Способ определения триптофана в спирторастворимых белках зерна Советский патент 1989 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции на качество зерна, а также к аналитической химии.

Цель изобретения - улучшение условий и повьш1ение производительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца.

На чертеже изображен калибровочный график„

Спирторастворимые белки являются преобладающей фракцией в белковом комплексе зерна злаковых растений и отличаются низким содержанием триптофана. Для селекционного улучшения этой фракции необходима разработка способов, ПОЗВОЛЯЮ1ЦИХ проводить массовую оценку генотипов на содержание триптофана в спирторастворимых белках.

Все имеющиеся способы определения триптофана требуют использования больших количеств белка (50-100 мг), что исключает их применение на ранних этапах селекции, когда как раз I необходимо отобрать генотипы с повы- шенным содержанием триптофана в запасных белках.

Способ осуществляют следующим образом.

Взвешенную на весах навеску белка (большая точность при этом не требуется, так как количество белка в растворе практически не влияет на полученный результат) помещают в стеклянную центрифужную пробирку, заливают 5 мл спиртового раствора щелочи, например, 0,1 н, КОН в 80%-ном этиловом спирте . Концентрация спирта может варьировать в пределах 60-90%, в част

иости спирторастворнмь1е белки кукурузы лучше всего растворимы в 80%-ном этнповом спирте. Концентрация щелочи может варьировать в пределах 0,1 - 2,0 н., но лучше брать нижний предел из-за экономии реактива. Дальнейшее снижение концентрации нежелательно из-за возможности нейтрализации щелочи углекислотой воздуха, т.е. - нозникают ограничения по времени проведения анализа. Содержимое пробирки тщательно перемешивают стеклянной пгшочкой до полного растворения белка (2-3 мин). Пробирки центрифугируют при 3000 об/мин для осветления раствора.

Раствор белка заливают в кювету и фотометрир пот при двух длинах волн в ультрафиолете, например 280 и 295 им. Контролем служит растворитель т.е. спиртовой раствор щелочи. Длины волн подбирают таким образом, чтобы они нахбдились в пределах спектров поглощения триптофана и тирозина. При этом наибольшая чувствительность достигается использованием длин волн, соответствующих максимумам поглощения этих аминокислот в спиртовом ра ствсзре щелочи.

Содержание триптофана в спиртора- створимом белке определяют по заранее составленному калибровочному графику, в котором по оси ординат отложены отношения экстинкций (например, Е , ° абс- цисс - содержание триптофана в белке в процентах или любых других еди- нииах. }1пя составления калибровочноч го графика используют набор препаратов белка с заранее известным и неодинаковым содержанием триптофана. Пример. Навеску белка (3 мг) помещают в центрифужную пробирку, заливают 5 мл спиртового раствора щелочи, тщательно перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения белка, центрифугируют S мин при 3000 об/мин. Затем полученный раствор фотометрируют дри 280 и 295 )М, При 280 нм получают величи-

ну экстинкций 0,604, а при 295 нм - 0,719. Находят отношение

- 54Т5 «.

Г-295 и,/1У

Содержание триптофана в белке находят по калибровочному графику (см. чертеж) или уравнению регрессии (оно составляет 0,224%).

Преимущества предлагаемого способа в сравнении с известным следую-- щие: повышается производительность труда аналитика в 3 раза и снижается себестоимость анализа на 50-60%;

улучшаются условия труда, так как отпадает необходимость использования концентрированной соляной кислоты;

снижается необходимое для анализа количество белка до 1-5 мг, что позволяет использовать способ на ранних этапах селекции.

Формула изобретения

Способ определения триптофана в спирторастворимьгк белках зерна,включающий взятие навески муки, растворение белка, отделение осадка, фото- метрирование и расчет содержания триптофана по калибровочному графику или равнению регрессии, отличающийся тем, что, с целью улучшения условий и повышения производительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца, растворение белка производят путем экстрагидрования его раствором 0,1-0,2 н. КОН в 60-90%-ном этиловом спирте, осадок отделяют центрифугированием, а фотометрирова- ние ведут при двух длинах волн, соответствующих областям максимального поглощения триптофана 280 нм и тирозина 295 нм, причем о содержании в белке судят по отношению полученных экстинкций, при этом чем больше величина указанного отношения, тем Bfcmie содержание триптофана в белках зерна.

0.87

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции на качество зерна, а также аналитической химии. Цель изобретения - улучшение условий и повышение производительности труда при одновременном снижении количества анализируемого образца. В навеске муки растворяют белок путем экстрагирования его раствором 0,1 - 2,0 н. КОН в 60 - 90%-ном этиловом спирте, осадок отделяет центрифугированием. Затем ведут фотометрирование при двух длинах волн, соответствующих областям максимального поглощения триптофана 280 нм и тирозина 295 нм, причем о содержании триптофана в белке судят по отношению полученных экстинкций по калибровочному графику или уравнению регрессии, при этом чем больше величина указанного отношения, тем выше содержание триптофана в белках зерна.

0.1

0.2

0.3 /о

mpunmoifJcfffQ