Способ диагностики рака легких Советский патент 1989 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к иммунорадио- логически.м исследованиям и может быть использовано в качестве диагностического теста при обследовании больных с подозрением на рак легкого.

Цель изобретения - упрощение способа и повышение точности диагностики рака легкого.

Пример. 10 мл венозной крови больного вносят в пробирку объемом 20 см с 5%-ным раствором Na2 ЭДТА. Соотношение крови и 1 а2ЭДТА равно 9:1. Пробирку оставляют на 1 ч при комнатной температуре для оседания эритроцитов. Затем пробирку центрифугируют 10 мин при 200 g, из надосадочной жидкости забирают примерно 4/5 плазмы с тромбоцитами и переносят ее в другую пробирку, которую центрифугируют 10 мин при 200 g. Надосадочную жидкость, содержащую только тромбоциты, переносят в пластиковую пробирку и центрифугируют 15 мин при 1600 g. Осадок тромбоцитов ресуспен- дируют в 1 мл среды RPM1 1640 (G1BCO), содержащей 5% телячьей эмбриональной сыворотки, 1% L-глютамина, 1% буфера HEPES и по 100 ед/мл пенициллина и стрептомицина (среда А). Количество тромбоцитов подсчитывают в камере Горяева при помощи микроскопирования, после чего суспензию тромбоцитов разводят средой А до концентрации 100Х10 /мл. При помощи последовательных разведений готовят суспензии с концентрациями тромбоцитов 50-10, 2510 12.10 10, 5-10, 2,5-10, 1,2-10, 0,610 0,6-10 0,3-10 Н 0,15-Kf/мл.

ОТ

О О 4

В качестве клеток-мишеней (КМ) используют монослойную культуру перевиваемой линии аденокарциномы легкого человека (АКЛ).

Для получения меченых ° Сг КМ накануне опыта б-Ю клеток АКЛ инкубируют в 0,5 мл среды 199, обогащенной 10% сыворотки крупного рогатого скота (среда Б), содержанлей 75-100 мкКи Na2 Cr04, периодически встряхивая пробирку. Через 40- 60 мин инкубации клетки трижды отмывают в среде Б по 10 мин при 200 g и засевают по 2X10 клеток в 0,2 мл среды А в плоскодонные 96-луночные мпкропластины. На следующий день, перед добавлением тромбоцитов, КМ дважды отмывают средой Б. Тромбоциты в 0,2 мл среды А из каждого разведения до.бавляют к КМ, в результате получены следующие соотнощения тромбоцит: КМ 1000:1, 500:1, 250:1, 125:1, 100:1, 50:1, 25:1, 12:1, 6:1, 3:1 и 1,5:1. Через 18 ч инкубации при 37°С в атмосфере 5% СОо из каждой лунки отбирают всю жидкость для определения радиоактивности в у-спект- рометре. Процент лизировапных КМ оценивают по формуле:

% лизиса КМ 11 X100%,

где о (опыт)-выход изотопа из

лизированных КМ;

с (спонтанный вы- - высвобождение изо- ход)топа интактными

КМ;

п (полное включе- полное включение ние)изотопа в КМ.

Процент цитолиза также может быть определен методом окраски клеток трипа- новым синим, однако этот метод используется только для суспензионных культур и не- приемле.м для монослойной культуры клеток АКЛ.

Используя указанную формулу подсчета % цитолиза и подставляя значения количеств импульсов в минуту, определяют процент лизированных КМ в каждом из соотношений (табл. 1).

В табл. 1 приведены данные цитолити- ческой активности тромбоцитов больного раком легкого против клеток АКЛ (растит- ровка соотношений эффектор: КМ).

Таким образом, в приведенном примере, во-первых, максимальный уровень цитолиза КМ (29,8%) отмечен при соотношении эффектор КМ, равном 50:1. Это соотношение признано оптимальным и используется во всех дальнейших экспериментах; во-вторых, 0 уровень цитолиза превышает дискриминационную величину на 19,8%. Это позволяет диагностировать рак легкого у данного больного, что было впоследствии подтверждено при морфологическом исследовании биопта- г та из опухоли.

В табл. 2 дано сравнение цитотоксич- ности тромбоцитов периферической крови больных раком легкого и обследованных контрольной группы против клеток АКЛ.

В результате проведенных исследований 0 установлено, что метод определения цито- токсичности тромбоцитов периферической крови обследуемых против клеток АКЛ технически более прост в выполнепии, не требует сложной и дорогостоящей аппаратуры для бронхологического исследования и брон- хоальвеолярного лаважа.

Исследование цитотоксической активности тромбоцитов в качестве диагностического теста при раке легкого составляет новизну изобретения.

Формула изооретения

Способ диагностики рака легких путем радиоизотопного исследования в биологических жидкостях, отличающийся тем, что, 5 целью упрощения и повышения точности способа, исследование проводят с тромбоцитами крови, добавляют их к мечены.м клеткам перерываемой линии аденокарциномы легкого в соотношении (25-75) :1, инкубируют, определяют процент лизированных

0

клеток и при значении этого показателя больше или равном диагностируют рак легкого.

Изобретение относится к иммунорадиологическим исследованиям и может быть использовано в качестве диагностического теста при обследовании больных с подозрением на рак легкого. Цель изобретения - упрощение и повышение точности диагностики. Иммунорадиологически определяется цитотоксическая активность тромбоцитов. Тромбоциты периферической крови больных раком легкого осуществляют специфическое цитотоксическое действие против клеток перевиваемой линии рака легкого АКЛ, причем диагностическая точность равна 89,5%, тогда как тромбоциты больных хроническими воспалительными заболеваниями легких и тромбоциты здоровых лиц не способны к осуществлению подобного литического эффекта, т.е. специфичность метода равна 100%. У прототипа специфичность метода равна 71,7%, а диагностическая точность - 88,7%. Технически предлагаемый способ более прост в выполнении и менее травматичен для обследуемого. Таким образом, предлагаемый способ диагностики рака легкого может быть предложен в качестве одного из диагностических тестов при комплексном обследовании больных с подозрением на рак легкого. 2 табл.

1000:1500:1

3,82,5.

Таблица 1

23,2±8,9 4 3+2 7

ч- , J - , /

Таблица2

19

,001

21