Способ оценки иммунного статуса Советский патент 1988 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, :а именно к исследованию состояния ;иммушюго статуса, и может быть ис- |пользовано в клинической иммунологии.

Целью изобретения является повышение точности оценки иммунного .ста- :туса за счет выявления ранних этапов дифференцировки Т-клеток, ; Способ осуществляют .следуюищм |образом,

Мононуклеары (МК) выделяют путем центрифугирования гепаринизированной венозной крови (5 мл, содержащей 500 Ед гепарина) в градиенте плотности фиколла-верографина (З мл, плотность 1,077) при 3000 об/мин, Выде- . ленные МК инкубируют в пробирках в среде 199, дополненной 10% телячьей сыворотки в отсутствии или присутствии Т-активина (1 мкг/мл) при 37°С. Количество клеток в одной пробирке составляет 1 млн в 1 мл культу- ральной смеси.

Прирост ауто-РОК обусловлен дифферен

Тест ауторозеткообразования прово- 25 рок-Е пре-Т-клеток.

:дят следую1 щм образом.

: 50 мкл лимфоцитов (-концентрация 5 млн/мл) смегшвают с равным объемом сыворотки человека АВ (IY ) группы

Пример 1. ферической крови пе тодами выявлено сод клеток в присутстви

Пример 1. Больной А, В периферической крови перечисленными методами выявлено содержание пре-Т- клеток в присутствии (пре-Т -клеток)

(предварительно инактивированной про- 30 отсутствии {пре-Т -клеток) Т-акти.греванием и адсорбированной бараньи|ки и человеческими эритроцитами), ин-. кубируют смесь при 4 С в .течение 30 мин и затем добавляют 50 мкл 1%- ной взвеси аутологичнь х эритропитов, ,

;Далее клеточную взвесь центрифугируют

5 мин при 1000 об/мин и инкубируют в течение ночи при 4 С, после чего производят подсчет ауто-РОК.

Т-клетки выделяют методом градиент-40 ративного заболевания. У больного

вина; пре-Т-клеток 12,5, пре-Т-кле- ток 18,5; пре-ауто-РОК 6; пре-ауто-РОК 9; ауто-РОК 1,5, Сравнивая доли содержания соответствующих клеток больного с нормой оцениваем, что доля пре-Т-клеток и пре-ауто-РОК увеличена, содержание ауто-РОК снижено. Состояние иммунного статуса характерно для лимфопролифеного центрифугирования Е-РОК. Для этого 0,5-мл МК периферической крови (концентрация И) млн/мл) смешивают с 0,1 мл 20%-ной взвеси эритроцитов барана (ЭБ) в присутствии 15% инактивированной и адсорбированной ЭБ сыворотки доноров АВ ( IV ) группы. Клеточную смесь инкубируют 15 мин при 37 С центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин и вновь инкубируют в те- чениё 1 ч при °С, Осадок осторожно ресуспендируют и центрифугируют в .; течение 20 мин.

При 1800 об/мин в градиенте плотности фиколла-верографина (d 1,077), Паходя1чиеся в. осадке с Т-клетками ЭБ после удаления над- осадочной жидкости лизирзпот гипоосмо- лярным DJOKOM. После этого оставшие .ся

лимфосаркома. Пример

2, Больной Б. В пери

45

50

55

ферической крови больного выявлены следующие содержания: пре-Т -клеток 0; пре-Т -клеток 0; пре-ауто-РОК 0; пре-ауто-РОК 0; ауто-РОК 25. Сравнивая долю содержания соответствующих клеток больного с нормой, оце ниваем, что содержание пре-Т-клеток пре-ауто-РОК снижено, а ауто-РОК повышено. Состояние иммунного статуса характерно для аутоиммунного заболевания. У больного ревматоидный артрит.

И р и м е р 3, Больной В. В пери ферической крови больного выявлены следующие содержание незрелых Т-кле- точных пред1иественников: пре-Т -клеТ-клетки троекратно отмывают средой

199 и доводят до концентрации

5 млн/мл. Инкубацию МК и сепарированных Т-клеток проводят в течение 18 ч указанным способом. Количество ауто- РОК определяют в исходных культурах через 1,5; 3; 6; 18 ч культивирования. По приросту ауто-РОК от О до

1,5 ч судят о количестве предшественников ауто-РОК. Дифференцировка Е ауто клеток в К ауто клетки у доноров - это Т-активин - зависимый процесс. Среднее количество преауто-РОК, определяемое как прирост ауто-РОК в культурах МК с Т-активи- ном, составляет у здоровых доноров 5,1 + 1,0% (п Н) и соответствует количеству Т-активин-чувствительных

пре-ауто-РОК,определяемому в культурах сепарированнь1Х Т-клеток 5,9 - 1,3% (п 16).

Прирост ауто-РОК на шести часах обусловлен дифференцировкой в ауторок-Е пре-Т-клеток.

Пример 1. Больной А, В периферической крови перечисленными методами выявлено содержание пре-Т- клеток в присутствии (пре-Т -клеток)

отсутствии {пре-Т -клеток) Т-актиративного заболевания. У больного

вина; пре-Т-клеток 12,5, пре-Т-кле- ток 18,5; пре-ауто-РОК 6; пре-ауто-РОК 9; ауто-РОК 1,5, Сравнивая доли содержания соответствующих клеток больного с нормой, оцениваем, что доля пре-Т-клеток и пре-ауто-РОК увеличена, содержание ауто-РОК снижено. Состояние иммунного статуса характерно для лимфопролифелимфосаркома. Пример

2, Больной Б. В пери

ферической крови больного выявлены следующие содержания: пре-Т -клеток 0; пре-Т -клеток 0; пре-ауто-РОК 0; пре-ауто-РОК 0; ауто-РОК 25. Сравнивая долю содержания соответствующих клеток больного с нормой, оцениваем, что содержание пре-Т-клеток и пре-ауто-РОК снижено, а ауто-РОК повышено. Состояние иммунного статуса характерно для аутоиммунного заболевания. У больного ревматоидный артрит.

И р и м е р 3, Больной В. В периферической крови больного выявлены следующие содержание незрелых Т-кле- точных пред1иественников: пре-Т -клеток 30,5; пре-Т -клеток 29; пре-аутй- ,5; пре-ауто-РОК П,5; ауто- РОК-8,5. Сравнивая полученные результаты с нормой, видим, что доля пре- Т-клеток увеличена, доля пре-ауто- РОК и ауто-РОК снижена. Состояние иммунного статуса характерно для лим- фопролиферативных заболеваний с аутоиммунным компонентом. У больного лим- фогранулематоз.

Сравнительные данные по точности оценки иммунного статуса по известному и предложенному способам приведены в таблице.

Из данных табли15-1 следует, что

.точность предложенного способа по

сравнению с известным повышена на

29,5-65%.

НИИ доли ауто-РОК по сравнению с нормой оценивают состояние иммунного статуса, характерное, для аутоиммунных заболеваний, при увеличении доли пре-Т-клеток, снижении доли пре-ауто- РОК и ауто-РОК по сравнению с нормой оценивают состояние иммунного стату,са, характерное для лимфопролифера- тивных заболеваний с аутоиммунным

.компонентом.

20

Изобретение относится к медици- ,не, а именно к исследованию иммунно- ГО статуса, и может быть использовано в клинической иммунологии различных заболеваний. Целью изобретения является повышение точности оценки иммунного статуса за счет выявления ранних этапов дифференцировки Т-кле- ток. Для этого мононуклеары обследуемых инкубируют в течение 18 ч в присутствии и в отсутствии Т-активина. По приросту количества ауторозетко- образуюттщх клеток определяют в интервалах: от О до 1,5 ч пре-ауто- РОК, от О до 6 или от 3 до 6 ч - пре-Т-клетки и от 6 до 18 ч - способность ауто-РОК к дифференцировке. По количеству и соотношению этих клеток, а также их чувствительности к Т-активину судят об иммунном ста- - тусе. 1 табл.

Формула изобретения

Способ оценки иммунного статуса путем определения субпопуляций Т-клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности оценки за счет выявления ранних этапов дифференцировки, определяют в присутствии Т-актйвина и без него содержание пре-Т-клеток, пре-аутОрозетко- образующих клеток (пре-ауто-РОК), ауторозеткообразующих клеток (ауто- РОК), устанавливают соотношение между показателями и при увеличении доли пре-Т-клеток, пре-ауто-РОК и уменьше- НИИ доли ауто-РОК по сравнению с нормой оценивают состояние иммунного статуса, характерное для лимфопроли- феративных заболеваний, при уменьше-- НИИ доли пре-Т-клеток , пре-аутО-РОК и неизменном или повышенном содержа

Лимфогранулематоз65

Хронический гломеруло- нефрит 56

Ревматоидный артрит 58,5

29

Примечание,

Точность оценки иммунного статуса рассчитывали как 100% - % зоны перекрытия показателей, оп- ределяекшх соответствующим способом.