Способ количественного определения вещества, содержащего хлоралкильные группы Советский патент 1993 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относится к фармацевтической и аналитической химии, преимущественно к анализу промежуточных продуктов, получаемых при синтезе цито- статиков и может быть использовано как при синтезе, так и в контроле чистоты лекарственных препаратов.

Цель изобретения -разработка способа количественного определения БХФК, отличающегося возможностью селективного определения его в присутствии цитостатиков - производные БХЭА, а также увеличения точности определения.

Сущность способа заключается в образовании полиметинового красителя при нагревании БХФК с никотиновой кислотой и

гидроксидом калия. Продукт реакции имеет малиновую окраску (Дтах 510 нм), не изменяющуюся в течение нескольких суток; интенсивность окраски пропорциональна концентрации БХФК в исходном растворе. Наряду с полиметиновым красителем в растворе образуется глутаконовый альдегид (Дтах 365 нм), который также может использоваться для селективного количественного определения БХФК; интенсивность поглощения глутаконового альдегида в максимуме полосы поглощения в 6 раз больше интенсивности поглощения полиметинового красителя. Для других производных БХЭА появление окраски в условиях этой реакции не характерно. Поскольку цитостасосо

ю

д

со

00

тики, производные БХЭА, при нагревании с производными пиридина в щелочной среде не окрашиваются, а окраска БХФК, полученная в этих условиях, интенсивна и устойчива во времени, мы использовали это свойство для определения БХФК в присутствии цитостатиков как точного, селективного метода. Стабилизатором окрашивания является уксусная кислота. При необходимости, определение БХФК можно проводить при двух длинах волн - 365 и 510 нм.

По сравнению с известными способами определения веществ с хлоралкильными группами, данный способ позволяет надежно определять БХФК в чистом виде, в технических образцах, и что является совершенно новым - определять его как примесь в кор- тифене.тестифене и др. производных БХЭА.

Определение осуществляется следующим образом: навеску препарата (с точностью до 0,0002 г) растворяют в этилацетате. К аликвоте раствора анализируемого образца в пробирке прибавляют 20% раствор никотиновой кислоты в 25% растворе гидроксида калия и нагревают ее на кипящей водяной бане до испарения этилацета- та. После охлаждения в пробирку прибавляют уксусную кислоту, переносят смесь в мерную пробирку и доводят общий объем раствора этанолом до 5 мл. Измеряют поглощение окрашенного раствора не спектрофотометре при длине волны 510 нм или на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (490 нм) в кюветах 1 см, расчет концентрации проводят по калибровочному графику или по известной формуле с учетом поглощения стандартного раствора БХФК. При анализе чистого препарата измерение поглощения проводят при длине волны 365 или 510 нм.

Закон Бугера-Бера соблюдается в пределах от 0,1 до 3 мг/мл для прлиметиновых красителей (Яшах 510 нм) и для глутаконового альдегида $тах 365 нм) в пределах от 8 до 40 мкг/мл. Относительная ошибка метода составляют ±0,7%.

В примерах 1-3 были использованы образцы БХФ К серии 911089.

П р и м е р 1. Определение БХФК. Точную навеску 0,1280 г БХФК внесли в мерную колбу, вместимостью 25 мл, растворили в 10 мл эти л ацетата и довели этим же растворителем объем раствора в колбе до метки. Тщательно перемешали содержимое, перенесли в 3 пробирки по 0,25 мл полученного раствора, прибавили по 2 мл 20% раствора никотиновой кислоты в25% растворе гидроксида калия, пробирки нагрели на кипящей водяной бане до испарения этилацетата.

После охлаждения в пробирки внесли по 0,15 мл уксусной кислоты, содержимое пробирок перенесли в мерные пробирки на 10 мл и смыли остатки с помощью 40% этанола

в мерные пробирки. Общий объем довели этим же этанолом до 5 мл, перемещали и измеряли поглощение на спектрофотометре при 510 нм. В расчетах использовал и средние значения из 3 измерений. Параллельно

0 проводили определение со стандартным раствором БХФК с известной концентрацией. Раствором сравнения служила смесь реактивов, без исследуемого вещества, используемая для получения окрашенного

5 раствора БХФК.

Концентрацию анализируемого вещества Сх (в %) рассчитывали по формуле: DX Сет а 100

Lx

ст Р

0 где Dx - поглощение анализируемого раствора; равное 0,29;

DCT - поглощение стандартного раствора БХФК. 100% чистоты равное 0,30;

Сет - концентрация стандартного рас5 твора, равная 0,00025 г/мл;

а - разведение препаратов, равное 1:500;

р - навеска анализируемого препарата - 0,1260 г.

0 Расчет показал, что во взятой навеске содержится 95,87% БХФК.

П р и м е р 2. Определение БХФК по глутаконовому альдегиду. Навеску 0,0220 г БХФК внесли в мерную колбу вместимостью

5 25 мл, растворили в 10 мл этилацетата и довели этим же растворителем содержимое колбы до метки. После перемешивания отобрали по 1 мл раствора в 3 пробирки, прибавили по 2 мл 20% раствора никотиновой

0 кислоты в 25% растворе гидроксида калия и нагревали пробирки на кипящей водяной бане до испарения этилацетата. После охлаждения к содержимому пробирок прибавили по 0,15 мл уксусной кислоты и по 3 мл

$ 40% этанола, размещали и перенесли раствор в мерные колбы вместимостью 25 мл, довели объем содержимого колб до метки, перемешали и измерили поглощение раствора при 365 нм. В расчетах использовали

0 средние значения результатов из 3 измерений. Параллельно проводили определение со стандартным раствором БХФК. Раствором сравнения служила смесь реактивов без исследуемого вещества,5 Концентрацию анализируемого вещества (в %) рассчитывали по формуле, приведенной в примере 1.

Концентрация стандартного раствора равна 0,00004 г/мл;

Поглощение анализируемого раствора равно 0,59;

Поглощение стандартного раствора равно 0,69;

Разведение растворов равно 1:625;

Концентрация БХФК во взятой навеске равна 97,16%.

П р и м е р 3. Определение содержания БХФК в смеси с гормоноцитостатиком кор- тифеном. Навески 0,0204 г БХФК и 0,9520 г кортифена внесли в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворили в 20 мл этилаце- тата и довели этим же растворителем содержимое колбы до метки. После перемешивания в 3 пробирки из колбы отобрали по 1 мл полученного раствора, прибавили по 2 мл 20% раствора никотиновой кислоты в 25% растворе гидроксида калия и нагревали пробирки на кипящей водяной бане до испарения этилацетата. После охлаждения в пробирки внесли по 0,15 мл уксусной кислоты, перенесли содержимое в мерные пробирки на 10 мл и смыли остатки с помощью 40% этанола в мерные пробирки; общий объем довели этим же этанолом до 5 мл, перемешали и измерили поглощение на спектрофотометре при 510 нм. В расчетах использовали средние значения результатов из 3 измерений. Параллельно проводили определение со стандартным раствором БХФК с известной концентрацией. Раствором сравнения служила смесь реактивов без исследуемого вещества.

Содержание БХФК (в г) рассчитывали

по формуле: Хг °х Сст а

D,

ст

Поглощение анализируемого раствора равно 0,198;

Поглощение стандартного раствора равно 0,20;

Концентрация стандартного раствора равна 0,00016 г/мл;

Разведение равно 1:125;

Содержание БХФК равно 0,0198 г, что соответствует 97,05% от взятой навески.

Результаты определения БХФК, полученные в примерах 1-3, имеют хорошую сходимость, что свидетельствует о правильности полученных результатов.

Формула изобретения Способ количественного определения вещества, содержащего хлоралкильные группы, заключающийся в том, что готовят пробу образца, добавляют к пробе производное пиридина в водном растворе щелочи, нагревают полученный раствор, охлаждают его и фотометрируют, отличающийся тем, что, с целью возможности селективного определения п-бис- 8-хлорэ- тил)-аминофенилуксусной кислоты в присутствии цитостатиков - производных п-бис- 5- хлорэтил)-амина, а также увеличения точности определения, пробу готовят, растворяя анализируемое вещество в этилацетате, добавляют в качестве производного пиридина 20%-ный раствор никотиновой кислоты в 25%-ном растворе гидроксида калия до концентрации никотиновой кислоты в фотомет- рируемом растворе 8%, а полученный раствор нагревают на кипящей водяной бане до удаления этилацетата, затем добавляют уксусную кислоту и этанол до концентрации 3% уксусной кислоты и 20- 25% этанола в фотометрируемом растворе и фотбметрируют раствор при 510 нм.

Сущность: для количественного определения п-бис-(|3-хлорэтил)-аминофенилуксус- ной кислоты в присутствии цитоста- тиков-производных п-бис- З-хлорэтил}- амина готовят пробу путем растворения анализируемого вещества в этилацетате, добавляют к полученному раствору 20%- ный раствор никотиновой кислоты в 25%- ном водном растворе гидроксида калия до концентрации никотиновой кислоты в фото- метрируемом растворе 8%. Полученный раствор нагревают на кипящей водяной бане до удаления этилацетата, охлаждают раствор, добавляют уксусную кислоту до концентрации 3% и этанол до концентрации 20-25% в фотометрируемом растворе. Фо- тометрирование раствора проводят при 510 нм. сл с