СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭХИНОКОККОЗА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно иммунологической диагностике эхинококкоза.

Известен способ диагностики путем введения внутрикожно эхинококкового антигена с последующим измерением зоны инфильтрации (реакция Казони) - 1. Однако этот метод малоинформативен. Кроме того, визуальный способ учета неизменно порождает субъективизм в оценке реакции, а самое главное, имеется опасность развития аллергических реакций, вплоть до анафилактического шока 2.

Известен также другой способ диагностики эхинококкоза с помощью реакции латекс-агглютинации (РЛА) 3. Однако метод очень трудоемок (ставится в течение 24 ч), необходимо брать большое количество крови (не менее 5 мл из вены), а главное, дает часто ложноположительные результаты при циррозе и раке печени, туберкулезе и других инфекциях.

Цель изобретения - повышение точности способа диагностики.

Эта цель достигается тем, что цитратную кровь инкубируют в течение 2-х ч с эхинококковой жидкостью (опыт), одновременно проводят также пробу без антигена (контроль). После этого определяют в надосадочной жидкости содержание калия.

При возрастании содержания калия в опытной пробе по отношению к контрольной пробе на 45% и более диагностируют эхинококкоз.

Данная совокупность существенных признаков в источниках информации не обнаружена, что подтверждает новизну изобретения.

Способ осуществляется следующим образом. В центрифужную пробирку помещают 0,02 мл эхинококковой жидкости, разведенной 5%-ным цитратом натрия. Для контроля в другую пробирку наливают 0,02 мл цитрата натрия. Добавляют в обе пробирки 0,08 мл крови из пальца, взятой микропипеткой, и содержимое перемешивают. Инкубируют 2 ч при 37^оС. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, содержимое перемешивают, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин, 0,5 мл надосадочной жидкости отсасывают и определяют содержание калия в жидкости. Диагностический коэффициент (ДК) рассчитывают по формуле
ДК = 100, где О - содержание калия в опытной пробе, К - содержание калия в контрольной пробе.

Способ испытан при эхинококкозе. В качестве антигена была использована эхинококковая жидкость.

П р и м е р 1. Больной Б., 39 лет. Диагноз: эхинококкоз печени, вызванный Echinococcus granulosis.

6.01.1989 г. у больного из пальца была взята кровь, 0,08 мл крови было помещено в пробирку с 0,02 мл эхинококковой жидкости на 5%-ном растворе лимоннокислого натрия (опыт), параллельно 0,08 мл крови поместили в пробирку с 0,02 мл лимоннокислого натрия (контроль). Пробирки помещали в термостат при 37^о С на 2 ч, затем в обе пробирки добавляли по 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, пробирки центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин, отсасывали 0,5 мл надосадочной жидкости и определяли там содержание калия на пламенном фотометре в соответствии с инструкцией к прибору.

Результаты: опытная проба - 53, контрольная проба - 25.

Показатель повреждения клеток (ППК)
ППК =100=112%
П р и м е р 2. Больная Д., 47 лет. Диагноз: хронический холецистит. 25.01.1989 г. из пальца была взята кровь. 0,08 мл крови было помещено в пробирку с 0,02 мл эхинококковой жидкости на 5%-ном цитрате натрия, то же количество поместили в пробирку с 0,02 мл 5%-ного цитрата натрия. Дальнейшее выполнение реакции проводили по выше описанной методике.

Результаты: опытная проба - 39, контрольная - 32.

ППК = 100=21,8%.

П р и м е р 3. Здоровый донор, 28 лет. 29.01.1989 г. из пальца была взята кровь и 0,08 мл крови было помещено в пробирку с 0,02 мл эхинококковой жидкости, то же количество крови поместили с 0,02 мл раствора цитрата натрия. Дальнейшее выполнение реакции проводили по выше описанной методике.

Результаты: опытная проба - 39, контрольная проба - 30.

ППК =100=30%.

В табл.1 представлены результаты определения повышенной чувствительности к эхинококковой жидкости с помощью предлагаемого метода.

При расчете доверительного интервала при Р = 0,05 установлено, что верхней гpаницей нормы чувствительности к эхинококковому антигену является 45%. При значениях, превышающих этот показатель, диагностируют эхинококкоз.

Как следует из табл. 2, предлагаемый метод (ППК) у 53 больных эхинококкозом в 100% случаев давал положительный результат, а известный способ (РЛА) у 53 больных в 3 случаях давал отрицательный результат, что составляет 5,7% . Среди больных с эхинококковыми заболеваниями, сходно протекающими с эхинококкозом (рак легкого, цирроз печени и др.), а также у здоровых лиц, предлагаемый способ (ППК) во всех случаях был ниже диагностического критерия, т.е. < чем 45, тогда как известный способ (РЛА) у двух больных с не эхинококковыми заболеваниями при отсутствии эхинококкоза давал положительный результат, что составило 5,7% от числа обследованных. Кроме того известный способ у одного здорового донора дал положительный результат, что составило 5% от числа обследованных (20 человек).

Предложенный способ отличается от прототипа тем, что:
1. По новизне - предложен новый иммунологический метод диагностики эхинококкоза в отличие от учета инфицированности по титру реакции агглютинации прототипа, основанный на иммунном повреждении клеток при контакте с антигеном (эхинококковой жидкостью).

2. По существенным отличиям показатель повреждения клеток отражает механизм специфического процесса взаимодействия антиген-антитело, которое происходит на поверхности клеток крови и сопровождается иммунным цитолизом клеток с выделением ионов калия. Известно, что концентрация калия в клетках крови в 20 раз превышает таковую в плазме 4, иммунохимическая реакция более точно определяет характер специфических изменений при эхинококкозе, чем реакция Латекс-агглютинации, дающая нередко ложноположительные или ложноотрицательные результаты.

3. По положительному эффекту - предложенный способ позволяет диагностировать наличие эхинококкоза на 6,2% точнее, чем прототип.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологической диагностике эхинококкоза. Цель - повышение точности способа. Для этого берут 0,02 мл эхинококковой жидкости и добавляют 0,08 мл крови, инкубируют 2 ч при 37°С и вносят 0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия. Далее центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин и в надосадочной жидкости определяют содержание калия, и при превышении содержания калия на 45% и более по сравнению с контролем, не содержащего антигена, диагностируют эхинококкоз. Способ позволяет на 6,2% точнее диагностировать эхинококкоз. 2 табл.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭХИНОКОККОЗА путем инкубации крови с эхинококовой жидкостью с последующей регистрацией иммунологической реакции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, регистрацию реакции ведут в надосадочной жидкости по содержанию калия и при превышении содержания калия на 45% и более по сравнению с контролем без антигена диагностируют эхинококкоз.