Способ дифференциальной диагностики гломерулонефрита и пиелонефрита у детей Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, и может быть использовано для диагностики пиелонефрита и гломерулонефрита у детей.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь из вены (или из пальца) в объеме 0,5-1,5 мл собирают в стекляь ную пробирку, содержащую гепарин в концентрации 20 ЕД/мл, и разбавляют средой 199 1:2. Мочевой осадок получают центрифугированием 5 мл мочи при 3000 об/мин в течение 5-7 мин и отмывают средой 199. Затем в две пробирки с внутренним диаметром 10- 12 мм вносят по 1,U-1,5 мл раствора фиколл-верографина с плотностью 1,376-1,078 г/см . Устанавливают про- бирки в наклонном положении под yi- лом 45° и осторожно пастеровской пипеткой наслаивают по стенке в разные пробирки 1,0-1,5 мл разбавленной iе- париниэированной крови и мочевого осад- ка. После тщательного уравновешивания пробирку центрифугируют при комнатной температуре в течение 20- 30 мин при 1500 об/мин. После центрифугирования лимфоциты находятся в виде опалесцирующего кольца в интерфазе между плазмой и градиентом рабочего раствора фиколл-верографина. Интерфазный слой отсасывают пастеровской пипеткой и переносят в отдельные пробирки, добавляя 1,5-2 мл среды 199 Отмывают полученные лимфоциты, центрифугируя при 1000-1500 об/мин в течение 5-10 мин. Эту процедуру повторяют дважды. После отмывания лимфо- циты ресуслендируют в среде 199 в объеме 0,2-0,5 мл в зависимости от их количества.

Для определения количества Т-лим- фоцитов в периферической крови и мо- че в пробирки вносят по 0,1-0,2 мл 0,5%-ной суспензии эритроцитов барана (ЭБ) и добавляют равный объем взвеси лимфоцитов в концентрации (1-2) 106 клеток/мл. Инкубируют смесь в течение 5 мин при 37°С, затем пробирки центрифугируют 5 мин при 500- 1000 об/мин и переносят в холодильник где выдерживают в течение 1 ч при 4 С.

После инкубации осторожным вращением

ресуспендируют осадок клеток и пипеткой Пастера каплю суспензии переносят в камеру Горяева. При увеличении микроскопа 400 (объектив -40, окуляр - 10 по; считывают розеткообразующие клет- ки (лимфоциты, которые прикрепили не менее трех эритроцитов) и лимфоциты, неприкрепившие ЭБ. Вычисляют процент Т-лимфоцитов, просматривая не менее 200 лимфоцитов, в препаратах крови и мочи. Внчиспяют отношение количества Т-лимфоцитов в периферической крови и моче и при его значении 4,5 и более диагностируют пиелонефрит, а при значении 1,5 и менее - гломерулонефрит.

Пример 1. Больная Б., 10 лет поступипа с диагноэом инфекции мочевых путей. При поступлении жалоб не предъявляла и поводом для госпитали

0

г

0

5

чации послужило обнаружение в общем анализе мочи лейкоцитурии и микро- протеинурии после перенесенного гриппа, когда отмечалась также дизурия. Данные общепринятых клинических ис следаваний не позволили установить локализацию патологического процесса. В периферической крови обнаружено 45% Т-лимфоцитов, а в мочевом осадке 10% Т-лимфоцитов, что указывало на наличие у больной пиелонефрита (соотношение Т-лимфоцитов в крови и моче 4,5). Этот диагноз был подтвержден данными рентгенорадиологического и функционального обследования.

Пример 2. Больная Н., 8 лет, диагноз: лейкоцитурия неясного гене- за. После перенесенной в июле острой распираторной вирусной инфекции в общем анализе мочи выявлена лейкоцитурия. Результаты клинического и общелабораторного обследования не позволили уточнить диагноз заболевания. При исследовании в периферической крови обнаружено 52% Т-лимфоцитов, а в мочевом осадке 6% Т-лимфоцитов. Соотношение Т-лимфоцитов в крови и моче равно 8,7. Данные определения Т- лимфоцитов в периферической крови и мочевом осадкр были характерны для пиелонефрита. Применение функциональных тестов, обзорной и экскреторной урографии, радиоизотопной ренографии позволило выявить изменения, которые были оценены как прявления острого необструктивного пиелонефчта.

Пример 3. Больной К., 7 лет, поступил с жалобами на боль в поясничной области, субфебрильную температуру, мочу темного Цвета. В анализе мочи обнаружены лейкоцитурия, эритроцитурия и микропротеинурия. По данным определения Т-лимфоцитов в периферической крови и мочевом осадке был установлен диагноз - гломерулонефрит, так как в периферической крови было обнаружено 45% Т-лимфоцитов, а в мочевом осадке 30% Т-лимфоцитов. Соотношение Т-лимфоцитов в крови и моче равно 1,5. В результате проведенного комплексного клинического, лабораторного, рентгенорадиологического и урологического обследования диагноз был подтвержден. Окончательный диагноз: острый гломерулонефрит с изолированным мочевым синдромом, активная стадия, без нарушения функции почек.

Предлагаемый способ диагностики заболеваний почек является наиболее эффективен, при установлении диагноза у больных пиелонефритом, особенно при его хронических, латентных формах, и больных гломерулонефритом с изолированным мочевым синдромом, когда клиническая симптоматика весьма скудная, а данные лабораторно- биохимических методик противоречивы и непостоянны. При этом специфичность и чувствительность составляют соответственно 87 и 94%.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики гломерулонефрита и пиелонефрита у детей путем исследования биологической жидкости, отличающийся теи, что, с целью повышения точности способа, в крови и моче больного определяют количество Т- лимфоцитов, рассчитывают отношение первого показателя к второму и при его значении.1,5 и менее диагностируют гломерулонефрит, а при значении А,5 и более - пиелонефрит.

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии и может быть использовано для дифференциальной диагностики пиелонефрита и гломерулонефрита у детей. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого в крови и моче больного определяют количество Т-лимфоцитов, рассчитывают их отношение и при значении этого показателя 1,5 и менее диагностируют гломерулонефрит, а при значении 4,5 и более - пиелонефрит. Забор крови в объеме 0,5-1,5 мл производят в пробирку, содержащую гепарин и среду 199. Мочевой осадок получают центрифугированием мочи при 3000 об/мин в течение 5-7 мин и отмывают средой 199. Затем в две пробирки вносят раствор фиколлверографина с плотностью 1,076-1,078 г/см² и на их стенки наслаивают 1,0-1,5 мл крови и мочевого осадка, центрифугируют в течение 20-30 мин при 1500 об/мин. Интерфазный слой отсасывают пастеровской пипеткой и добавляют 1,5-2,0 мл среды 199. Отмывают полученные лимфоциты. Для определения количества Т-лимфоцитов в пробирки вносят по 0,1-0,2 мл 0,51 суспензии эритроцитов барана и добавляют равный объем взвеси лимфоцитов в концентрации 1-2_х10⁶ клеток/лм. Смесь инкубируют и охлаждают в течение 1 ч при 4°С. Осадок ресуспендируют и каплю суспензии переносят в камеру Горяева. Подсчитывают розеткообразующие клетки и расчитывают отношение количества Т-лимфоцитов в периферической крови к моче. Специфичность и чувствительность способа составляют соответственно 87 и 94%.

Редактор Л.Веселовская

Составитель Н.Валеева Техред Л.Олийнык

Заказ 8094/51

Тираж 789

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

U Корректор К.Шароши

Подписное