Способ диагностики активного течения хронического гломерулонефрита Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики активного течения хронического гломерулонефрита (ХГН).

Способ осуществляют следующим образом.

Из крови больных хроническим гло- мерулонефритом (ХГН) выделяют моно- нуклеары (МК) центрифугированием гепаринизированной венозной крови (5 мл, содержащей 500 ЕД гепарина) в градиенте плотности фиколл-веро- графина (3 мл, плотность 1,077) при 800g. Выделенные МК в концентрации 5 -10 кл/мл инкубируют в пробирках в среде 199, дополненной Q% эмбриональной телячьей сыворотки и антибиотиками (100 ЕД пенициллина и

100 мкг стрептомицина в 1 культу- ральной взвеси) в присутствии Т-ак- тивина (1 ЕЛ/МЛ) в течение 6 ч при . 110 клеток инкубируют в 1 мл культуральной смеси в 1 пробирке. Через 3 и 6 ч культивирования опре .деляют количество ауто-РОК :и по приросту их содержания от 3 до 6 часов судят о количественном содержании пре-Т-клеток.

Тест ауторозеткообразования проводят следующим образом.

0,05 мл лимфоцитов () смешивают с равным объемом эмбриональной телячьей сыворотки, инкубируют смесь при °С в течение 30 мин и затем добавляют 0,05 мл 1%-ой взвеси троекратно отмытых аутологичных эритроцитов. Далее клеточную взвесь центриГч) Ю

ImsA

Q)yrnpyraT 5 мин при 200g и инку- бируат в течение ночи при , после чего произгюдят подсчет процентного содержания , Если прИ рост в интероале от 3- до b ч составляет не менее чем 3,5%, диагностируют активную фазу ХГИ«

П р и м е р 1. Больной В, у f2 лет {историй болезни ,А1б75), .поступил в нефро.поп-(ческоё отделение 25/IX- 85 г,°ПрИ1 поступлении жалоб не предъявлял. Из анамнеза выяснено, что а сентябре гЧЗУ г. при профилакти ческам.осмотре случайно выявлено по- 1вышение артериального даешения до 190/100 мм рт,ст,, в связи с чем был направлен на обследоза}№5е. При объективном иссле,пованми отмамалась уме- репная урофоматизация кожных покро - BOBj уБвличение сердца влепо на 2см |Латеральнее левой среднеключичной jiHHHH, Со сторог- ы других органой I патологии не отмечентз. При провед8 - , НИИ анализа крови регистрировалась умеренная анемия: эритроциты 3,3 У , гемоглобин 128 г/л, лейко питы ь,8.-10- /л, СОЭ 27 мм/ч.. Но- |Чев1 ш крови 1б,б ммель/л сгреактив- . ;гый белок- О j сиаловые кислоты 170 :ед фиб рмноген 5500 мг/я:, крлестерин 5,6 ммоль/л.. липспротеиды 6.900 мг./и белок крови; 68,8 г/я, в.белковых, фрс кция кг а я ь б у ми н ы 50 . г л об ули н ы о ,- 8%, lOA, /i- 15%, У 171, иммуноглобуям«ы: J - 8,5 мг/мл, А 2,0 иг/МП., М - 1,5 мг/мл, Крезтинин крови О.36 мгюль/л, клубочковая филь трация 12 мл/м.Ир оеабсорбция 95.. Отмечалась умеренная эритроцитурия до 18,5 ), суточная протеинурия до К.8 г. При исследова.нии почеч юго биоптата ycraf-toBnevi диагноз крони- ческого мезангиопролиферативиого гломерулонефрита с выраженным тубуло-- ингерстиц|.1аяьным компонентом. По кли нико лаборато{лчым данным впечатления об активности процесса не складывалось, на фазе выраженной почечной недостаточности определялись лишь уве ли.чения СОЭ и гювышчзнне уровня Фибриногена 3 то время как мочевой синд. ром был умеренным,, отсутствовала дис- протеинемия, и кроме того, артериальная гипертензия субъективно не ощу щались. Проведенное иммунологическое исследование по предложенному спосо бу выявило прирост ауто-PQK ч на 6j5, в связи с чем было начато ле

чение ХЛОрбуТИНОМ 12,5 МГ/СУТКИ,, 1рР;Днизолоном 20 мг/суТ; гепарином 20000 ЕД/сут, курантилом 400 мг/сут„ На фоне данной терапии отмечалась выраженная поло)1(ительная динамика всех показателей, к декабрю 1385 г. суточ ная протеинурия снизилась до 0,2 г, уровень мочевины до 8,6 имоль/л, кре.

атинина крови до О,}2 ммоль/л,, клубоч- ковая фи.льтрация повысилась до 76 мл/мин, канальцевая реабсорбция до Артериальное давление без гипотензивных препаратов стабилизирожалась на уровне 120/70 мм рт.ст., СОЭ нормализовалась. В дальнейшем на фоне поддерж.ивающей терапии акгив- ность нефритического процесса отсутствовала.

Таким образом, данные обследоваиил по предложенному способу позволили установить а тквность заболевания, сесмотря на то, что совокупность кли™ нико лаборатсрных данных не давала

достаточных оснований для этого Результаты .патог внетической терапмм полностью подтвердили даннь е иммунологического исследования, I

П р и м е р 2. Больная 3,, 26 лет . (история болезни A956 t), поступила в н.ефрологичес.|.ое отделение 29/XI- 8$ г. При поступлении жалоб не предъявляла. Больна с VIII-85 г.ког:)

о:

5

да на фоне острого респираторного заболезания появились макрогематурия, отеки на лице, ;голенях, повышение артериального давления до 160/10G м.м рт,ст. 8 октябре 1985 г, обследовалась а нефрологическом отделении изв.естным способом (прототипом), ус- та повлеки диаг. XPi, латентная фор-- ма, мesaнгиoг.:poлифepaтиsный вариант, активнай фаза. При объективном исследовании патологических изменений не отмечено Данные лабораторного исслё™ доаания; в общем анализе крови эрит-, роцитоа - 4, О -1 О /л,гемоглобин - 125 .г/лJ лейкоциты 6,3 , СОЭ 20 мм/ч, фибриноген 3)00 мг/л С-рё- aктив гый белок (., серомукоид 0,1G, мсчевина крови ммоль/л, сиало- вые кислоты .190 ед, белок крови 80,1 г/л, белковые фракции: альбумины 5о%, глобулины: с/,- 5, ck f , р i3%., У 18% иммуноглобулины; М -1,8 мг/мл, J - 10,0 мг/мл , А - , 1,3 МГ/МЛ. в мочевом осадке по пр,о бе Нечипоренко: лейкоциты i,25 1C/мл, эритроциты 23,. -ш, суточная прО

51

теинурия 0, г. Функциональная способность почек сохранена. Результаты иммунологического обследования; прироста ayTo-j OK от 3 до 6 ч не выяв- лено. Однако наличие острого нефритического синдрома в августе 1985 г., сохраняющееся увеличение СОЭ, послужили основанием для начала лечения хлорбутином 10 мг/сут, метипредом Тб мг/сут, гепарином 20000 ЕД/сут, , курэнтилом 00 мг/сут. На фоне данного лечения, продолжавшегося в течение одного месяца, отмечалось усиление эритроцитурии, появилась уратурия. Лечение было отменено, после чего эритроцитурия вернулась к исходному уровню и больная была выписана в относительно удовлетворительном состоянии. При контрольном осмотре через один месяц жалоб не предъявляла,в анализах крови и мочи патологических изменений не отмечено, функциональная способность почек и артериальное давление оставались нормальными, У боль- ной была неактивная фаза заболевания,

Определ еиие пре-Т-клеток по при- lliocTy ауто-РОК 3-6 ч обусловлено особенностями структуры циркулирующего лимфоцитов при ХГН, в маетности 5 отсутствием; среди НК субпопуляции пре- ауто-РОК и высоким содержанием самих ауто-РОК. Поскольку исходное количество ауто-РОК превышает Vix содержание как в 3 часовых, так и в 6-часовых культурах, то определить количество пре-Т

056

клеток удается только по приросту | ауто-РОК от 3 до 6 ч. Прирост ауто- РОК в данном случае обусловлен диф- ференцировкой лишенных Е-рецепторов предшественников Т-клеток в ауто- РОК.

У больных с активным течением ХГН содержание пре-Т-клеток превышает количество незрелых предшественников в группе больных с неактивным ХГИ(Р 0,01 и критерий Вилкинсона Маина- Уитни).

Точность предлагаемого способа приближается к 100. Способ-прототип обеспечивает точность не более 70%. TaKi iM образом, с помощью предлагаемого способа точность определения фаз активности процесса увеличивается в 1 , раза.

Формула изобретения

Способ диагностики активного течения хронического гломерулонефрита пу тем исследования крови, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повы шения томности способа,, из исследуе- мой крови выделяют лимфоциты, инкуби-- руют их в течение 3 и 6 ч в присутствии J-активина, далее определяют количество незрелых Т лимфоцитов и при их приросте свыше 3,5% к 6 ч диагностируют активное течение хронического гломерулонефрита.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики активного течения хронического гломерулонефрита. Цель изобретения - повышение точности способа. Из крови больных выделяют лимфоциты с помощью градиента плотности фикол-верографина, инкубируют их в присутствии Т-активина. Через 3 и 6 ч инкубации определяют количество ауто-розеткообразующих клеток (незрелая популяция Т-лимфоцитов) и при увеличении прироста этих клеток свыше 3,5% диагностируют активное течение хронического гломерулонефрита. В сравнении с прототипом предлагаемый способ обеспечивает повышение точности в 1,4 раза.