее антилизоцимная активность 3 мкг. При изучении свойств вьщелен-.

очередь позволит выбрать эффек х ивные лечебные препараты и ускорить выздо ровление больных, кроме того, исполь зование способа позволит отдифферен25 цировать возбудитель от сопутствующей микрофлоры при стафилококковом бактерионосительстве, что позволит проводить .целенаправленную санацию бактерионосителей.

30

Формула изобретения

Способ выявления возбудителя при гнойно-воспалительных процессах путем

g просева исследуемого материала на пи тательные среды с последующим вьщеле нием и идентификацией чистых культур отличающийся тем, что, с целью повышения точности дифференци4Q ации этиологически значимых микроорганизмов от микроорганизмов-ассоци- антов, у вьщеленных грамотрицатель- ных микроорганизмов определяют анти- лизоцимную активность и выявляют возньтх KvnT,,.,rr, f -1.1ен-, лизоцимную активность и выявляют в

ZMP ° ° : 45 бУДИтель при уровне антапизоцимной эробная ферментация маннита и др.) активности 6 мкг и выше.

культура первого типа идентифициро- вана как золотистьй стафилококк, а второго типа - как эпидермальный ста- g филококк. Таким образом, культура первого типа (золотистый стафилококк) расценена как истинный, резидентный, носительский штамм, а эпидермальный стафилококк - как представитель по0 сторонней микрофлоры. Резидентный характер бактерионосительства золотистого стафилококка был подтвержден многократными повторными высевами со слизистой носа идентичных стафилококков (фаготип 3 С), при этом титр бактериальной обсемененности возрастал, достигая кое/тампон.

Таким образом, использование способа позволит повысить точность . низиолит повысить ТОЧНПГТЬ гтмН

--- оз5.„,„ел,

--- оз5.„,„ел,

очередь позволит выбрать эффек х ивные лечебные препараты и ускорить выздо- ровление больных, кроме того, использование способа позволит отдифферен25 цировать возбудитель от сопутствующей микрофлоры при стафилококковом бактерионосительстве, что позволит проводить .целенаправленную санацию бактерионосителей.

30

Формула изобретения

Способ выявления возбудителя при гнойно-воспалительных процессах путем

g просева исследуемого материала на питательные среды с последующим вьщеле- нием и идентификацией чистых культур, отличающийся тем, что, с целью повышения точности дифференциQ ации этиологически значимых микроорганизмов от микроорганизмов-ассоци- антов, у вьщеленных грамотрицатель- ных микроорганизмов определяют анти- лизоцимную активность и выявляют воз

лизоцимную активность и выявляют в

5 бУДИтель при уровне антапизоцимной активности 6 мкг и выше.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при бактериологической диагностике гнойно-воспалительных заболеваний.- Цель изобретения - повышение точное- ти дифференциации зтиологически значимых микроорганизмов от микроорга- низмов-ассоциантов. Для осуществления способа исследуемый материал высевают на питательные среды, вьщеляют чистые культуры. Отбирают грамотри- цательные микроорганизмы и определяют у них антКлизоцимную активность. Если уровень последней достигает 6 мкг и вьше, данный микроорганизм оценивают как возбудитель.: Далее идентифицируют культуры, определяют вид микроорганизма и назначают соответст- вующрв лечение заболевания. 1 табл. а (Л с