Способ определения содержания воды в образцах гемоглобина Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 G01N21/81 G01N25/58 

Изобретение может найти применение в медицинской промышленности и при научньтх исследованиях.

Цель изобретения - упрощение процесса.

Способ заключается в том, что раствор белка спектрофотометрируют на требуемой длине волны, затем по формуле или калибровочному графику рассчитывают истинную концентрацию белка в растворе (например, в процентах), Из веса образца и объема раствора рассчитьгоают его процентную концентрацию, . которая превышает концентрацию, определенную с помощью спектрофотометра, на вес входящей в состав кристаллов белка воды. Разность концентраций, отнесенная к концентрации по весу, представляет собой количество (г) воды, приходящееся на 1 г гемоглобина.

Предложенный способ характеризуется следующей последовательностью операций:

1)взятие навески белкового препарата;

2)растворение навески в измеренном объеме жидкости;

3)расчет концентрации (%) полученного раствора;

4)измерение поглощения исследуемого раствора на длине волны, соответствующей пику поглощения;

5)расчет истинной концентрации белка по формуле

ел ел

о

00

С(%)

-1

М 10

(1)

где А,- поглощение исследуемого раствора;

- молярный коэффициент поглощения раствора;

1 - длина пути света в растворе; М - вес моля белка; 6) расчет влажности исходного препарата белка по формуле

Св-Сс

(2)

где Cg - концентрация раствора по весу;CQ - концентрация раствора по

спектрофотометрическим данным .

Проиллюстрируем способ на примере кристаллического образца человеческого гемоглобина (Met НЪ) -12,3 мг НЬ растворяют D 10 мМ буферного раствора 0,05 М трис-НС1, рП 6,3. Концентрация полученного раствора составляет (из весовых данных) 0,123%,

Кислый Met Hb имеет пик поглощения при Л 630 им с 1 3,7 па 1 гем (мономер). Величина поглощения исследуемого раствора составляет:

,226; 0,222; 0,220; 0,223; ,2227.

Подставляя и формулу (I) значения ,2227, imM-61,795 г, см, 8 14,8 на тетрамер, получим

С 14,8-1-10 и,иУ15/о.

Содержание воды определяют по формуле (2)

0 123-0 0915 „ „,, ц ,,/ «

-0 Т23-О 256 г HjO/r белка,

Влажность того же образца, измеренная другими методами, составляет:

1)с реактивом Фишера- 0, 280 г белка;

2)гравиметрически - 0,228 белка.

Предлагаемый способ является более простым по сравнению с известным, поскольку не требует приготовления до- норнительных растворов и занимает значительно меньше времени.

Формула изобретения

Способ определения содержания воды в образцах гемоглобина, включающий взятие навески и оценку результатов, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, взятую навеску растворяют, измеряют спектро- фотометрическую концентрацию белка, а оценивают содержание воды по разности массовой и снектрофотометричес-, кой концентраций белка по отношению к массовой концентрации.

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано применено в медицинской промышленности. Цель изобретения - упрощение процесса определения содержания воды в образцах гемоглобина. Навеску гемоглобина растворяют, измеряют спектрометрическую концентрацию белка в полученном растворе и по разности массовой и спектрофотометрической концентраций, отнесенной к массовой концентрации, оценивают содержание воды в исходном образце гемоглобина.